单增李斯特菌感染RAW264.7细胞转录组差异表达分析

为研究单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)感染前后RAW264.7细胞基因表达谱变化,筛选关键功能基因和通路,探究其致病机制。作者用感染复数(MOI)10的LM感染RAW264.7细胞6 h,提取细胞RNA进行转录组测序,选取感染组与对照组相比差异倍数≥1.5且P<0.05的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析,并通过RT-qPCR验证部分差异基因。转录组结果显示,RAW264.7细胞在感染LM前后有1782个基因差异表达,其中上调为989,下调为793。GO分析结果主要涉及免疫系统过程、免疫反应、细胞程序性死亡调控等。KEGG分析结果显示,显著富集的通路有细胞因子-受体相互作用、肿瘤坏死因子信号通路、IL-17信号通路等。RT-qPCR验证实验结果显示,随机选择的11个显著差异基因表达倍数趋势与测序结果一致。该研究为进一步深入研究LM的致病机制奠定了基础。

超高层整体结构的抗火性能分析

基于性能化对超高层整体结构的抗火安全性进行评估,介绍钢结构的抗火设计方法。利用大型通用有限元软件ABAQUS对最不利火灾场景下整体结构进行抗火性能分析,按照规范要求对相应钢构件进行抗火承载力验算,根据分析结果提出结论和建议。

银川地区规模化奶牛养殖场粪污可培养细菌种群分布多样性研究

以银川市规模化奶牛养殖场的新鲜粪便、堆积粪便、污水和环境土壤4种样品为材料,对培养获得的429株细菌分离株进行鉴定。结果显示,规模化奶牛养殖场粪污中具有大量且种类丰富的可培养细菌,鉴定出的358株分离株分属于4个门、6个纲、15个目、23个科、39个属和102个种,主要集中于厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)和变形菌门(Proteobacteria);进一步分析病原菌数量发现条件致病菌占88. 55%(317/358),在种水平上主要为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(11/358)、大肠埃希菌(Escherichia coli)(33/358)和托尔豪特链球菌(Streptococcus thoraltensis)(8/358)。由此可见,奶牛养殖场粪污对人和动物有潜在健康风险,若不经处理直接排放或还田施用,将对养殖安全和环境卫生造成巨大威胁。

RIP3对BCG感染后小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用研究

目的:探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在卡介苗(BCG)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡过程中的调控作用。方法:构建RIP3腺病毒干扰载体并感染巨噬细胞,并用BCG进行感染。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;利用流式细胞术对细胞凋亡率、线粒体膜电位及活性氧含量进行检测;通过Western blot检测RIP3及凋亡相关蛋白的表达水平。结果:BCG感染RAW264.7细胞后,细胞活力下降且RIP3蛋白表达量显著上调(P<0.01)。而与BCG单独感染组相比,BCG感染结合RIP3干扰处理组细胞凋亡率及活性氧含量降低,线粒体膜电位升高,同时促凋亡蛋白Bax与cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著降低(P<0.01)。结论:在BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的过程中,RIP3参与了BCG诱导的RAW264.7细胞的凋亡,且该过程可能是通过线粒体途径实现的。

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位与产气荚膜梭菌毒素融合蛋白的免疫原性

梭菌毒素作为产气荚膜梭菌的主要致病因子可引起家畜的多种疾病,其中β1毒素和β2毒素是由C型菌产生的2种引起动物坏死性肠炎的主要致病因子。基因工程重组毒素蛋白已作为潜在候选疫苗用于预防该菌所引起的多种传染性疾病,大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)是一种常用的黏膜免疫佐剂。本研究将ltb-cpb2-cpb1及ltb-cpa融合基因进行IPTG的诱导表达,制备了包涵体粗提物,并对小白鼠进行免疫攻毒试验及其免疫后抗原免疫保护期的免疫原性的研究。结果显示,经LTB-CPB2B1及LTB-CPA重组蛋白免疫后的小白鼠在第28、第56天时用产气荚膜梭菌强毒攻击,可获得很好的保护,产气荚膜梭菌毒素与LTB融合基因重组菌株能够有效刺激免疫小白鼠产生特异性抗体。说明该重组菌株可以作为预防产气荚膜梭菌所引起疾病的候选菌株。

