三种磷脂酶A1活力测定方法的比较

三种常用的磷脂酶A1活力测定的方法分别为碱滴定法、双层平板法和分光光度法。通过对磷脂酶A1标准品和实验室产磷脂酶A1菌株的活力进行测定,比较这三种方法在时间、准确性和精确性方面的差异。结果得出分光光度法具有耗时短、底物用量少、结果稳定、精确性好的优点。

分光光度计法测定磷脂酶A1酶活条件优化

优化了分光光度计法测定Lecitase Ultra的磷脂酶A1活力的相关参数。根据单因素实验结果选择底物浓度、酶稀释倍数、pH值3个因素进行正交实验,经分析得到酶活测定的最佳条件为:酶稀释倍数为1 250倍,缓冲体系pH值为6.5,离子强度为50 mM,底物浓度为6%,终止酶反应方式为加入0.4M TCA溶液。优化后酶活最高值为4 876.9 U/mL,较原工艺提高了18.42%。

Fe_3O_4纳米材料的制备及其抗菌性

以氯化亚铁、草酸和水合肼为原料,采用水热法制备出Fe3O4纳米材料。用X射线衍射仪(XRD)和扫描电子显微镜(SEM)对产品的结构、形貌和尺寸进行了表征。考察了Fe3O4纳米材料的形成条件,并研究了Fe3O4纳米材料的抗菌性。实验结果表明:Fe3O4纳米材料对甲基营养型芽孢杆菌有一定的抑制作用。

磷脂酶A1高产菌株的筛选及其等离子体诱变

目的从富油土壤中筛选磷脂酶A1高产菌株,优化其发酵条件,并经等离子诱变提高其产酶能力。方法用筛选培养基和发酵培养基分别对富油土壤中磷脂酶A1产生菌进行初筛和复筛,经气相色谱鉴定产酶类型;对获得的高产菌株进行形态、生理生化特征和分子生物学鉴定;优化该菌株的发酵时间,温度,pH值及摇床转速;从该菌株出发进行等离子体诱变,绘制致死率曲线,进行平板初筛及摇瓶复筛,并检测获得菌株的遗传稳定性。结果经初筛和复筛,获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,经气相色谱鉴定其产酶为磷脂酶A1;该菌株在普通琼脂培养基上呈圆形,质地软,表面光滑、扁平,乳白色,晕圈明显,为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌;最佳发酵条件为:发酵时间12 h,初始pH 8.0,温度32℃,摇床转速200 r/min,优化后酶活为9.12 U/ml,较优化前(6.74 U/ml)提高了35.3%;等离子体诱变后,经平板及摇瓶筛选,获得的菌株W22-5酶活最高,为12.80 U/ml,较诱变前(9.12 U/ml)提高了89.91%,且具有良好的遗传稳定性。结论成功获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,优化了该菌的发酵条件,且经等离子诱变进一步提高了菌株的产酶能力,为磷脂酶A1的生产和应用奠定了基础。

基因组改组选育产酯化酶地衣芽孢杆菌

从高温大曲中筛选到一株产酯化酶的地衣芽胞杆菌G2。采用低温等离子体对G2进行诱变,以筛选酶活提高最多的3株菌株作为亲本。将亲本原生质体灭活后对其进行基因组改组。将融合后的菌体进行筛选纯化之后,对融合子进行发酵测定其酶活并挑选酶活较高菌株进行传代测定其酶活稳定性。结果表明6#融合子酶活最高且稳定为10.7U/ml,相对于初始菌株的5.3U/ml提高了102%。对其发酵液进行气相色谱分析表明,6#融合子代谢产一定量的酸类、酯类及醇类等物质,其中乙偶姻含量达2565mg/L。

粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因大肠杆菌优化表达

以粘质沙雷氏菌PL-06基因组为模板扩增得到磷脂酶A1基因plaA和含有辅助蛋白的磷脂酶A1基因plaB。plaA和plaB基因与pET-28a(+)连接后转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,得到基因工程菌AP28和BP28。AP28最佳的诱导表达条件为诱导初始OD600值0.5,IPTG浓度为0.2mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为4h,优化后磷脂酶A1蛋白表达水平从32%上升至46%,包涵体复性的磷脂酶A1酶活从10.8U/ml上升到12U/ml,相对于BP28工程菌,目的蛋白的表达对宿主细胞毒性小,而且得到的蛋白容易纯化。因此通过优化磷脂酶A1基因plaA的诱导条件,使磷脂酶A1以大量的包涵体形式表达,从而得到较高活性的磷脂酶A1并避免其对宿主细胞的毒性是可行的,而且可以得到大量纯化的磷脂酶A1蛋白,方便下一步的研究。

基因组改组选育磷脂酶A1生产菌

以蜡样芽胞杆菌W22为出发菌株,通过紫外诱变和等离子体诱变得到若干株酶活力提高的突变株。以紫外诱变突变菌株W22-a、W22-g和等离子诱变菌株W22-5为基因组改组的亲本,考察了原生质体的制备、灭活条件。原生质体的最佳制备条件是:溶菌酶浓度0.5mg/ml,酶解时间90min,反应温度25℃,预处理甘氨酸浓度为20mg/ml。选择紫外灭活160秒、热灭活16分钟的剂量来完成亲本原生质体的灭活。从众多融合子中筛得一株突变株WR2-2,发酵酶活为17.78U/ml,相对于出发菌株W22(9.22U/ml)提高酶活达92.8%。