microRNAs在肿瘤表观遗传调控的研究进展

microRNAs和表观遗传修饰都在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用研究发现microRNAs与表观遗传之间存在复杂的调控关系,主要通过DNA甲基化和组蛋白修饰等方式与microRNAs进行相互调节,这为肿瘤的机制研究提供了新的方向。利用表观遗传的可逆性调节相关microRNAs的表达可抑制肿瘤生长,在肿瘤治疗方面显示出巨大潜力。

阿帕替尼治疗二线及以上化疗失败的晚期卵巢癌临床疗效

目的观察甲磺酸阿帕替尼治疗二线及以上治疗失败的晚期卵巢癌患者的临床疗效及安全性。方法回顾性分析接受甲磺酸阿帕替尼治疗的31例二线治疗失败晚期卵巢癌患者的临床资料。初始剂量为500 mg/d,若出现3~4级不良反应,每次下调125 mg,逐渐减量至250 mg/d,将不良反应控制于2级及以下。治疗4周后通过CT检查结果评价近期疗效,并观察患者接受阿帕替尼治疗至出现肿瘤进展或死亡的时间(PFS)。结果31例患者中,达到PR 11例、SD 9例、PD 11例,RR为35.5%,DCR为64.5%;治疗时间35~188 d,全组患者的中位PFS为101.6 d;患者不良反应为1~4级,出现1例4级蛋白尿,予逐渐减药至250 mg后,降为2级;常见不良反应为乏力58.1%、高血压51.6%、蛋白尿41.9%,3级不良反应包括乏力(9.7%)、高血压(6.5%)、蛋白尿(6.5%)、手足综合征(6.5%)、腹泻(6.5%)。结论单药阿帕替尼多线治疗后的晚期卵巢癌患者有一定疗效,安全性可耐受。

结肠癌微小RNA-126的表达情况及其与高尔基体磷酸化蛋白3的关系

目的探讨结肠癌微小RNA-126(miR-126)的表达情况及其与高尔基体磷酸化蛋白3(GOLPH3)的关系。方法选取10例结肠癌及相应正常结肠上皮组织标本,检测miR-126的表达水平。将miR-126的模拟物和阴性对照(N.C.)分别转染至HCT116细胞,48 h后检测细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白的表达情况。采用生物学信息方法预测miR-126和GOLPH3是否在存在靶向作用关系。构建p-GOLPH3 3'-UTR和p-GOLPH3 3'-UTR mut两种报告基因质粒,与miR-126模拟物进行共转染结肠癌细胞HCT116,同时以未转染的HCT116细胞为空白对照,仅转染N.C.的HCT116细胞为阴性对照组,检测各组细胞的荧光强度。结果结肠癌组织中miR-126的相对表达水平低于相应正常结肠上皮组织(P<0.05),转染miR-126模拟物的结肠癌细胞HCT116的GOLPH3 mRNA及蛋白表达水平均低于转染N.C.的结肠癌细胞HCT116。生物信息学分析结果提示miR-126与GOLPH3存在靶向作用关系。与空白对照组及阴性对照组比较,p-GOLPH3-3'UTR组的荧光值降低(P<0.05),但p-GOLPH3-3'UTR mut组的荧光值变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-126在结肠癌组织中表达下调,其通过调控GOLPH3在结肠癌细胞中的表达可能是结肠癌的发病机制之一。

