外泌体负载枸杞miR2911调控Wnt/β-catenin信号通路促进非梗阻性无精子症大鼠生精功能恢复

目的:研究外泌体负载的枸杞miRNA(Lb-miR2911)药物通过跨界调控Wnt/β-catenin信号通路对非梗阻性无精子症(NOA)大鼠模型生精功能恢复的影响。方法:4周龄雄性SD大鼠30只,采用白消安腹腔注射方法构建NOA模型,造模5周后将模型大鼠随机分为模型组(MC)、Lb-miR2911^(EXO)治疗组(Lb-miR2911^(EXO))、外泌体空载治疗组(Sham),每组10只。MC组NOA模型大鼠自然恢复,无特殊处理;Lb-miR2911^(EXO)组NOA模型大鼠,睾丸生精小管注射外泌体包被Lb-miR2911药物(0.1 mg/kg),1次/周,共治疗3次;Sham组NOA模型大鼠,睾丸生精小管注射外泌体空载药物(0.1 mg/kg),1次/周,共治疗3次。另取10只同龄正常健康SD大鼠作为正常对照组(NC)。治疗后第2、6周采用RNA FISH技术观察Lb-miR2911药物在睾丸组织中的摄取及代谢变化;治疗后12周采用转录组测序分析结合Western印迹、RT-PCR方法检测各组大鼠睾丸组织中细胞增殖、精子发生及Wnt/β-catenin信号通路的基因表达;睾丸组织形态学及精子质量分析比较各组大鼠生精功能恢复情况;通过组织形态学分析结合血清TNF-α、IL-1β、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等指标检测评估Lb-miR2911外泌体药物对大鼠组织器官毒性。结果:治疗12周后睾丸组织形态学分析发现Lb-miR2911^(EXO)组大鼠睾丸组织各层次生精细胞排列规则,管腔中可见大量成熟精子,与Sham组比较,Johnsen评分显著增加(P<0.05),睾丸重量、睾丸指数、精子浓度和精子活力显著增加(P<0.05);转录组测序分析结合Western印迹、RT-PCR方法证实,与MC组相比,Lb-miR2911^(EXO)组DACT3基因表达下调(P<0.05),而DVL2、β-catenin表达上调,同时p-DVL2及β-catenin(nucleus)蛋白含量增加(P<0.05);细胞增殖相关基因CCND1、CCNE1、CCNE2 mRNA表达上调(P<0.05);精子发生相关基因DMC1、CCR6、JAM2、KLC3表达上调(P<0.05);组织器官毒性检测表明:治疗后Lb-miR2911^(EXO)组大鼠肺部、肝脏、肾脏组织未见病理性变化,与NC组比较血清TNF-α、IL-1β、AST、ALT、肌酐或尿素氮等水平未见升高(P>0.05)。结论:外泌体负载的Lb-miR2911药物通过跨界调节DACT3/Wnt/β-Catenin信号通路促进了NOA大鼠生精功能恢复。

睾丸原发性淋巴瘤1例

睾丸原发性淋巴瘤(PTL)是临床上罕见的睾丸恶性肿瘤,国内外报道较少。宁夏医科大学总医院泌尿外科于2021年12月收治1例并行右侧睾丸根治性切除术,术后行6周期R-CHOP化疗,随访20个月,未见肿瘤复发及转移。为提高对该病的认识,本文报告该患者的临床资料。1病例资料患者男性,56岁,主因“发现右侧睾丸无痛性肿大半月余”入院。查体:右侧睾丸肿大,睾丸上极可扪及大小4.0 cm×3.0 cm×2.0 cm大小肿物,质硬,无触痛。

枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响

背景:精原干细胞移植对不育具有潜在的临床应用价值,体外建立精原干细胞的培养系统获得数量较多的精原干细胞,仍是目前研究中亟待解决的问题。目的:观察枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响。方法:采用两步酶消化法获取出生4～6d雄性C57BL/6小鼠睾丸Sertoli细胞与精原干细胞,将精原干细胞接种在Sertoli细胞饲养层上,再加入枸杞多糖或联合细胞因子添加到细胞培养液中。1周后以流式细胞仪检测细胞周期及细胞活性率,并检测各组精原干细胞GFRa-1、Thy-1、c-kit的阳性率。结果与结论:单独加入枸杞多糖后精原干细胞数量明显增加,增殖明显,联合加入胶质细胞源性神经营养因子与白血病抑制因子精原干细胞增殖更加明显(P<0.05)。并发现体外培养1周后的精原干细胞仍保持其睾丸组织内的精原干细胞特征,大多仍维持在未分化状态。表明在枸杞多糖或枸杞多糖联合胶质细胞源性神经营养因子及白血病抑制因子作用下,可促进精原干细胞体外增殖。

