视网膜母细胞瘤中DLC-1启动子甲基化异常

目的探讨肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的甲基化情况及与临床参数的关系。方法收集37例RB石蜡切片,4例正常眼部组织标本和2株RB细胞系(WERI-Rb1及Y79)。用甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)法定量检测DLC-1甲基化情况,用亚硫酸氢盐测序对其进行验证,并用RT-PCR检测WERI-Rb1和Y79细胞系中DLC-1 mRNA的表达。结果 35.1%的RB中存在DLC-1启动子甲基化,而在正常眼部组织中未发现甲基化;WERI-Rb1和Y79检测出DLC-1 mRNA表达。DLC-1启动子甲基化与肿瘤分化、伴随其他肿瘤和家族史均无显著关系,但单侧RB患者中的DLC-1甲基化率明显高于双侧患者(P<0.05)。结论 RB患者DLC-1启动子存在一定程度的甲基化,DLC-1甲基化在RB的发生、发展中具有一定的作用。

中国草地资源调查历程及规范化遥感解译框架探索

面对生态退化风险,我国草地资源迫切需要现代遥感技术建立规范化遥感解译框架来支撑草地新时期的调查与管理。本研究通过对文献分析和历史资料的整理,梳理我国草地资源调查工作历程,分析草地资源调查技术的进展与不足。在此基础上,结合遥感标准光谱端元空间的优势,勾画草地资源类型学-草地资源调查-管理之间的关联与尺度效应,提出多尺度融合嵌套的草地资源遥感解译框架,并建议推动草地系统知识共享平台的搭建,为草地资源适应性管理研究与实践提供重要支撑。

库布齐沙漠地区生态系统格局演变及其驱动力分析

【目的】研究库布齐沙漠地区生态系统格局演变及其驱动力,厘清不同驱动因子对生态系统格局变化的影响程度,进而提出针对性的改进措施,为库布齐沙漠地区生态保护和高质量发展提供科学依据和决策支持。【方法】采用生态系统变化幅度、年变化率、动态度及景观格局指数分析了库布齐沙漠地区2000-2018年生态系统格局和演变特征,及主要驱动力对生态系统变化的贡献。【结果】(1)库布齐沙漠地区生态系统以草地、裸地和农田为主,三者共占91.46%,水域、建设用地和林地占比都很小。(2)研究期内,库布齐沙漠地区生态系统农田、草地和建设用地面积增加,林地、水域和裸地面积减少,生态系统演变以裸地转换为草地为主,同时草地转换为裸地也较为明显。(3)研究期内生态系统景观破碎化程度和景观多样性指数均上升。(4)生态保护与修复是生态系统格局演变的首要驱动力,贡献率为44.53%;土地退化是引发生态系统变化的第二驱动力,贡献率为23.87%;农田扩张、城镇化建设和水资源开发的贡献率分别为17.72%、8.51%和5.37%。【结论】为实现库布齐沙漠地区生态系统可持续发展,应科学实施生态保护修复工程,统筹推进山水林田湖草沙综合治理、系统治理、源头治理,重点防止土地退化,合理开发利用耕地,促进生态系统良性循环,维护区域生态安全。

1961—2019年阿富汗土地资源承载力变化研究——基于膳食营养当量视角

为了我国周边安全和“一带一路”倡议的顺利推进,应充分认识阿富汗地区的粮食安全问题及土地承载力演变情况。本研究从膳食营养需求的角度出发,通过构建土地资源承载力评价模型,研究了近六十年来阿富汗地区土地资源承载力变化情况,并根据未来不同情景,探讨了阿富汗地区土地资源承载力的优化路径。结果表明:随着膳食营养需求和人口的增加,阿富汗地区土地资源已无法满足本国居民的消费需求,土地资源承载压力逐渐增加,已经由基本平衡阶段(1961—1978)和态势趋紧阶段(1979—1998),演变为人地矛盾突出阶段(1999—2019)。从三种膳食营养当量(热量、蛋白质和脂肪)来看,阿富汗地区土地资源均处于超载状态,其中基于脂肪需求的土地资源承载压力最大。为了满足当地食物消费需求增长和土地资源的可持续发展,阿富汗当局一方面应大力推行“毒改粮”政策并提高土地生产力,另一方面也应当积极引导合适健康饮食。此外,本文还探讨了影响阿富汗土地资源承载力的主要因素,以期为进一步缓解与改善阿富汗地区粮食安全问题及其人地关系提供参考。