微小RNA-29c表达水平与胃癌生物学行为的关系

目的探讨微小RNA-29c（miR-29c）在胃癌发生、发展过程中的作用。方法采用微小RNA（miRNAs）微阵列芯片技术检测胃癌组织中miRNAs表达谱，并筛选差异表达的miRNAs；采用实时定量PCR检测miR-29c在胃癌组织和相应正常胃上皮组织、正常胃上皮细胞系GES-1、胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中的表达水平；采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法和流式细胞术检测miR-29c对胃癌细胞增殖、细胞周期及药物敏感性的作用；应用实时定量PCR、Westernblot和荧光素酶报告基因技术研究髓样细胞白血病1（Mcl-1）与miR-29c之间的关系。结果与正常胃上皮组织比较，胃癌组织中表达上升超过2倍的miRNAs有7个，分别为miR-374b、miRPlus-E1212、miR-338-5p、miR-297、miR-21、miR-135b、miR-18a；表达下降的miRNAs有9个，分别为miR-29b-2、miR-1260、miRPlUS-E1241、miR-S1-5p、miR-48a、miR-29c、miR-647、miR-196b和ebv-miR-BART5。miR-29c在胃癌组织和正常胃上皮组织中的相对表达量分别为0．70±0．34和1．00±0．06（P〈0．05），分化越差的细胞系miR-29c表达水平越低（P〈0．05）。miR-29c表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、Laur6n分型、Bon＇mann分型和Ming分型有关（均P〈0．05）。在BGC-823胃癌细胞中，miR-29c过表达可以抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，使细胞周期受阻于S期，并增加肿瘤细胞对化疗药物多西紫杉醇的敏感性（均P〈0．05）。Mcl-1mRNA在胃癌组织和正常胃上皮组织中的相对表达量分别为3．47±1．34和1．00±0．20（P〈0．01），miR-29c和Mcl-1mRNA在胃癌组织中的表达呈负相关（r=一0．633，P〈0．05）。miR-29e直接靶向调控Mcl-1在胃癌细胞中的表达。结论胃癌组织具有自己独特的miRNAs表达谱。miR-29c的表达水平与胃癌的生物学行为相关。miR-29c参与对Mcl-1的靶向调控，可能是胃癌的发病机制之一。

微小RNA-135b在胃癌发生发展中的临床病理意义及其作用

目的探讨微小RNA-135b（miR-135b）在胃癌发生发展中的作用及其临床病理意义。方法收集厦门大学附属第一医院肿瘤外科自2007年9月至2011年3月72例胃癌组织及其相应胃正常上皮组织标本，选取其中6例采用微小RNA（miRNA）微阵列技术检测胃癌miRNA表达谱并筛选差异表达的miRNA。以miR-135b作为研究对象，用实时定量（RT）-PCR检测其在上述临床标本、正常胃上皮细胞系GES-1、胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中的表达水平。采用细胞转染、噻唑蓝（MTT）法、流式细胞技术研究miR-135b对胃癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用。应用RT—PCR和蛋白质印迹探讨miR．135b与结肠腺瘤性息肉病基因（APC）之间的关系。结果在胃癌组织中，表达上调和下调超过2倍的miRNA分别为7个和9个（均P〈0．05）。与各自相应的胃正常上皮组织相比，miR-135b在绝大多数胃癌组织中的表达水平更高（66例，91．67％）。在所有临床标本中，二者间的平均表达量差异有统计学意义（3．42±2．62和1．00±0．07，P〈0．01），并且与多种胃癌病理参数如Laur6n分型、分化程度、浸润深度和pTNM分期密切相关（均P〈0．05），在分化越差的细胞系中其表达水平越高（P〈0．05）。miR-135b能促进胃癌细胞增殖，抑制其凋亡，并靶向调控APC在胃癌细胞中的表达。结论胃癌组织具有自己独特的miRNA表达谱。miR-135b的高表达对胃癌的发生发展起重要作用，它参与对APC的调控可能是胃癌发病机制之一。

