大鼠丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制剂B2的表达、纯化及抗体制备

目的:原核表达、纯化大鼠丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制剂B2(SERPINB2),并制备其多克隆抗体。方法:设计扩增大鼠Serpinb2全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达了大鼠Serpinb2全长基因,纯化了SERPINB2蛋白,并获得了抗SERPINB2的多克隆抗体,抗体效价达到1:25600,Western印迹结果显示该抗体能特异识别原核及真核细胞表达的SERPINB2。结论:SERPINB2能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究SERPINB2的功能奠定了基础。

人细胞外基质磷酸糖蛋白MEPE的表达纯化及抗体制备

目的原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体。方法设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果原核表达了人Mepe全长基因,纯化了MEPE蛋白,并获得了抗MEPE的多克隆抗体,抗体效价达到1∶25 600,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的MEPE蛋白。结论 MEPE蛋白能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。

短暂性全面遗忘症13例临床分析

短暂性全面遗忘症是一种临床上比较少见的,主要发生于中老年人群的椎基底动脉系统的短暂性脑缺血发作。

脆性组氨酸三联体基因小干扰RNA的构建及干扰效果检测

目的:构建脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对293T细胞内源性FHIT基因表达的干扰效果。方法:根据FHIT基因序列,通过生物信息学网站预测可能的siRNA,从中筛选出2条合理的FHIT-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer2.1-U6Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建成功的FHIT-siRNA重组载体转染人胚肾细胞293T,Western印迹检测siRNA对293T内源性FHIT表达的干扰效果。结果:构建了2个FHIT-siRNA重组质粒,2条siRNA都有干扰作用,其中一条的作用效果可达50%以上。结论:构建的FHIT-siRNA为进一步研究FHIT的功能提供了有利的工具。

出血性脑梗死32例临床分析

出血性脑梗死（HI）系指脑梗死后由于梗死区血流再通而发生颅内出血。常发生于累及皮层的大、中等面积的脑梗死,以往多为病理性诊断,随着CT、MR的广泛应用,HI已能得到及时的诊断和治疗,临床上并非少见,病死率也较高[1]。现将我院1997年1月至2009年1月收治的32例HI患者总结分析,报告如下。

短暂性全面遗忘症13例临床分析

短暂性全面遗忘症是一种临床上比较少见的,主要发生于中老年人群的椎基底动脉系统的短暂性脑缺血发作.我院自2000年1月~2009年1月共收治13例短暂性全面遗忘症,现报告如下.

肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定

目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果。方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果。结果:构建了2个CT45-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制。结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45-5功能相关的基因研究奠定了基础。

积极性·独立性·长效性 新时代党内监督的优化方向

在新时代,在“全面从严治党”的战略背景下,党内监督不论是从制度方面还是从实践方面都取得突破性的创新和发展。然而,就目前看来,党内监督仍然存在着监督主体缺乏积极性、专责机关独立性不强、监督实践长效性不足等问题,影响着党内监督实践的顺利开展,而党内监督又是新时代党建工作的重点,因此,我们必须通过提高监督主体积极性、保障专责机关的独立性、增强监督实践的长效性,有步骤、有目的地完善党内监督。

全面从严治党视域下党内监督制度的发展与完善

全面从严治党战略的提出为党内监督的发展提供了契机。作为党建工作重要内容的党内监督,在实践中存在着监督主体不够明确、监督内容不够细化等问题,在一定程度上影响了全面从严治党战略的推进。党的十八届六中全会审议通过的《中国共产党党内监督条例》,进一步明确了监督主体,明晰了监督客体,规范了监督内容,从多个方面发展和优化了党内监督制度。在全面从严治党向纵深推进的现阶段,要想增强党内监督的实效,还需要在强化监督主体的独立性、确保监督的双向性、健全监督机制等方面下工夫,为全面从严治党提供有力支撑。

人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探

目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10/HA转染293T细胞;经潮霉素B加压筛选阳性克隆;用RT-PCR和免疫印迹方法分别在RNA水平和蛋白水平鉴定稳定表达MEPE-HA融合蛋白的阳性细胞株;利用一定浓度的DNA损伤诱导剂喜树碱(camptothecin,CPT)处理细胞,通过MTT比色法检测不同时间点细胞存活率的变化,其趋势即可反映出不同细胞株对DNA损伤诱导剂的敏感性。结果经酶切鉴定及序列分析,人MEPE基因真核表达载体pREP10/MEPE-HA构建正确,转染人293T细胞,筛选出MEPE表达较高的细胞株,并且发现该基因的高表达可以使细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性提高。结论成功建立了稳定表达人MEPE的293T细胞株,并对人MEPE蛋白在细胞中对DNA损伤诱导剂敏感性的影响进行了初步探讨,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。