甘肃产不同品种松针的抗氧化活性研究

以甘肃产白皮松、雪松、油松、落叶松、樟子松和华山松6个树种的松针为研究对象,采用DPPH法、ABTS法和铜离子还原能力测定其不同浓度乙醇提取物的体外抗氧化活性,并采用熵值法综合评价遴选出抗氧化活性强的松针资源,为松针的进一步开发利用提供参考。研究表明:采用不同浓度乙醇提取时,40%乙醇提取物的抗氧化活性最好;不同品种松针中,雪松松针的抗氧化活性最好,其中天水产雪松松针40%乙醇提取物的评分最高达99.52%,表明其可以作为进一步研究松针抗衰老研究的资源。

甘草中20种无机元素的测定及对有害元素的健康风险评估

目的测定甘草中无机元素含量,并对重金属及有害元素进行污染分析及健康风险评估。方法采用电感耦合等离子体质谱法及原子荧光光谱法测定甘草中的无机元素含量及数据分析。通过计算样品中Pb、Cd、As、Hg和Cu5种重金属及有害元素的单向污染指数和综合污染指数对其进行安全性评价,通过计算每日最大可耐受摄入量(maximum tolerable daily intake,EDI)、靶标危害系数(target hazard quotients,THQ)和致癌风险(carcinogenic risk,CR),对甘草中5种重金属元素和有害元素进行健康风险评估,计算出甘草中各重金属的推荐重金属限量值(maximumresiduelimit,MRL)。结果得到的各无机元素在各自范围内线性关系良好(0.9969≤R2≤0.9996),样品稳定性、重复性、加标回收率及仪器精密度良好;Cr、Mn、Ni、Cu、Rb、Sr和Ba元素含量较高,并且各样品间各元素含量具有一致性和差异性;主成分分析中22个样品得到5个主成分,累计方差贡献率达84.308%,确定Ga、V、Cs、Se、Co、As、U、Ni、Cd和Hg是甘草的特征无机元素;相关性分析结果与主成分分析结果基本一致;健康风险评估结果显示甘草样品均对暴露人群无明显健康危害,其致癌风险也可忽略不计。结论本研究所建立的方法可有效进行甘草无机元素的测定及来源判别,并为甘草健康风险评估提供了科学依据。

甘草联合顺铂对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制作用及肾损伤保护作用

目的 探讨甘草联合顺铂对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制作用及肾损伤保护作用。方法 小鼠接种H22肝癌细胞,建立异位荷瘤模型。荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组(3 mg/kg)和顺铂联合甘草低、中、高剂量组(3 mg/kg+0.65、1.30、2.60 g/kg)。HE染色观察肿瘤组织和肾组织病理形态变化,免疫组化法检测肿瘤组织Bcl-2、Bax蛋白表达,ELISA法检测血清BUN、Cr水平和肾组织MDA水平、SOD活性。结果 与模型组比较,各给药组小鼠肿瘤体积和质量减小(P<0.01),Bcl-2蛋白表达、SOD活性降低(P<0.05,P<0.01),Bax蛋白表达、肾损伤评分和BUN、Cr、MDA水平升高(P<0.05,P<0.01);与顺铂组比较,顺铂联合甘草各剂量组小鼠肿瘤体积和质量减小(P<0.05,P<0.01),肾损伤评分和BUN、Cr、MDA水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性升高(P<0.05,P<0.01)。结论 甘草能够协同升高顺铂的化疗效果并减轻H22荷瘤小鼠的肾损伤,具有增效和减毒的作用。

雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及抗氧化活性研究

对雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及其体外抗氧化活性进行研究。在单因素试验基础上,利用Box-Behnken模型对提取液浓缩比、乙醇体积分数和醇沉时间进行优化,比较多糖得率确定最佳雪松松针多糖醇沉工艺条件。以蛋白质清除率和多糖损失率为指标,比较了Sevage法和三氯醋酸(TCA)法的脱蛋白效果,并对试剂用量、脱蛋白次数进行了考察,然后利用DPPH和ABTS自由基法对纯化后多糖的抗氧化活性进行评价。研究结果表明:优化的雪松松针多糖一级醇沉条件为粗提液体积和松针干质量的比例(浓缩比)为3∶1(mL∶g,下同),乙醇体积分数为71%,醇沉温度为40℃,醇沉时间为10 h,在此条件下,雪松松针多糖得率为3.81%,结果与预测值接近。收集多糖后的上清液再按浓缩比1∶1浓缩,筛选得到二级醇沉的乙醇体积分数为80%。Sevage法脱蛋白效率优于TCA法,其最佳条件为Sevage试剂与多糖溶液的体积比为1∶1,脱除蛋白次数为3次,经UV法测得脱蛋白后的一级、二级醇沉多糖(以葡萄糖折算)质量分数分别为35.36%和36.62%。清除DPPH与ABTS自由基能力依次为Vc>二级醇沉多糖>BHT>一级醇沉多糖,纯化后的雪松松针80%醇沉多糖表现出良好的抗氧化活性。

紫斑牡丹花粉化学成分及其体外抗氧化活性

目的研究紫斑牡丹Paeonia rocki i(S.G.Haw&Lauener)T.Hong&J.J.Li花粉化学成分及其体外抗氧化活性。方法紫斑牡丹花粉70%乙醇提取物的正丁醇部位采用硅胶柱、反相硅胶C 18柱、ODS、聚酰胺、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用DPPH法评价其抗氧化活性。结果从中分离得到15个化合物,分别鉴定为柠檬黄素(1)、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、野漆树苷(3)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、柠檬黄素-3-β-D-葡萄糖苷(5)、limocitrin-3-O-y1-β-D-sophoroside(6)、柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、白芍苷R1(8)、苯甲酰芍药苷(9)、白藜芦醇(10)、苯甲酸(11)、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸(12)、没食子酸甲酯(13)、胡萝卜苷(14)、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(15)。化合物1~2、10、15的IC 50值均低于0.02 mg/L,化合物15的IC 50值小于抗环血酸,化合物2的IC 50值与抗环血酸相当。结论化合物2~4、7~10、12、15均为首次从该植物中分离得到。化合物1~7、10、12~13、15均表现出一定的体外抗氧化性。

牡丹花粉片糖配方优化及其消化产物的体外抗氧化活性评价

目的:优选牡丹花粉片糖的配方工艺,并评价其体外抗氧化活性。方法:通过单因素实验对牡丹花粉片糖配方进行遴选;以牡丹花粉、填充剂和甜味剂用量为考察因素,以牡丹花粉片糖的感官指标、硬度、崩解时限的综合评分为评价指标,利用响应面法对牡丹花粉片糖的配方进行优化,并测定其模拟人体各消化产物对DPPH和ABTS+自由基的清除能力。结果:优选出牡丹花粉片糖的最佳配方为牡丹花粉0.7 g,填充剂3.3 g,甜味剂1.7 g,该配方工艺的综合评分为6.39。模拟人体累加消化产物对DPPH和ABTS+自由基最高清除率为91.56%和96.42%。结论:该牡丹花粉片糖配方工艺简便,易于操作,保留了花粉的特有风味,具有体外抗氧化活性。

HPLC法同时测定不同品种、产地、部位松树中莽草酸的含量

研究采用HPLC法同时测定不同品种、产地、部位松树中莽草酸的含量,以期为开发莽草酸资源提供参考。色谱柱为Agilent Eclipse Plus C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 m),流动相为甲醇/0.1%磷酸水溶液(体积比为10∶90),检测波长为217 nm,柱温为30℃。采用直观分析结合聚类分析对不同品种、产地、部位松树中莽草酸含量的差异性进行统计分析。结果表明:莽草酸的线性关系良好(r=0.9995),平均加样回收率为100.4%(n=6),RSD为1.71%。6种松树中的莽草酸含量由高到低依次为雪松、华山松、白皮松、油松、樟子松、落叶松。其中,天水雪松松针中的莽草酸含量最高,达31.47 mg/g。通过聚类分析发现,6种松树中的莽草酸可划分为3类。