重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)突变体的构建、表达与活性分析

A型肉毒神经毒素的轻链(BoNT/A LC)是一种锌依赖性的金属内肽酶.通过X射线分析其结构并结合一些文献报道表明,轻链上的Arg362和Tyr365直接参与了酶的催化作用,而Glu350则处于其活性位点的中心位置.采用定点突变技术,对编码这3个关键性的氨基酸位点的碱基进行突变(Arg362Ala、Tyr365Phe、Glu350Ala),获得了BoNT/A LC突变体.突变体蛋白与BoNT/A的底物蛋白SNAP-25进行切割反应,结果表明,未经突变的BoNT/A轻链蛋白能够特异性地识别SNAP-25蛋白上的Q197-R198位点,而突变体蛋白则完全无法识别该位点,不具有金属内肽酶活性,成功地去除了肉毒神经毒素的毒力,为下一步的全长肉毒神经毒素重组疫苗的研究打下了基础.

甘草酸检测试剂盒的组装与效果评价

目的:研制甘草酸间接竞争酶联免疫试剂盒。方法:通过棋盘滴定法确定了抗原最佳包被浓度为1μg/m L,一抗稀释度为1:8000,并以此成功组装了甘草酸快速检测试剂盒。结果:使用试剂盒检测了甘草酸样品,并与HPLC测定结果进行对比,发现灵敏度有了显著提高,达到了纳克级别。试剂盒的回收率高于96%,变异系数低于4.5%。结论:开发出的试剂盒稳定性良好,不同批次产品间检测值没有显著差异,有效的缩短了检测时间和检测成本,为甘草酸快速检测提供了一种新方法。

Gasdermin蛋白家族与细胞焦亡研究进展

细胞焦亡作为细胞程序性死亡机制中备受关注的一种方式,近年来在感染性疾病、癌症的发生、发展以及一些自身免疫疾病的研究中越来越受到关注,已成为生命科学研究的热点。细胞焦亡与凋亡、坏死性凋亡等细胞程序性死亡机制相互转化、相互补充,构建了细胞复杂的死亡机制;细胞在一定条件下感知细胞外感染和内源性危险信号后,会完成炎性小体的组装,并利用特有的Caspase-1/4、5/11使Gasdermin D蛋白发生剪切并造成细胞质膜上孔隙,同时使IL-1β和IL-18炎性细胞因子成熟并释放,一系列的严谨秩序的过程最终造成了细胞的炎性程序性死亡,从而在机体的天然免疫屏障中发挥重要的作用。对细胞焦亡的特征、发现过程、诱导激活的经典和非经典途径、Gasdermin家族蛋白的作用,以及炎性因子的形成和分泌机制中所起作用的研究进展进行了综述。

铁死亡调控机制的研究进展

铁死亡是新发现的一种程序性细胞死亡方式。铁死亡的主要特征包括细胞内游离Fe 2+介导的芬顿反应、细胞膜脂质的脂质过氧化反应以及抗脂质氧化活性被抑制的胞内谷胱甘肽过氧化物酶4。铁死亡分子调控机制较为复杂,涉及铁离子代谢、脂质过氧化反应和谷胱甘肽代谢等多个生物学过程。铁死亡与肿瘤、神经系统疾病、缺血再灌注损伤、肾脏损伤、血液病等多种疾病的病理过程密切相关。利用小分子化合物调控铁死亡干预相关疾病的发生和发展,已成为病因学研究和治疗的热点和焦点。回顾了铁死亡的典型特征和分子调控机制,总结了铁死亡相关小分子化合物的应用,为探寻铁死亡相关疾病研究提供新的参考靶点。