应用iTRAQ质谱分析技术对小鼠精原干细胞标志物进行动态研究与筛选

目的:利用i TRAQ蛋白质质谱分析技术检测各年龄阶段小鼠精原干细胞(SSCs)蛋白的表达,进一步分析SSCs标志物表达的动态变化,运用生物信息学蛋白质组数据库筛选并发现新的标志物。方法:以健康雄性C57BL/6小鼠为研究对象,按照鼠龄不同分为8组,无菌提取各组小鼠睾丸组织,采用复合酶消化、免疫磁珠分选(MACS)的方法纯化SSCs后提取蛋白,利用双向电泳及蛋白质质谱分析技术并结合蛋白质数据库对各组蛋白质进行分析鉴定。结果:质谱实验共得到谱图248 510张,通过Mascot软件进行分析,共鉴定到1 132种蛋白。以蛋白丰度差异倍数达到1.2倍以上,且经统计学检验P<0.05视为存在差异性蛋白,8组共检测到差异蛋白298种。鉴定到目前已知的SSCs标志物9种(PCNA、GFRα1、CDH1、Annexin A7、UCHL1、VASA、CD49f、CD29、PLZf),通过各组对比获得在不同鼠龄段内表达变化趋势,其中GFRα1、CD49f、CD29在SSCs中的变化趋势与以往文献一致,并筛选出10种蛋白质(P63、CD71、CD98、K19、ACE、K18、K15、K17、SH2、SH3)作为SSCs标志物进一步研究的对象。结论:SSCs内的蛋白随着小鼠鼠龄的变化表达存在差异,i TRAQ蛋白质质谱分析技术可以对SSCs蛋白质组学信息进行分析与比较,获得各鼠龄阶段差异性表达蛋白,为进一步分析和研究这些差异性蛋白的功能与作用提供了新的方法。

精原干细胞冷冻保存后再移植的生精功能

背景:精原干细胞的冷冻保存在男性不育治疗方面具有潜在的临床应用价值,但冷冻保存过的精原干细胞移植后,其精子发生过程及生精能力目前尚不完全清楚。目的:观测精原干细胞冷冻保存后移植的生精功能。方法:采用复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法获取雄性SD大鼠及雄性C57BL/6小鼠精原干细胞;以雄性BALB/c裸小鼠为受体,出生后6周予腹腔注射白消安破坏其内源性生精功能。将供体精原干细胞分为冷冻保存组与非冷冻保存组,分别以曲细精管微注射的方法异种移植精原干细胞,采用形态学方法观察生精过程;采集附睾精液,观察精子形态并进行体外受精实验。移植后1,2,3个月取受体睾丸组织,采用免疫组化SABC法检测α6-Integrin蛋白表达情况;移植后1周、1个月、3个月取受体睾丸组织,应用扫描电镜观察生精过程。结果与结论:冷冻保存前的精原干细胞活性率高于冷冻保存后的细胞活性率(P<0.01)。冷冻保存组与未冷冻保存组受体睾丸组织精原细胞膜和细胞质中均有α6-Integrin的阳性表达,随时间增加而增加,两组间α6-Integrin蛋白的表达无统计学差异;SD大鼠精原干细胞移植后能在BALB/c裸小鼠生精上皮中克隆增殖,并能分化形成大鼠形态特征的精子,在小鼠精子发生巢内既有大鼠来源的精子发生,又有小鼠内源性精子发生,其供体来源的精子数量较小鼠自身来源的精子数量多。通过体外受精实验提示移植后的精原干细胞在受体内增殖分化形成的精子功能正常,具有受精的能力。结果说明采用常规方法冷冻保存的精原干细胞,移植后能在受体生精上皮中克隆增殖,并能分化形成成熟的精子。