甘草的抗肿瘤活性研究进展

肿瘤的发病率与死亡率逐年递增,严重威胁人类健康,故寻找高效低毒的抗肿瘤药物已成为全世界共同的关注点。甘草是临床常用药,科研工作者对甘草进行了深入的研究,发现其具有一定的抗肿瘤活性。甘草既能以化学提取物抗肿瘤,又能以单味药抗肿瘤,还能以复方或与西药协同的方式抗肿瘤。总结甘草抗肿瘤作用并对其进行归纳,展现传统中药在抗肿瘤方面不可忽视的优势。

基于网络药理学和细胞验证探讨甘草抗肺癌机制

目的基于网络药理学探究甘草对肺癌的作用机制,并进行细胞实验验证。方法通过TCMSP筛选甘草药效活性成分,整理并校正其相应作用靶点,通过GeneCards、OMIM、DrugBank数据库收集肺癌相关基因靶点,筛选甘草治疗肺癌的关键靶点,利用STRING、DAVID数据库对关键靶点进行蛋白相互作用(PPI)网络分析及GO和KEGG通路富集分析,采用Cytoscape构建靶点-化合物网络。检测不同浓度甘草提取物对A549细胞存活率的影响,采用Western blot检测A549细胞Bax、Bcl-2、HIF-1α及GLUT1蛋白表达。结果筛选甘草活性成分88个,作用靶点213个,肺癌靶点23458个,匹配映射得到关键靶点209个。通过疾病-药物活性成分-作用靶点网络和PPI网络分析筛选出与甘草关联程度较大的靶点43个。GO富集分析得到生物过程1202条、细胞组分46条、分子功能64条。KEGG通路富集分析得到甘草治疗肺癌的通路226条,主要包括癌症相关通路、HIF-1信号通路、动脉粥样硬化、小细胞肺癌、幽门螺杆菌感染的上皮细胞信号转导等。体外实验表明,甘草提取物对A549肺癌细胞增殖具有显著抑制作用,可上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2、HIF-1α及GLUT1蛋白表达。结论本研究通过网络药理学分析得到甘草治疗肺癌的活性成分、作用靶点及信号通路,可为甘草的抗癌活性及作用机制研究奠定基础。

甘草内生菌对顺铂诱导HEK293细胞损伤的保护作用及机制研究

基于体外实验建立顺铂诱导肾细胞损伤模型,探讨甘草内生菌对顺铂诱导人胚肾293(HEK293)细胞损伤的减毒作用机制。通过MTT法检测甘草内生菌、顺铂及两者联合用药对HEK293细胞存活率的影响,流式细胞术检测不同干预下HEK293细胞凋亡率的变化,Q-PCR及Western blot法检测凋亡相关指标Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及内质网应激通路(GRP78、CHOP)mRNA和蛋白表达的变化。结果表明,顺铂诱导HEK293细胞损伤,具有时间和剂量依赖性。甘草内生菌能够明显降低顺铂损伤模型细胞凋亡率,通过下调Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达发挥对顺铂诱导肾细胞损伤的保护作用。综上,甘草内生菌能够改善顺铂诱导的HEK293细胞损伤,其作用机制可能是通过调控Bcl-2家族、Caspase家族凋亡蛋白及内质网应激通路蛋白来实现抗凋亡作用,减轻细胞损伤。

顺铂联合中药活性成分抗肿瘤作用机制研究进展

恶性肿瘤由于其不断上升的发病率和死亡率已成为世界范围的主要死亡原因,严重威胁人们的身体健康。肿瘤治疗常采用手术切除、化疗及放疗等方式,主要以化疗为主,化疗药物顺铂常用于治疗卵巢癌、肺癌、乳腺癌等多种实体癌,然而顺铂在抗肿瘤的同时也会产生肝毒性、肾毒性等毒副作用,限制其临床应用^([1-2])。近年来,中药因其多组分、多途径、多靶点的综合作用而被研究人员广泛用于与其它药物联用发挥增效减毒作用,且部分中药具有抗肿瘤作用,故中医药辅助化疗药物抗肿瘤的研究成为当前的热点。本文对顺铂的抗肿瘤作用及近10年来顺铂联合中药活性成分抗肿瘤的研究进展进行概述,以期为抗肿瘤药物的联合应用提供依据。

