索风营水电站Dr2危岩体稳定性研究

针对贵州索风营水电站Dr2危岩体的工程实际,采用刚体极限平衡法和三维有限单元法进行计算分析,得到了Dr2危岩体加固治理前后的稳定性安全系数,并对结果进行了比较,为其边坡治理提供了依据。

慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死

背景:骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165均在骨修复过程中扮演着重要角色。利用慢病毒介导这2种基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗骨损伤具有重要意义。目的:观察慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165基因共转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死的效果,以此来探讨双基因在未来骨损伤修复过程中的可行性。方法:采用液氮冰冻联合髓芯减压方法制备股骨头坏死模型,将造模成功的实验兔分为3组(n=12):(1)未转染组:植入骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨;(2)单基因转染组:植入骨形态发生蛋白2转染的骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨;(3)双基因转染组:植入骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165共转染的骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨。术后3,6,9周各组分别处死4只兔子,Westernblot检测股骨头内骨形态发生蛋白2蛋白的表达量;苏木精-伊红染色观察股骨头坏死修复情况。实验方案经桂林医学院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:(1)术后3,6,9周各组均有骨形态发生蛋白2阳性表达,单基因转染组、双基因转染组表达量均高于未转染组(P<0.05),且呈递增趋势;术后3周,单基因转染组、双基因转染组骨形态发生蛋白2表达差异无显著性意义(P>0.05);术后第6,9周,双基因转染组骨形态发生蛋白2表达量明显高于单基因转染组(P<0.05);(2)术后9周,双基因转染组新生骨痂可填满股骨头缺损处,未转染组、单基因转染组虽有骨痂形成,但均未填满缺损处;苏木精-伊红染色示未转染组有初级骨小梁形成,但骨细胞坏死较多,骨小梁较少;单基因转染组有大量骨小梁形成,形态较好,仅有部分中断,仍不及正常骨组织;双基因转染组形成大量成熟致密骨小梁,形态与正常骨组织无明显差异;(3)结果表明,慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因共转染兔骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗股骨头坏死的效果优于骨形态发生蛋白2单基因转染形式,且目的蛋白能在体内长期有效表达。

慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

背景:骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)均为骨修复过程中必不可少的细胞因子,利用慢病毒转染干细胞研究双因子作用下细胞的生物学改变具有重要意义。目的:探讨慢病毒介导人BMP-2和人VEGF-165双基因转染(2次转染)骨髓间充质干细胞的可行性以及转染后细胞的诱导成骨性能。方法:将骨髓间充质干细胞分为4组:(1)未转染组;(2)空载组:通过2次相同感染复数的空载慢病毒转染细胞;(3)BMP-2组:转染了单个目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP);(4)BMP-2/VEGF-165组:通过2次转染后携带双目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP,Lv-VEGH-165/RFP)。转染后不同时间点Western Blot检测目的蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖活性,转染后14 d检测各组细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)空载组、BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组在荧光显微镜下均可见相应的绿色及红色荧光蛋白表达;(2)转染后3 d,BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组均有相应目的蛋白高表达;转染后7,14,21 d,目的蛋白检测无明显变化(P>0.05);(3)BMP-2/VEGF-165组增殖稍快于BMP-2组(P<0.05),BMP-2组明显快于未转染组、空载组(P<0.05);(4)BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组碱性磷酸酶活力明显高于未转染组、空载组;(5)结果表明,慢病毒介导的h BMP-2和h VEGF-165双基因经2次转染成功转入兔骨髓间充质干细胞内,并长期稳定表达,该双因子的表达能通过刺激细胞碱性磷酸酶生成促使细胞更好的向成骨细胞分化。