大跨钢结构抗火敏感性分析

利用软件SAP 2000和ABAQUS对某大跨钢结构进行抗火分析,根据计算结果给出两种软件在进行结构抗火分析时的适用范围,并研究温差对结构构件性能影响的敏感性,得出的结论可供类似项目参考。

受体相互作用蛋白1(RIP1)对BCG诱导小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用

旨在通过构建受体相互作用蛋白1(RIP1)腺病毒干扰载体,研究其对BCG诱导的RAW264.7细胞凋亡相关指标的影响,以探讨其在BCG诱导RAW264.7凋亡过程中的调控作用。笔者构建RIP1腺病毒干扰载体,并转染感染BCG的小鼠RAW264.7细胞系,利用流式细胞仪检测各处理细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位、细胞活性氧水平及细胞周期等指标,并用Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果显示:BCG感染显著上调了RIP1的蛋白表达水平并提高了小鼠巨噬细胞RAW264.7的凋亡率,当RIP1被干扰后,BCG感染后的RAW264.7细胞凋亡率和活性氧水平显著降低,而促凋亡蛋白Bax表达量显著下调,线粒体膜电位和抑凋亡蛋白表达量上调。同时,BCG感染后细胞周期滞留于G_1期。BCG感染可有效上调RIP1表达量并诱导RAW264.7细胞凋亡。RIP1通过下调BCG感染后RAW264.7细胞的线粒体膜电位,上调活性氧含量并提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值,使细胞周期阻滞于G_1期从而参与诱导细胞凋亡。

深圳某高层结构罕遇地震弹塑性里程分析

本文运用ABAQUS 程序，对该结构进行了罕遇地震作用下的弹塑性时程分析，以检验其结构在罕遇地震作用下的抗震性能。结果表明，调整后的结构形式具有较高的抗震承载力和延性，能够满足性能目标的设计要求。

1株食源性蜡样芽胞杆菌分离株的分子特征毒性及耐药性研究

目的研究株蜡样芽胞杆菌SCY分离株的毒力和耐药性。方法使用选择性培养基从银川市某餐厅鱼肉菜肴中培养分离获得蜡样芽胞杆菌SCY分离株,经23S rRNA基因PCR测序鉴定后,通过二代全基因组测序技术分析SCY分离株的基因组特征,进而分别采用免疫组化技术和药敏纸片实验研究SCY分离株的毒性和耐药性。结果SCY分离株的基因组大小为5.82 Mb,编码基因个数为5767,编码区总长度占全基因组的85.50%。SCY分离株基因组中共含有11个基因岛、16个CRISPR和5个前噬菌体;其中,SCY编码基因分别在PHI和VFDB毒力因子数据库中注释到了14个和62个毒力基因(Identiy>80,Evalue<0.05),在CARD耐药数据库中注释到了215个耐药基因(Best Hit evalue<0.05)。小鼠肠道组织切片免疫组化结果表明,炎性因子IL-1β、CASP1和Nlrp3的表达水平发生差异显著性上调。22种细菌抗生素药敏纸片试验结果显示,SCY分离株对氯霉素、克林霉素等高度敏感,对四环素、头孢唑啉、头孢哌酮、氨苄青霉素表现为中介,对青霉素、苯唑西林、哌拉西林、杆菌肽、头孢他啶等10种抗生素表现为耐药,SCY分离株多重耐药情况较为严重。结论本研究发现的SCY分离株属于肠毒株,携带多种肠毒素毒力基因,且具有典型的多重耐药特征。研究结果为揭示蜡样芽胞杆菌分离株的致病机制提供参考依据。