精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化

背景:精原干细胞移植对男性不育的治疗具有潜在的临床应用价值,但移植后干细胞体内迁移、增殖、分化的过程目前尚不完全清楚。目的:观测精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化过程。方法:以出生后6～10d的雄性C57BL/6小鼠为供体,通过复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法获取精原干细胞;以出生后6周的雄性C57BL/6小鼠为受体,腹腔注射白消安,破坏其内源性生精功能。实验组采用曲细精管微注射法将供体精原干细胞移植入受体睾丸内,对移植后细胞进行PKH26-GL荧光追踪分析,观察其体内迁移过程,以Western Blot和RFQ-PCR法检测睾丸组织α6-Integrin,c-kit,SCF蛋白及mRNA的变化。以未接受化疗和细胞移植的正常同系生小鼠作为阳性对照组,以单侧睾丸曲细精管微注射移植细胞递质作为阴性对照组。结果与结论:PKH26-GL荧光追踪移植细胞,移植后1周部分精原干细胞已向曲细精管基底膜迁移,移植后1个月精原干细胞已从曲细精管管腔迁移至曲细精管基底膜,并分裂增殖,移植后3个月曲细精管管腔内可见大量精子细胞形成。移植后1,2,3个月,各组α6-Integrin,c-kit蛋白表达均呈增加趋势(P<0.01),阴性对照组、实验组SCF蛋白表达有增加趋势(P<0.05);各组α6-Integrin,c-kit,SCF mRNA的表达均有增加趋势(P<0.05)。提示大剂量化疗后,生精上皮内仍存在一定数量的Sertoli细胞,这种精子发生的微环境并未完全破坏,外源性精原干细胞移植后能在受体Sertoli细胞所提供的微环境中增殖和分化。

PTEN、PIK3CA在前列腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因PTEN及癌基因PIK3CA在人前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学染色的方法检测40例前列腺癌和40例良性前列腺增生石蜡组织中PTEN蛋白和PIK3CA蛋白的表达水平;应用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测15例新鲜前列腺癌组织和15例新鲜良性前列腺增生组织中PTEN和PIK3CA基因m RNA及蛋白的表达水平。结果 (1)免疫组化结果显示,PTEN蛋白在前列腺癌组中表达的阳性率(35.0%)低于良性前列腺增生组(90.0%)(P<0.01);前列腺癌组和良性前列腺增生组患者的PIK3CA蛋白表达阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)术前PSA水平<20 ng·m L-1、病理分级为G1+G2级、临床分期为Ⅱ期以及无远处转移的前列腺癌患者PTEN蛋白的阳性表达率更高(P<0.05),PTEN蛋白与前列腺癌术前PSA水平(r=-0.471)、病理分级(r=-0.313)、临床分期(r=-0.348)以及是否远处转移(r=-0.424)均呈负相关(P<0.05)。(3)实时荧光定量PCR和Western blot检测显示,良性前列腺增生组PTEN m RNA相对表达量和PTEN蛋白表达量均高于前列腺癌组(P<0.05);两组PIK3CA m RNA相对表达量和PIK3CA蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PTEN的低表达与前列腺癌的生物学行为密切相关,PTEN的表达水平对判断前列腺癌的分期及预后有重要的参考价值。

精原细胞异基因移植研究进展及其面临的困惑

将供体精原细胞移植入异基因受体生精小管中,可看到供体精原细胞分化形成供体形态特征的精子。伴随着冷冻保存、体外培养和干细胞富集技术的发展,精原细胞异基因移植必将在基础科学、临床医学、动物繁殖等领域有非常重要的应用前景。另外,这些技术也可用于接受大剂量放疗或化疗的肿瘤患者的性腺保护和生育力保存。本文综述精原细胞异基因移植研究进展,并对该技术在今后临床应用中所存在的问题进行讨论。

谈老年体育与提高生命质量

阐述老年体育对提高老年人生命质量的作用、意义以及开展老年体育活动应坚持的基本原则。

优化学术论文评审的方法

本文利用模糊BORDA数分析法，将学术论文的效用值与其相对排序进行综合评价，得出一个科学的评价方法。

阻滞增长模型在奥运会撑杆跳高冠军成绩预测中的应用

采用数学建模理论对历届奥运会男子撑杆跳高运动员的金牌成绩进行统计分析,运用拟合模型和常微分方程模型对未来撑杆跳高竞赛项目的最好成绩进行预测,以期为拓宽数学建模在体育领域的应用范围提供一定的依据。