基于超高效液相色谱-串联质谱技术对两株甘草内生菌次生代谢产物化学成分的差异分析

参照甘草原植物对甘草中两株内生菌JTYB34和JTZB55的化学成分进行综合分析比较,对甘草内生菌次生代谢产物主要化学成分进行差异分析。采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术,根据高分辨质谱提供的精确相对分子质量和碎片离子信息,结合UPLC-MS/MS检测平台和自建数据库对甘草及甘草内生菌的化学成分进行定性和定量分析。进一步结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析方法筛选甘草内生菌JTYB34、内生菌JTZB55、甘草三者之间的差异成分。结果显示,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术共鉴定出1199个成分,且甘草内生菌JTYB34、内生菌JTZB55、甘草这三者之间化学成分存在显著差异。以甘草为参照物,大部分黄酮类、酚酸类、脂质类及有机酸类等化合物在JTYB34及JTZB55中含量呈现下降趋势,且化合物种类亦随之减少。聚类分析将甘草聚为Ⅰ类,JTYB34聚为Ⅱ类,其余聚为Ⅲ类;结合PCA、OPLS-DA分析结果,筛选出异甘草素、甘草酸胺、甘草黄酮A、甘草苷、4-羟基甘草查耳酮A等29个具有显著性差异的化合物。甘草内生菌JTYB34、甘草内生菌JTZB55及甘草这三组样品之间两两比较,在化学成分的含量和种类上均存在显著差异,这一发现可为甘草内生菌的药理活性研究提供一定的数据参考。

糙叶败酱化学成分研究

目的:研究糙叶败酱的化学成分。方法:利用硅胶及Sephadex LH-20凝胶柱色谱对其化学成分进行分离、纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果:从糙叶败酱石油醚和氯仿萃取部位分离得到7个化合物,分别为:白花败酱醇(Ⅰ)、黄花败酱醇(Ⅱ)、原儿茶酸(Ⅲ)、胡萝卜苷(Ⅳ)、油酸(Ⅴ)、β-谷甾醇(Ⅵ)、芥酸(Ⅶ)。结论:化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅶ为首次从该植物中分离得到。

糙叶败酱化学成分及药理活性研究进展

糙叶败酱Patrinia scabra Bunge为败酱科败酱属Patrinia植物，异名鸡粪草（《本草原始》）、箭头风、臭罐子等，俗名脚汗草，多年生草本，高20～60cm，根茎粗短，根粗壮圆柱形，具特异臭气，分布于河北、山西及甘肃等地。

安乳颗粒中挥发油β-环糊精包合物的制备工艺研究

目的优选安乳颗粒中挥发油的提取及其β-环糊精的包合工艺。方法以提油量为指标,对影响挥发油提取的因素(加水量、提取时间)进行考察;以挥发油β-环糊精的包结率为考察指标,应用L9(34)正交实验法优选挥发油β-环糊精的包合工艺。结果挥发油的最佳提取工艺为加水8倍量,蒸馏6 h。影响挥发油包结因素大小依次为A>C>B,最佳工艺条件为:A2B3C2,即油∶β-CD配比为1∶6,恒温40℃搅拌包结1.5 h。结论该优选制备工艺合理,挥发油提出率和包结率高,适用于工业化生产。

苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定糙叶败酱多糖含量的比较研究

目的：建立并遴选糙叶败酱多糖含量测定方法。方法：采用水提醇沉的方法提取糙叶败酱多糖,然后分别运用蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法测定多糖含量,比较2种测定方法得到数据之间的差异和准确性。结果：苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法分别在0.010~0.080 mg/m L（r2=0.999 1）和0.010~0.060 mg/m L（r2=0.999 4）浓度范围内线性关系良好,含量测定结果分别为1.60%和2.12%,蒽酮硫酸法测得值高于苯酚硫酸法;但相比较而言,苯酚硫酸法显色灵敏,颜色稳定,操作简便,结果更为合理准确。结论：糙叶败酱多糖含量测定时可优先考虑苯酚-硫酸法。