采用荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变

目的建立荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，评估JAK2 V617F突变在诊断骨髓增殖性疾病和白血病中的临床意义。方法选取71例慢性粒细胞性白血病（CML）、22例原发性血小板增多症（ET）、11例原发性骨髓纤维化（PMF）、9例真性红细胞增多症（PV）、7例嗜酸粒细胞增多症患者，分别采用荧光定量PCR、突变特异性扩增系统（ARMS）对JAK2 V617F突变进行检测，并采用基因测序对结果进行验证。将具有JAK2 V617F纯合子突变的人类红白血病细胞株（HEL）DNA作为阳性对照，比较荧光定量PCR和ARMS对JAK2基因V617F突变的检测敏感度。结果采用荧光定量PCR检测，野生型的熔解温度（Tm）峰出现于（75．0±0．2）℃处，突变型的Tm峰出现于（76．6±0．2）℃处。JAK2基因V617F突变在PV、ET、PMF等骨髓增殖性疾病中的检出率分别为8例（88．9％）、12例（54．5％）、7例（63．6％），但在71例CML中只检出1例（1．4％）。荧光定量PCR与ARMS的结果符合率为100％，结果经过测序证实。使用荧光定量PCR法可在每10^6个正常白细胞中检出低至10^2个HEL细胞，而使用ARMS方法时要在每10^6个正常白细胞中HEL细胞达到10^4个时，方可检测出，前者比后者方法灵敏100倍。结论成功地建立了荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，比ARMS更灵敏、简便，适合临床使用。JAK2基因V617F突变在骨髓增殖性疾病中有较高的检出率，可作为骨髓增殖性疾病特异性诊断指标。

中国男性痛风患者SLC2A9基因单核苷酸多态性与尿酸水平的关系

目的SLC2A9是新近发现的尿酸转运子，该基因单核苷酸多态性可影响血清尿酸水平。本研究检测SLC2A9基因第6内含子rs7442295多态性在中国男性痛风和原发性高尿酸血症患者中的分布情况以及与尿酸代谢指标的相关性。方法选取268例原发性痛风患者和288名健康志愿者，分别检测血压、体质量指数、血尿酸、血糖、血脂、肾功能水平，并同时提取外周血DNA，运用高分辨率熔解曲线（HRM）分析rs7442295基因型，并用测序法证实。统计学方法采用矿检验及t检验。结果运用HRM技术能准确区分rs7442295～A和A／G基因型，而G／G基因型则在本研究人群中未发现。A／A和A／G基因型在人群分布频率分别是96．2％和3．8％。与健康对照组相比，痛风组的A／A和A／G基因型频率及A、G等位基因频率分布差异无统计学意义（矿=0．003，P=0．82；x2=0．003，P=1．00），但携带A／G基因型个体的尿酸水平[（293±100）μmol／L]明显低于携带A／A基因型的个体[（392±133）μmol／L]（t=2．426，P〈0．01），且正常尿酸组内A／G基因型频率明显高于高尿酸组0（2=6．279，P=0．01），基于HRM技术的基因分型结果与测序法所得结果完全一致。结论SLC2A9基因~7442295多态性可能是评估中国汉族男性人群原发性高尿酸血症危险性的一个遗传学标志，HRM技术简单、方便、快速，并实现闭管检测，非常适合单核苷酸多态性分析。