肾上腺髓质增生的诊治(附9例报告)

目的探讨肾上腺髓质增生(AMH)的临床特点和诊治方法,提高AMH的诊治水平。方法回顾性总结9例AMH患者的临床资料,结合文献进行分析。结果9例患者均行手术治疗,5例术后血压明显下降,另4例血压恢复正常。9例术后病理均证实为AMH。结论影像学检查有助于AMH与嗜铬细胞瘤的鉴别诊断,确诊尚需术中探查和术后病理诊断。AMH根本治疗是手术切除,腹腔镜技术对AMH的手术治疗有广阔的应用前景。

膀胱癌预后标记物研究进展

准确判断膀胱癌预后对治疗有重要意义 ,近年来飞速发展的分子生物学对确定膀胱癌的恶性程度及预后有重要价值。本文主要介绍一些相关性较强标记物 ,以期能找到评价膀胱癌预后更敏感、特异、实用的肿瘤标记物。

PI3K抑制剂LY294002对前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响

目的研究PI3K信号通路抑制剂2-（4-吗琳基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响。方法将不同浓度的LY294002（20~40μmol/L）作用于体外培养的前列腺癌PC-3细胞24 h和48 h,用MTT比色法测定LY294002对前列腺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用划痕实验及Transwell小室实验测定细胞侵袭和转移能力。结果不同浓度LY294002分别作用于PC-3细胞24 h、48 h,PC-3细胞存活率明显呈下降趋势,其中20μmol/L浓度下细胞存活率分别为（68±2）%、（45±1）%,40μmol/L浓度下细胞存活率分别为（48±2）%、（20±1）%。PC-3细胞经LY294002分别作用24 h、48 h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞有明显凋亡,并呈现时间和剂量依赖性（P〈0.05）,其侵袭和转移能力受到抑制。结论 LY294002可显著抑制体外培养的前列腺癌PC-3细胞生长增殖,诱导其凋亡,抑制其侵袭和转移能力。

单次热应激处理对小鼠睾丸生精细胞的影响

目的:探讨单次热应激对小鼠睾丸生精功能可复性研究。方法:C57雄性小鼠36只,随机按1、7、14 d各分为对照组(n=6)和热应激组(n=6)。热应激组和对照组小鼠下腹部分别在43℃和25℃水浴中干预15 min,于处理后1、7、14 d取材。计算睾丸器官指数,HE染色观察睾丸组织结构变化,免疫组化染色检测早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)和联会复合体蛋白3(SCP-3)在睾丸组织中的定位及表达,Western印迹检测PLZF蛋白表达水平。结果:热应激组小鼠睾丸器官指数明显低于对照组(P<0.01)。HE染色可见,热应激组与对照组相比,热应激后第1天生精细胞排列松散,散落在生精小管中;第7天生精小管萎缩,排列疏松,生精细胞明显减少;第14天生精小管排列较为紧密,生精细胞数量增加,生精细胞层数增多。与对照组相比第1、7天热应激组SCP-3标记的精母细胞明显减少,第14天精母细胞数量开始恢复。Western印迹检测结果显示,PLZF蛋白在热应激处理后1 d表达量显著降低(0.19±0.02 vs 0.64±0.03,P<0.01),第7、14天又迅速增加(0.77±0.02、0.77±0.02),且显著高于对照组(P<0.01)。结论:小鼠睾丸热应激处理后可致生精功能发生障碍,随着时间的推移,这种损伤具有可复性。

高水平散手运动员赛前训练探讨

散手大赛前的训练阶段通常由 6～ 8个训练小周期组成 ,分为技战术强化、比赛性适应和能量重新动员 3个小阶段。赛前训练内容的安排需处理好全面技术与个人特长的关系 ,素质与技术训练的关系 ,体力训练与恢复的关系。负荷强度需达到或超过比赛强度 ,负荷量应超过比赛的 2～ 4倍以上。同时做好预防和治疗伤病、加强营养和恢复措施等医务监督工作。