紫斑牡丹花粉乙酸乙酯部位化学成分研究

对紫斑牡丹花粉的化学成分进行研究,综合运用硅胶、聚酰胺、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及制备型高效液相等色谱技术,从该花粉70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到18个化合物,其结构由HR-ESI-MS、1H和13 C NMR等波谱学方法鉴定为腺苷(1)、芹菜素(2)、柠檬黄素(3)、8-甲氧基山萘酚(4)、槲皮素(5)、柠檬素-3-β-D-葡萄糖苷(6)、sexangularetin-3-O-y1-β-D-sophoroside(7)、limocitrin-3-O-y1-β-D-sophoroside(8)、芍药苷(9)、芍药内酯苷(10)、氧化芍药苷(11)、β-谷甾醇(12)、没食子酸(13)、肉豆蔻酸(14)、亚油酸(15)、对羟基苯甲醛(16)、邻苯二甲酸二戊酯(17)和蔗糖(18),以上化合物均为首次从紫斑牡丹花粉中分离得到,其中化合物3、4、6为首次从该属植物中分离得到。

祖师麻凝胶膏剂基质处方的优化

目的优选祖师麻凝胶膏剂的最佳基质处方。方法单因素试验对基质处方配比进行筛选,以基质的感官评分、初黏力、持黏力、剥离强度的综合评分为评价指标,聚丙烯酸钠NP-700、卡波姆940、甘羟铝、甘油的用量为考察因素,Box-Behnken试验设计对其进行优化。结果最佳基质处方为聚丙烯酸钠NP-700-卡波姆940-甘羟铝-甘油-高岭土-柠檬酸(2∶0.3∶0.1∶10∶0.5∶0.1)。结论该基质黏着力适中,无残留,膏体性状、皮肤追随性均较好,可用于祖师麻凝胶膏剂的制备。

雪松松针化学成分研究(Ⅱ)

目的:研究雪松松针的化学成分。方法:利用硅胶柱层析及Sephadex LH-20凝胶等色谱技术分离、纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果:从雪松松针95%乙醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为:二十九烷醇-10(1)、邻苯二甲酸二丁酯(2)、原儿茶酸(3)、邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯(4)、(E)-1-O-对香豆酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、5-p-trans-coumaroylguinic acid(6)。结论:化合物1～6均为首次从该属植物中分离得到。

紫斑牡丹花粉中异鼠李素的定性定量分析及总黄酮的含量测定

目的:建立甘肃紫斑牡丹花粉中异鼠李素的定性定量分析及总黄酮含量测定的方法。方法:采用薄层色谱法对紫斑牡丹花粉中异鼠李素进行定性鉴别;采用高效液相色谱法,以Agilent Eclipse plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,流动相:甲醇-乙腈-0.1%磷酸(25∶13∶62),流速:1.0 m L·min-1,在360 nm波长下,对紫斑牡丹花粉中异鼠李素的含量进行定量分析。采用紫外分光光度法,以芦丁为对照品,在510 nm波长下,对紫斑牡丹花粉中总黄酮含量进行测定。结果:薄层鉴别色谱特征斑点明显,重现性好;异鼠李素浓度在8.4~168.0μg·m L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=9)为100.8%(RSD=2.36%),测得紫斑牡丹花粉中异鼠李素含量为3.21~8.91 mg·g^(-1)。总黄酮浓度在0.01~0.06 mg·m L-1范围内与吸收度呈良好的线性关系(r=0.9992),平均回收率(n=9)为101.06%(RSD=2.56%),测得紫斑牡丹花粉中总黄酮含量为9.44~15.96 mg·g^(-1)。结论:所建方法操作简单,准确可靠,重复性好,可用于甘肃紫斑牡丹花粉的质量控制。