胃癌miRNAs表达谱及胃癌组织miR-21表达临床意义探讨

目的:筛选胃癌miRNAs表达谱,探讨miR-21在胃癌组织中的表达情况及其临床病理意义。方法:收集手术切除新鲜胃癌标本共65例,包括胃癌组织及相应胃正常上皮组织,随机选取其中6例,应用miRNA芯片技术研究胃癌的miRNAs表达谱。采用实时定量PCR验证芯片结果并检测miR-21在65例胃癌组织标本及相应胃正常上皮组织的表达水平,探讨其表达与胃癌临床病理参数间的关系。结果:与胃正常上皮组织相比,胃癌组织中表达上调超过2倍的miRNAs有7个(miR-374b*、miRPlus-E1212、miR-338-5p、miR-297、miR-21、miR-135b和miR-18a),表达下调超过2倍的miRNAs有9个(miR-29b-2*、miR-1260、miRPlus-E1241、miR-S1-5p、miR-148a、miR-29c、miR-647、miR-196b*和ebv-miR-BART5)。46例(70.8%)胃癌组织中miR-21表达水平明显高于胃正常上皮组织,且与肿瘤的分化程度(χ2=6.257,P=0.012)、浸润深度(χ2=5.705,P=0.017)和有无淋巴结转移(χ2=7.107,P=0.008)有关。结论:筛选出的差异表达miRNAs可能参与胃癌的发病;miR-21与胃癌生物学行为密切相关,可能成为胃癌诊断和治疗的潜在生物学指标。

乙型肝炎病毒逆转录酶区耐药突变对血清乙型肝炎病毒表面抗原水平的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)逆转录酶区(RT)耐药突变对血清HBV表面抗原(HBsAg)水平的影响。方法采用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序法分析2016年1月至2021年12月于联勤保障部队第九一〇医院感染科接受核苷(酸)类药物(NAs)治疗的402例慢性乙型肝炎(CHB)患者RT区序列,根据RT区耐药突变情况分为HBV RT野生组(181例)和HBV RT耐药突变组(221例,其中A181突变患者33例、V191突变患者15例、L180+M204V突变患者82例、M204I突变患者91例)。采用非参数秩和检验(Mann-Whitney U)探讨血清HBsAg水平的影响因素及HBV RT区耐药突变对血清HBsAg水平的影响;采用Spearman相关性分析探讨HBV RT耐药突变组血清HBsAg与HBV DNA相关性。结果入组402例CHB病例中,HBV RT野生组患者血清HBsAg、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)B型基因所占比例显著高于HBV RT耐药突变组,差异均有统计学意义(Z=-3.426、P=0.001,Z=-2.347、P=0.019,Z=-2.532、P=0.011,Z=-10.387、P=0.001)。HBV RT耐药突变组患者中,A181突变组、V191突变组、L180+M204V突变组、M204I耐药突变组血清HBsAg水平均显著低于HBV RT野生组(Z=2.475、P=0.013,Z=2.148、P=0.032,Z=2.115、P=0.034,Z=2.449、P=0.014)。HBV DNA水平在各突变组间两两比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。血清HBsAg水平与HBV DNA载量在A181突变组、L180M+M204V突变组和M204I突变组中均呈显著正相关性(r=0.486、P=0.004,r=0.578、P<0.001,r=0.369、P<0.001)。结论HBV RT区A181、V191、L180及M204V位点突变显著降低了CHB患者血清HBsAg水平。

微小RNA-145对CD44表达以及肝癌细胞影响

目的分析微小RNA-145(miR-145)与CD44在肝癌中的关系。方法收集2015年10月至2016年6月福建医科大学附属第二医院13例肝细胞癌(HCC)患者标本,以CD44阳性表达患者为研究对象,实时荧光定量PCR检测miR-145及CD44在HCC及对应正常肝组织的表达。Western印迹检测CD44在肝癌细胞系HepG2和SNU423中的表达。生物学信息方法预测miR-145和CD44是否存在靶向作用。在CD44阳性表达的肝癌细胞系中,过表达miR-126后检测CD44表达水平。构建载体及荧光素酶报告基因验证miR-145和CD44间的靶向作用关系。四甲基偶氮唑盐(MTT)检测miR-145对CD44阳性和阴性表达肝癌细胞增殖的影响。结果在13例患者中有8例HCC组织CD44表达阳性。与正常肝组织比较,HCC组织中miR-145相对表达更低(0.998±0.010比0.503±0.046),CD44 mRNA相对表达更高(0.996±0.005比1.878±0.108),差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学方法提示miR-145与CD44存在靶向作用关系。在肝癌细胞SNU423中,过表达miR-145能够显著下调CD44 mRNA的相对表达(0.941± 0.010比0.515± 0.021,P<0.05),并下调CD44蛋白表达。荧光素酶报告基因实验表明CD44是miR-145直接作用的靶基因。转染miR-145模拟物后明显抑制CD44阳性表达SNU423细胞增殖。结论miR-145可通过调控CD44的表达影响CD44阳性的肝癌细胞增殖,这可能是肝癌发病机制之一。

