基于表面增强拉曼光谱的无标记检测蛇毒平台的建立

蛇毒主要含有酶类的毒性蛋白质、多肽类化合物,而快速、准确地鉴别蛇毒种类可以有效提高中毒患者救治率。目前鉴定蛇毒的技术包括凝集测试法、酶联免疫吸附法等,但上述检测方法存在检测灵敏度不高、易发生假阴性或假阳性的问题。本工作创新性地设计了一种基于表面增强拉曼光谱的两步法增强基底蛇毒检测技术平台。通过该新型增强基底,可以稳定、准确地捕获蛇毒金属蛋白酶的拉曼信号。这一平台为不同蛇毒的鉴别提供了研究基础,具有重要的研究意义。

大学毕业生从事乡村振兴相关行业的现状及影响因素——基于河南省高等院校毕业生问卷调查及实证分析

为提高人才从事乡村振兴相关行业的积极性,推动乡村振兴战略实施,对河南省大学毕业生开展问卷调查,探讨河南省大学毕业生从事乡村振兴相关行业的现状。然后,从家庭因素、就业环境与就业条件3方面构建评价指标体系,利用二元Logistic回归法,测算影响大学毕业生从事乡村振兴相关行业的因素。结果表明:家庭因素方面,家人朋友是否支持会对就业现状产生显著的负向影响,家庭年收入会对就业现状产生显著的正向影响;就业环境方面,就业政策、高校引导、专业优势对毕业生从事乡村振兴相关行业具有正向促进作用,产业扶持与毕业生从事乡村振兴相关行业具有负向作用;就业条件方面,薪资待遇和就业机会两个因素对大学生从事乡村振兴相关行业具有显著正向促进作用。最后,根据结论,提出激励大学生毕业从事乡村振兴相关行业的对策。

成纤维细胞增殖通路相关9个基因可以预测糖尿病足的发生

目的基于血浆游离DNA(cfDNA)探究成纤维细胞增殖通路相关的5-羟甲基胞嘧啶修饰基因对糖尿病足(Diabetic foot ulcer,DFU)和糖尿病(Diabetic mellitus,DM)患者的区分。方法收集2021年1-12月就诊于北京大学第三附属医院确诊为DFU患者血浆6例和DM患者血浆14例,提取cfDNA,使用5hmC-Seal技术建立文库后,依托Illumina高通量测序平台进行测序,筛选差异羟甲基化修饰基因(DhMGs)。采用GSVA富集分析方法对DhMGs富集分析,使用STRING数据库和Cytoscape3.9.0对GSVA富集中|log_(2)FoldChange|变化最大的成纤维细胞增殖通路中的18个DhMGs进行分析,使用STRING数据库和Cytoscape3.9.0得到9个关键枢纽基因(Hub基因),最后使用Hub基因通过岭回归建模区分DFU组和DM组,并使用RNA-seq数据验证。结果分析得出DFU组与DM组DhMGs共有5748个,通过GSVA富集中|log_(2)FoldChange|变化最大的成纤维细胞增殖通路中的18个DhMGs进行分析,使用STRING数据库和Cytoscape3.9.0得到9个Hub基因,使用岭回归建模得到AUC为1.000,使用RNA-seq数据对9个基因建模的AUC为0.962。结论本研究基于5hmC-Seal技术探究DFU和DM患者血浆cfDNA中5hmC变化,在5hmC的水平发现成纤维细胞增殖通路的重要性,通路中的9个基因能够预测糖尿病足患者。

基于高通量测序技术探究糖尿病足与健康人组织DNA中的5-羟甲基胞嘧啶变化

目的 5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)作为表观遗传物质被广泛研究,但在糖尿病足的研究中较少。文中旨在研究糖尿病足患者(DFU)和健康志愿者组织基因组DNA中的5hmC的差异变化。方法 收集2021年1~12月就诊于北京大学第三附属医院确诊为DFU患者组织6例(DFU组)和Normal组织3例(对照组)。提取组织DNA,使用5hmC-Seal技术建立文库和Illumina高通量测序技术测序,筛选差异羟甲基化修饰基因(DhMGs)。采用STRING数据库构建蛋白互作网络,通过Cytoscape3.9.0软件绘制DhMGs的调控网络,并通过CytoHubba功能筛选出关键枢纽基因(Hub基因),采用DAVID数据库对Hub基因进行GO及KEGG富集分析,最后使用qRT-PCR和免疫组化进行验证。结果 共有166个上调基因和262个下调基因,其中包括NDUFB6、GALR1、GDAP1等已知的与糖尿病并发症相关的基因。DhMGs主要分布在内含子、基因间和启动子区域。通过CytoHubba分析可得到10个Hub DhMGs,分别是MAPK14、MAPK11、CDC42、MAP3K1、NCOA1、RAP1B、AGO4、RUNX1、HIF1A、PHC3。对10个Hub基因进行富集分析,在生物过程中涉及到VEGFR信号通路、Ras蛋白信号转导、肌细胞分化的正向调节以及与免疫相关的白细胞介素12分泌的正向调节等;在细胞成分中主要与细胞质、胞液等相关;在分子功能中主要有细分化调控、血管内皮生长因子受体信号通路、髓样细胞分化调控等功能。KEGG分析显示Hub基因主要富集于白细胞跨内皮细胞迁移、有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路等。最后通过qRT-PCR和免疫组化实验得出MAPK11和CDC42在DFU组织中的表达水平均明显升高(P<0.05)。结论 糖尿病足和健康人组织DNA的5hmC修饰具有差异,MAPK11和CDC42可能成为DFU潜在的治疗靶点。