优化技术在深圳京基金融中心中的应用

在传统的结构设计中对构件的优化调整往往凭经验,这样做效率很低且结果往往不够理想。本文介绍了一种尺寸优化方法,是通过有限元程序来实现的,这种方法可以对构件进行自动优化并得到每个构件的敏感性,从而在构件调整时做到有的放矢。本文以深圳京基金融中心超高层结构为例详细介绍了这种优化方法。

幕墙预埋件承载力非线性有限元分析

根据试验提供的条件建立预埋件有限元模型,并介绍了数值模拟过程中为保证分析正确性采取的措施。利用LS-DYNA求解器进行计算,考察了幕墙预埋件的抗拉承载力和抗剪承载力,并与试验结果进行比较。结果表明,有限元分析结果与试验结果吻合较好,数值模拟中混凝土裂缝的发展过程与试验中混凝土裂缝的开展极为相近。分析方法可供类似项目参考。

深圳京基金融中心巨型节点设计研究

深圳京基金融中心建筑总高度很高,构件截面尺寸很大,造成节点区域非常大,如何保证节点的安全非常重要,另外还要考虑经济性,尽可能的降低造价。本文介绍了伸臂桁架与混凝土核心筒连接节点、伸臂桁架与钢管混凝土柱连接节点和斜支撑与钢管混凝土柱连接节点的设计方法,以期为类似工程提供参考。

某超高层结构连接节点的非线性有限元分析

某超高层采用框架-核心筒结构体系,在内筒与核心筒之间采用伸臂桁架连接。介绍了这种结构形式的特点,利用有限元软件LS-DYNA分析了在控制工况作用下伸臂桁架与混凝土核心筒连接节点的工作性能,考察了伸臂桁架对混凝土墙体的影响及节点的破坏形态。结果显示,在荷载标准组合作用下,混凝土剪力墙及节点满足设计要求;在最不利工况作用下,混凝土剪力墙满足承载力极限状态要求;采用铸钢节点后满足强节点的设计要求。

深圳市当代艺术馆与城市规划展览馆楼板振动舒适度分析

深圳市当代艺术馆与城市规划展览馆(简称"两馆")为体型特别复杂的结构,包含大悬挑结构。由于大悬挑结构对人行激励可能会非常敏感,故需要对竖向激励产生的楼板振动问题进行分析。本文利用软件MIDAS/Gen进行分析,首先考察结构的竖向振动模态,再输入人行激励,求出楼板的共振频率及对应的峰值加速度,从而对楼板振动舒适度进行评判。

利用groupⅡ intron构建产气荚膜梭菌突变体

目的通过插入失活α毒素基因获得产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)突变体。方法利用MobilegroupⅡintron的自我剪切作用,对本室保藏的1株野生型C.perfringens的α基因plc插入失活。通过菌落PCR检测,以及观察突变株在哥伦比亚血琼脂培养基和脑心浸液培养基(4%卵黄)平板上的形态变化,进行阳性筛选。蛋白质免疫印迹分析α毒素蛋白活性。结果 PCR检测到α毒素突变体的plc基因中,存在Mobile groupⅡintron片段,并且观察到该菌在哥伦比亚鲜血琼脂平板培养基上的α毒素溶血环消失,在脑心浸液培养基(4%卵黄)平板上无白晕。蛋白质免疫印迹分析表明,plc突变体不表达α毒素蛋白。结论成功构建C.perfringensα毒素突变体,为后期探索C.perfringens口服疫苗打下了重要基础。

深圳市当代艺术馆与城市规划展览馆整体结构抗火性能分析

基于性能化对深圳市当代艺术馆与城市规划展览馆整体结构的抗火安全性进行了评估,对于这种超限结构国内现有的规范方法难以满足抗火安全性要求。文中首先介绍了钢结构的抗火设计方法,然后利用大型通用有限元软件ABAQUS在可能最不利火灾场景下对整体结构进行抗火性能分析,接着根据规范要求对相应钢构件进行了抗火承载力验算,最后根据分析结果提出结论和建议。