前列腺癌组织中DLC-1启动子甲基化定量检测的HRM方法建立及其应用意义

目的建立HRM技术定量检测DLC-1启动子甲基化的方法，并分析探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌病理参数的相关性。方法选取89份前列腺癌组织以及10份匹配癌旁组织标本，采用LCM收集肿瘤细胞群，抽提DNA后进行甲基化修饰。以CpGenomeUniversal Methylated DNA作为100％甲基化样本，以100％非甲基化的健康人外周血DNA作为稀释剂，分别制成100％、80％、50％、30％、10％、0％系列浓度的标准曲线，并进行重复性和灵敏性评价。同时用HRM技术定量检测前列腺癌细胞中DLC-1甲基化水平，探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌患者年龄、PSA水平与前列腺癌TNM的关系。结果100％、80％、50％、30％、10％、0％甲基化标准品的HRM熔解曲线从右往左依次排列，10份癌旁组织标本、35份前列腺癌组织标本重叠在0％标准曲线上；5份前列腺癌组织标本位于0％～30％区域内，29份位于31％～80％区域内，20份位于81％-100％区域内。HRM技术最低检测限可达10％的甲基化水平，优于MSP检测（30％甲基化水平）。DLC-1甲基化水平与前列腺癌患者年龄无明显相关（χ2=3．29，P=0．19），与PSA水平也无相关性（χ2=2．04，P=0．36），但DLC-1甲基化水平与TNM分期显著相关（r=9．04，P=0．01），且随TNM分期增高而增高。结论成功建立的HRM技术定量检测DLC-1甲基化水平的方法稳定、灵敏、操作简单，DLC-1启动子甲基化有望成为评估前列腺癌TNM的分子指标。

人类白细胞抗原B＊5801与别嘌醇诱发重症药疹相关性研究

目的 调查中国大陆人群中HLA-B＊ 5801等位基因与别嘌醇和非别嘌醇药物诱发重症药疹的相关性,评估HLA-B＊5801作为别嘌醇诱发重症药疹危险性预测指标的临床价值.方法 分别收集43例和133例服用别嘌醇后发生或未发生重症药疹的患者,96例服用除别嘌醇外其他药物诱发重症药疹的患者,以及148名健康对照,采用PCR-序列特异引物（SSP）检测HLA-B ＊ 5801等位基因携带情况,并以x2检验作统计学分析.结果 43例服用别嘌醇后出现重症药疹患者样本中有40例携带HLA-B＊ 5801等位基因（93.o％）,148名健康对照中则只有19名（12.8％）,差异有统计学意义（x2=100.353,P＜0.01）;133例别嘌醇耐受病例中有10例携带HLA-B ＊ 5801（7.5％）,与对照组相比差异无统计学意义（x2=2.141,P＞0.05）;96例由其他药物诱发重症药疹的样本中有14例携带HLA-B＊ 5801（14.6％）,与对照组相比差异无统计学意义（x2=0.152,P＞0.05）.结论 HLA-B＊ 5801可作为别嘌醇服用患者特异性的服药前预测指标,可以指导高尿酸患者对降尿酸药物的选择.

运用高分辨率熔解曲线技术检测痛风患者SLC22A12基因intron5（＋4668C/T）多态性

目的 采用高分辨率熔解曲线（HRM）方法检测痛风患者SLC22A12基因intron5（＋4668C/T）单核苷酸多态性（SNP）,并分析该多态性与高尿酸血症患者临床特征的相关性.方法 选取101例原发性痛风患者和186名健康志愿者,分别记录血压、体质量指数,榆测血尿酸、血糖、血脂、肌酐水平,提取外周血DNA,扩增SLC22A12基因5号内含子片段,并采用HRM技术分析其多态性,并用测序法证实,临床数据和基1月型的关系采用方差分析.结果 ①成功地在SLC22A12基因5号内含子内发现一新的SNP位点,命名为intron5（＋4668C/T）.HRM技术检测能准确区分CC、CT和TT基因型,其结果与测序法一致.②3种基因型在男性、女性个体中的分布分别为：28.1%、33.7%、38.2%;20.0%、47.1%、32.9%.③无论在男性组内还是女性组内,体质量、血压、肌酐、总胆固醇和甘油三酯中各基因型分布差异均无统计学意义,但各组内CC基因型的尿酸水平明显高于CT＋TT基因型的尿酸水平.④低尿酸组内CC基因型和CT＋TT基因型频率与高尿酸组相比,差异有统计学意义（21.2%,78.8%,35.0%,65.0%;p〈0.05）.结论 建立了对SLC22A12基因5号内含子新的SNP位点简单、快速和精确的分析方法;推测intron5（＋4668C/T）中T等位基因可能为中国人高尿酸血症的遗传保护因子.

