聚乙烯吡咯烷酮预处理培养细胞促进TAT穿膜效率

目的:探讨PVP预处理细胞对TAT穿膜效率的影响及其作为促渗剂的安全性,以优化TAT穿膜条件。方法:人工合成荧光标记短肽TAT-FITC和作为阴性对照的无意义肽NCO-FITC作用于PVP预处理各种细胞株,荧光显微镜观察TAT-FITC的穿膜效率及其定位;荧光酶标仪定量检测不同预处理的各种细胞摄取荧光标记短肽;MTT检测PVP对各种细胞的存活率及溶血实验检测其对细胞膜结构完整性的影响。结果:经PVP预处理细胞后,TAT-FITC可有效穿膜进入细胞内,MTT结果显示适当浓度的PVP对细胞活力几乎没有影响;溶血实验也证实,PVP不影响红细胞的细胞膜完整性。结论:本实验观察显示,PVP可以明显提高TAT对培养细胞的穿膜效率,但对细胞活力影响很小。

病毒入胞机制对载药多肽设计的启示

目的了解病毒入胞、内含体逃逸等机制,从中得到启发为进一步设计开发高效智能、仿病毒载药工具提供帮助。方法纵观在长期的进化过程中病毒因宿主的杀伤压力,为生存、复制延续所形成的独特的跨膜、内含体逃逸以及亚细胞器定位等本领,揭示其给我们在仿病毒载药多肽设计开发方面的启示。结果与结论对病毒感染机制全面、深入的了解,有助于我们利用病毒逃避宿主杀伤机制,为设计、研发高效率非病毒载药多肽提供新思路。

糖类高渗化合物对TAT穿膜效率的影响

目的研究糖类高渗化合物葡萄糖、蔗糖或甘露醇预处理细胞对TAT穿膜效率的影响。方法人工合成荧光标记多肽TAT-FITC和无意义肽NCO-FITC,将其作用于体外培养的人宫颈癌细胞株Siha、小鼠成纤维细胞L929及人肝癌细胞株HepG2。荧光酶标仪定量检测不同预处理对各细胞摄取荧光标记短肽的影响及内吞抑制药阿米洛利对不同预处理后TAT穿膜的影响;荧光显微镜观察不同预处理后,TAT-FITC的穿膜效率及其在Siha细胞内的定位;MTT检测不同预处理对Siha细胞存活率的影响。结果糖类高渗化合物预处理细胞后,TAT-FITC可高效穿膜进入细胞内,且在胞浆、胞核中均匀分布,胞核浓度高于胞浆浓度;未见NCO-FITC穿膜进入细胞。0.6mol·L-1葡萄糖预处理后,细胞摄取TAT-FITC的荧光强度较0.6mol·L-1蔗糖预处理后相近且较对照组明显增强(P<0.01),0.5mol·L-1甘露醇预处理的荧光强度次之。加入阿米洛利后,糖类高渗化合物预处理的细胞摄取TAT-FITC荧光强度均明显减弱(P<0.01)。MTT数据显示适当浓度的糖类高渗化合物对细胞的活力有轻微影响。结论0.6mol·L-1葡萄糖或0.6mol.L-1蔗糖或0.5mol·L-1甘露醇预处理均可提高TAT对培养细胞的穿膜效率,但对细胞活力影响较小;预处理后细胞可能以内吞方式摄取TAT-FITC短肽。