目的:研究不同浓度镁离子对成骨细胞活力和分化的影响,并探讨镁基生物材料促进骨再生的机制。方法:分离培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞,之后将细胞分别在DMEM培养基(含有0.8 m M镁离子;对照组)和含有6 m M、10 m M、18 m M镁离子(实验组)的...目的:研究不同浓度镁离子对成骨细胞活力和分化的影响,并探讨镁基生物材料促进骨再生的机制。方法:分离培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞,之后将细胞分别在DMEM培养基(含有0.8 m M镁离子;对照组)和含有6 m M、10 m M、18 m M镁离子(实验组)的培养基中进行培养,通过MTT法测定细胞活力,ALP活力、茜素红染色法测定成骨细胞的分化,通过western blot法测定不同浓度镁离子组中PI3K/Akt信号通路的表达情况。结果:6 m M、10 m M镁离子组成骨细胞活力、ALP活力、基质矿化水平较对照组明显增加(P<0.05),18 m M镁离子组成骨细胞活力、ALP活力、基质矿化水平对照组明显降低(P<0.05)。在10 m M镁离子组加入wortmannin后,上述增强的结果受到抑制。结论:6-10 m M镁离子促进成骨细胞的活力和分化,而过高浓度镁离子(18 m M)对成骨细胞的活力和分化具有抑制作用。10 m M镁离子通过激活PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的活力和分化。这项研究为医用镁基生物材料的进一步研究提供了很好的参考作用。展开更多
文摘目的探讨长链非编码RNA MIR155宿主基因(MIR155 host gene,MIR155HG)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的骨关节炎软骨细胞炎性损伤的调控作用和机制。方法采用10 ng/mL的IL-1β刺激软骨细胞24 h来建立骨关节炎的细胞模型。软骨细胞分为对照组、模型组(IL-1β刺激软骨细胞)、模型+si-阴性对照(negative control,NC)组(转染NC siRNA 48 h,再进行IL-1β刺激)和模型+si-MIR155HG组(转染MIR155HG siRNA 48 h,再进行IL-1β刺激)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应RT-qPCR检测MIR155HG的表达水平。采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯(Calcein acetoxymethyl ester,Calcein AM)细胞活性检测试剂盒检测软骨细胞的存活率。采用原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测软骨细胞凋亡。采用Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell CLL/lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、Ⅱ型胶原α1(collagen type II alpha 1,COL2A1)、含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family pyrin domain containing protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis associated speck like protein containing a CARD,ASC)和Caspase-1的蛋白表达水平的蛋白表达水平。采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测细胞炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-18(interleukin-18,IL-18)的浓度。结果与对照组比较,模型组的MIR155HG表达水平显著升高(P<0.01)。与模型+si-NC组比较,模型+si-MIR155HG组的MIR155HG表达水平显著降低(P<0.01)。与对照组比较,模型组和模型+si-NC组软骨细胞的存活率显著降低(P<0.01),细胞凋亡水平显著升高(P<0.01),细胞外基质降解显著增加(P<0.01),IL-6、TNF-α和IL-18的浓度显著升高(P<0.01),NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组和模型+si-NC组比较,模型+si-MIR155HG组软骨细胞的存活率显著提高(P<0.01),细胞凋亡水平显著下降(P<0.01),细胞外基质降解显著降低(P<0.01),IL-6、TNF-α和IL-18浓度显著下降(P<0.01),NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论基因沉默lncRNA MIR155HG可以缓解IL-1β诱导的软骨细胞炎症损伤,其保护作用可能是通过抑制NLRP3炎症小体的激活来实现的。
文摘目的:研究不同浓度镁离子对成骨细胞活力和分化的影响,并探讨镁基生物材料促进骨再生的机制。方法:分离培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞,之后将细胞分别在DMEM培养基(含有0.8 m M镁离子;对照组)和含有6 m M、10 m M、18 m M镁离子(实验组)的培养基中进行培养,通过MTT法测定细胞活力,ALP活力、茜素红染色法测定成骨细胞的分化,通过western blot法测定不同浓度镁离子组中PI3K/Akt信号通路的表达情况。结果:6 m M、10 m M镁离子组成骨细胞活力、ALP活力、基质矿化水平较对照组明显增加(P<0.05),18 m M镁离子组成骨细胞活力、ALP活力、基质矿化水平对照组明显降低(P<0.05)。在10 m M镁离子组加入wortmannin后,上述增强的结果受到抑制。结论:6-10 m M镁离子促进成骨细胞的活力和分化,而过高浓度镁离子(18 m M)对成骨细胞的活力和分化具有抑制作用。10 m M镁离子通过激活PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的活力和分化。这项研究为医用镁基生物材料的进一步研究提供了很好的参考作用。