运用高分辨率熔解技术检测骨髓增殖性疾病患者JAK2 V617F突变

JAK2基因V617F突变与真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）、原发性骨髓纤维化（PMF）等慢性骨髓增殖性疾病（MPD）的病理变化明显相关，在新修订的2008年WHO分类系统中，有无JAK2突变已经成为慢性MPD主要的诊断指标。目前多采用PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）、突变特异性扩增系统（ARMS）或者测序分析对JAK2突变进行检测，但前二者存在假阳性或灵敏度较低，后者检测较为准确但所需要时间较长，均不适合临床诊断。

全自动单核苷酸多态性分析仪检测JAK2基因V617F突变试验的性能评价

目的根据ISO15189认可要求评价全自动单核苷酸多态性分析仪i－densy IS－5320平台检测骨髓增殖性肿瘤患者JAK2基因V617F突变。方法仪器性能验证。选择2014年12月至2017年2月间复旦大学附属华山医院JAK2基因V617F突变阳性外周血标本20例，JAK2基因V617F突变阴性的外周血标本20例，以TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR作为对照方法，经测序方法验证评价仪器直接检测全血JAK2基因V617F突变的准确性。使用全血样本分别评估检测平台的检测重复性、携带污染与交叉污染，以及抗干扰能力。取HEL细胞与HCT116细胞为突变型对照和野生型对照，配制12种不同突变细胞比例样本进行检测，以此评价检测突变负荷的能力。结果i－densy IS－5320平台与TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法检测完全一致；批内重复性与批间重复性为100%；未观察到携带污染与交叉污染；高胆红素（总胆红素：〉20.4 μmol/L）与高甘油三酯（甘油三酯：〉1.8 mmol/L）血样本对突变检测无明显干扰；该平台能够稳定检出负荷低至0.25%的突变。结论i－densy IS－5320可实现对全血直接进行JAK2基因V617F突变检测，具备较高的灵敏度、准确度和稳定性，操作简便，能够达到临床对突变的检测要求。

基于二代测序的定制化基因panel检测骨髓增殖性肿瘤突变谱

目的利用由50个靶基因所组成的测序panel,分析骨髓增殖性肿瘤(MPN)三种主要亚型原发性血小板增多症(ET),真性红细胞增多症(PV),以及原发性骨髓纤维化(PMF)的突变谱,以便为该病的诊断和预后提供有价值的信息。方法回顾性研究方式,收集2010年至2017年间来自华山医院以及长海医院血液科的MPN患者标本共53例。所有患者的诊断均符合2016年WHO的诊断标准,包括ET31例(男11例,女20例,中位数年龄55岁),PV17例(男12例,女5例,中位数年龄65岁),PMF5例(男4例,女1例,中位数年龄67岁),并进行其骨髓或者血液标本DNA的二代测序。根据COSMIC,dbSNP,Clinvar等公共数据库对测序结果进行分析,绘制MPN人群的突变谱,并结合患者的临床随访资料进行解读。结果除去典型的JAK2、CALR、MPL突变,还检测出了另外11种基因的致病性突变,以及4种与赋予个体MPN疾病易感性相关的寡核苷酸多态性(SNP)位点(rs4858647,rs9376092,rs58270997,rs621940)。平均每个患者的突变基因数目为2.3个。全部患者(53例)中,基因突变频率由高到低依次为TET2(40%),EZH2(26%),ASXL1(11%),MIR662(6%),SF3B1(6%),BARD1(6%),DNMT3A(4%),KIT(2%),RUNX1(2%),TP53(2%),NRAS(2%)。结论利用靶向基因二代测序技术,能实现一次性对多例典型的BCR-ABL阴性的MPN患者进行多基因外显子测序,检测周期可缩短至两天,可以发现除了JAK2、CALR、MPL突变之外其他的致病性突变,在临床有较好的应用前景。