基于5hmC-Seal测序技术检测糖尿病肾病患者血浆游离DNA中5-羟甲基胞嘧啶的变化

目的通过生物信息学方法筛选血浆游离DNA来源的糖尿病肾病中的关键差异通路和羟甲基化修饰基因,为寻找诊断糖尿病肾病的生物标志物及阐明其潜在的分子机制奠定基础。方法利用5hmC-Seal测序方法对糖尿病和糖尿病肾病患者血浆游离DNA的5-羟甲基胞嘧啶进行富集,并通过测序得到全基因组5-羟甲基胞嘧啶,对两组患者进行差异分析得到差异羟甲基化基因,再利用差异基因的羟甲基化水平进行基因集变异分析,最后再对富集到的差异通路里的差异基因通过MCODE插件筛选关键基因,并进行单基因和多基因诊断疾病的准确性分析。结果基因集变异分析得到在糖尿病和糖尿病肾病两组患者中的差异通路:神经活性配体受体相互作用通路、肾脏上皮通路、趋化因子信号通路和已有文献报道与糖尿病肾病发病机制相关的Wnt信号通路,Wnt信号通路中富集到18个差异羟甲基化基因,通过MCODE筛选到关键模块基因有11个,分别为CTNNB1、GSK3B、CREBBP、CUL1、NFATC1、CCND3、WNT11、PRKACB、DKK1、SMAD3、CCND1,最后进行ROC分析有9个基因的诊断效能较好(AUC值≥0.8):CTNNB1、GSK3B、CREBBP、CUL1、NFATC1、WNT11、PRKACB、DKK1、CCND1。结论本研究羟甲基化测序结果表明,Wnt信号通路在糖尿病肾病发生发展中的关键作用,CTNNB1、GSK3B、CREBBP、CUL1、NFATC1、WNT11、PRKACB、DKK1、CCND1有可能成为诊断糖尿病肾病的生物标志物。

糖尿病肾病患者血浆细胞游离DNA中羟甲基化修饰lncRNA的筛选及其ceRNA调控网络构建

目的筛选糖尿病肾病(DKD)患者血浆细胞游离DNA(cfDNA)中5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)修饰的关键ln⁃cRNA,并构建其ceRNA调控网络。方法收集14例糖尿病患者和17例DKD患者的血浆样本,利用5hmC-Seal技术对cfDNA进行全基因组5hmC富集,通过加权基因共表达网络(WGCNA)方法筛选差异关键lncRNA,然后使用Star⁃base预测lncRNA的靶向miRNA,经PCR法验证糖尿病肾病模型小鼠肾组织中可预测出靶向miRNA的相关lncRNA mRNA的表达水平,再通过TargetScan、miRDB预测miRNA的靶向mRNA,使用Metascape对mRNA进行富集分析,运用Cytoscape进行构建内源竞争RNA调控网络。结果DKD组与糖尿病组的差异羟甲基化基因共1644个,WGCNA分析得到关键差异lncRNA 15个。通过数据库预测出下游靶向miRNA的lncRNA有2个,分别为LINC00863和LINC00641,对于DKD的诊断准确性均较高(AUC≥0.8),在DKD小鼠肾组织中验证lncRNA的表达水平与预测结果一致。将预测得到的靶向miRNA的下游mRNA与DKD组织转录组差异基因验证分析得到246个靶mRNA,并成功构建DKD的lncRNA-miRNA-mRNA调节网络。结论从DKD患者血浆cfDNA中筛选得到5hmC修饰的关键差异lncRNA 15个,并对其中有下游靶向miRNA的LINC00863和LINC00641成功构建其ceRNA调控网络;LINC00863和LINC00641可能成为DKD诊断标志物和治疗靶点。