壶腹部原发性神经纤维瘤一例

神经纤维瘤病是一种由神经嵴细胞分化异常引起的常染色体显性遗传病,可导致多系统损害。目前国内外相关文献未见原发于壶腹部的神经纤维瘤相关报道。该病术前诊断困难,且难以与壶腹部周围癌、胆道炎性狭窄、胆总管下段阴性结石等所致的梗阻性黄疸相鉴别,主要依赖术中探查和术后病理明确诊断。本文报道1例该病患者,其治疗采用胰十二指肠切除术,患者目前恢复良好。

微小RNA-29b/c与髓样细胞白血病-1在胃癌中的相互作用关系

目的 探讨胃癌细胞中微小RNA-29b和微小RNA-29c （miR-29b/c）与髓样细胞白血病-1（Mcl-1）的相互作用关系.方法 实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测高表达miR-29b/c后胃癌细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白表达水平,载体构建及荧光素酶报告基因验证两者之间的作用关系,4＇,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色技术验证miR-29b/c后对胃癌细胞凋亡的作用.结果 高表达miR-29b/c能够显著下调Mcl-1 mRNA在胃癌细胞中的表达量（0.860±0.006比0.513±0.061,P＜0.05及0.860±0.006比0.512±0.104,P＜0.01）并下调Mcl-1蛋白表达水平.Mcl-1是miR-29b/c的靶基因（1 234 000±42 720比54 900±13 700,P＜0.01及652 700±14 010比283 100±12 750,P＜0.01）.高表达miR-29b/c能够显著增加胃癌细胞的凋亡率[（1.961±0.476）％比（6.319±1.725）％,P ＜0.05及（1.961±0.476）％比（4.878±0.614）％,P＜0.01].结论 miR-29b/c通过调控Mcl-1在胃癌细胞中的表达可能是胃癌发病机制之一.

微小RNA-126影响高尔基磷酸化蛋白3在结肠癌中的表达

高尔基磷酸化蛋白3（GOLPH3）在结肠癌组织中高表达,并与肿瘤生物学行为相关[1].本研究旨在探讨微小RNA（miRNA,miR）-126与GOLPH3的关系.一、材料与方法1．材料：结肠癌组织及距离癌缘〉5cm正常结肠上皮组织共10对；结肠癌细胞HCT116。

MMP-9和claudin-4在不同胃组织表达水平及其与肠化生的关系

目的探讨MMP-9和claudin-4在不同胃组织(胃癌组织及对应的癌旁组织及胃正常上皮组织)的表达水平以及其与胃组织肠化生的关系。方法收集厦门大学附属第一医院2008年9月至2010年9月部分胃癌手术标本及相应癌旁组织和胃正常上皮组织共40例,采用免疫组织化学染色方法检测MMP-9和claudin-4蛋白在各种组织中的表达情况。结果 MMP-9和claudin-4在胃正常上皮组织、癌旁组织及胃癌组织中的表达水平依次增高(P<0.05),claudin-4与癌旁组织的肠化相关(P<0.05)。结论 MMP-9和claudin-4的高表达与胃癌的发生、发展密切相关,claudin-4可能通过肠化生促进胃组织癌变的进展。