关于防疫常态化背景下中职班主任管理工作中德育教育的思考

中职学校班主任对学生思想观的正确树立有着重大影响。作为班主任要建立适应新时代下教育发展需求的班级管理方法,把“管”与“育”放在同一高度,做到德育并重。本文从防疫常态化背景下中职学生面临的主要问题、中职班主任德育工作开展现状、中职班主任管理工作中开展德育教育的具体策略三个方面来描述对防疫常态化背景下中职班主任管理工作中德育教育的思考。

“1+X”证书制度下的“汽车发动机构造与维修”课程改革的思考

推行“1+X”证书制度,给中职院校的汽修专业课程提出了挑战,而实现“1+X”证书制度,推动中职院校良性发展的前提是进行好科学的教学改革。“1+X”证书制度的推行可以弥补传统“汽车发动机构造与维修”课程教学中存在的不足,但推行“1+X”证书制度也存在很多阻碍。文中,作者将从“1+X”制度的重要意义;传统“汽车发动机构造与维修”课程教学中存在的不足及推行“1+X”证书制度的阻碍;推行“1+X”证书制度下的“汽车发动机构造与维修”课程设计与实施;“1+X”证书制度下的中职“汽车发动机构造与维修”课程改革实施路径四个方面阐述“1+X”证书制度下的“汽车发动机构造与维修”课程改革的思考。

“互联网+”背景下推进中等职业教育课堂变革的探究

我国的职业教育由于地域、市场需要、社会环境等因素的影响,造成了学校之间发展的不均衡。在“互联网+”背景下,中等职业教育正经历着一场全方位的变革。“互联网+”背景下的教育信息化,使职业教育的传统课堂发生重大变化,“互联网+教育”背景下中等职业教育课堂呈现出新形态。为推动职业教育迈向现代化,可以从搭建中职院校信息化资源共享平台,提升教师信息技术素养,革新教师、学生、家长的观念,坚持互联网信息技术赋能教育等方面着力,有效推进中职课堂变革。

胡芦巴总皂苷对小鼠抗疲劳功能的研究

目的 研究胡芦巴总皂苷(TFGs)缓解小鼠疲劳的药效。方法 取5批BALB/c小鼠(每批75只),随机分为对照组(纯水20 mL·kg^(-1))、阳性药组(西洋参含片625.0 mg·kg^(-1))和低、中、高剂量TFGs组(65, 130,260 mg·kg^(-1)TFGs),每组15只,灌胃给药30 d后,对每批小鼠以不同的处理方式检测相关药效学指标,并运用网络药理学预测潜在作用机制。结果 对照组,低、中、高剂量TFGs组和阳性药组小鼠血乳酸曲线下面积(比值)分别为(264.77±41.26),(247.81±28.37),(210.60±34.46),(225.57±42.11),(224.27±22.00),血清尿素氮水平分别为(9.64±1.05),(8.70±1.22),(7.33±0.86),(7.43±1.07),(7.88±1.14)mmol·L^(-1),丙二醛水平分别为(9.06±2.03),(7.24±1.67),(7.04±1.29),(6.60±2.06),(7.04±2.10)nmol·mg^(-1)port,肌糖原水平分别为(0.72±0.10),(0.89±0.32),(1.07±0.24),(1.26±0.31),(1.02±0.15)mg·g^(-1),超氧化物歧化酶水平分别为(106.54±32.73),(126.10±20.89),(135.78±27.44),(139.39±18.87),(127.67±30.43)U·mg^(-1)port,谷胱甘肽过氧化物酶分别为(189.03±59.27),(245.62±56.54),(296.02±54.68),(264.58±57.42),(287.33±85.53)U·mg^(-1)port,总抗氧化能力水平分别为(5.27±2.01),(6.49±1.78),(9.33±2.26),(8.05±2.15),(9.95±2.45)U·mg^(-1)port,肝糖原水平分别为(6.44±1.21),(6.07±1.94),(8.33±3.09),(8.30±1.69),(8.74±2.48)mg·g^(-1)。与对照组比较,中、高剂量TFGs组显著延长小鼠负重游泳时间,且降低血乳酸、血清尿素氮、丙二醛水平,提高肌糖原、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化能力水平,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),肝糖原水平无统计学意义,有效缓解小鼠疲劳症状。胡芦巴中有12个潜在活性成分,主要功效物质为皂苷类,作用机制与80个基因,多条氧化应激通路相关。结论 TFGs有缓解疲劳的药效,作用机制与抗氧化密切相关。