脂质体和慢病毒介导P75神经生长因子受体及神经生长因子转染骨髓间充质干细胞的效果比较

背景:P75神经生长因子受体(P75 neurotrophin receptor,P75^(NTR))在不同细胞中可以介导截然不同的信号通路,但是在骨髓间充质干细胞中所传导的调节作用还尚未研究;脂质体和慢病毒介导单基因转染细胞技术已趋向成熟,但是其介导双基因转染的差异比较还未见报道。目的:构建大鼠P75^(NTR)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的过表达质粒及慢病毒载体,比较脂质体和慢病毒介导2种基因转染骨髓间充质干细胞的效果和实用性,以便于今后根据不同实验要求选择实验最优方案。方法:设计大鼠P75^(NTR)及NGF的基因引物,提取基因组DNA进行PCR扩增、与质粒载体重组构建表达增强绿色荧光的GV358-P75^(NTR)、表达增强红色荧光的GV492-NGF过表达质粒,转染293T细胞,加入慢病毒载体超速离心,收集目的基因过表达慢病毒,测定病毒样品滴度;选取体外培养的大鼠原代骨髓间充质干细胞,一组用脂质体Lipo3000共转染质粒GV358-P75^(NTR)、GV492-NGF,另一组用慢病毒共感染,同时设置阴性对照组和空白对照组,对转染后的骨髓间充质干细胞常规培养,第3,5,7,9,12天用荧光显微镜观察红绿荧光的表达,Westernblot检测P75^(NTR)及NGF蛋白表达,对转染后培养至7d的骨髓间充质干细胞进行消化传代培养,培养第3,5,7,9,12天用荧光显微镜观察红绿荧光的表达以及Western blot检测P75^(NTR)、NGF蛋白的表达。结果与结论:①构建的GV358-P75^(NTR)、GV492-NGF过表达质粒及慢病毒符合实验设计;②显微镜视野中红绿色荧光的丰度:脂质体共转染组先增加后降低,慢病毒共感染组持续增多;各时间点慢病毒组均多于脂质体组;脂质体转染组传代培养细胞的荧光表达相比于未传代前降低,而慢病毒转染组未见明显变化;③各时间点慢病毒感染组的P75^(NTR)及NGF蛋白表达量明显高于脂质体组,目的基因转染组的P75^(NTR)及NGF蛋白表达量均高于阴性对照组及空白对照组,差异有显著性意义(P<0.05);④P75^(NTR)、NGF双基因均能通过脂质体和慢病毒共转染方法在大鼠骨髓间充质干细胞中过表达;脂质体双基因转染操作相对简便,实验设备依赖性低,费用相对低廉,但感染效率明显低于慢病毒,而慢病毒双基因共感染后目的基因存在着持续表达,传代后基因丢失现象不明显。

过表达P75神经生长因子受体负向调控骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:P75^NTR广泛表达于神经组织及细胞中,并发挥着促进或抑制分化的双重作用;同时在骨折不愈合局部组织中也发现了P75^NTR存在着过表达,因此研究P75NTR对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用具有重要的意义,为临床上提高骨折不愈合修复的疗效提供重要靶点。目的:观察P75NTR过表达对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导成骨分化的影响。方法:选取SD大鼠双侧股骨,用全骨髓分离贴壁法提取大鼠骨髓间充质干细胞并进行体外传代培养;构建表达EGFP的P75^NTR过表达质粒GV358-P75^NTR,并用空慢病毒载体包装收集P75NTR过表达慢病毒载体;选取体外培养至原代10d的大鼠骨髓间充质干细胞,消化后种板,加入P75^NTR过表达慢病毒及相关感染试剂进行感染实验,感染7d后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测P75^NTR蛋白的过表达情况;感染后用常规培养基培养7d,更换成骨诱导分化培养基培养,诱导培养后第7,10,14天用酶标法定量检测碱性磷酸酶活力,诱导培养后第7,14天用茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果与结论:①P75NTR过表达慢病毒感染骨髓间充质干细胞后能表达出绿色荧光蛋白(感染效率约90%),且P75NTR蛋白表达量明显增多,与阴性病毒对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),过表达P75NTR细胞模型构建成功;②与阴性病毒对照组及未转染组相比,P75NTR过表达组细胞诱导分化后相应时间点的碱性磷酸酶活力明显降低,矿化结节形成减少,细胞聚集分布减弱,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,P75NTR过表达负向调控了大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化。局部组织中P75NTR过表达抑制周围骨髓间充质干细胞成骨分化可能是骨缺损或骨折不愈合的重要因素。

江河钢浮架网箱养鱼

重庆地区属亚热带季风气候，地处长江、嘉陵江交汇处，山地、多浅丘的特点决定了本地区水产只能依托山塘、水库及池塘、稻田．如何进一步拓展水产业，人们目光自然转向江河。长江、嘉陵江鱼类资源丰富，物种繁多，即将截流形成的三峡平湖为水产集约化产业提供了巨大的天然水域。

三峡船闸南坡竖井混凝土施工的模板

针对三峡永久船闸输水系统南坡竖井数量多、体形复杂、施工条件差、干扰大、交通困难、工期紧等特点 ,施工中采用了三种非常规混凝土模板 (滑框翻模、自升式筒模、悬臂模板 ) ,对它们的构造及施工注意事项进行了论述 ,并比较它们的优缺点。

一株产纤维素酶益生芽孢杆菌的筛选与鉴定

从健康大鳍鳠（mystua macnopterue）肠道菌群分离得到的25株细菌，通过平板筛选、发酵液酶活力测定和菌株安全性检测，筛选出一株具有较高产纤维素酶能力的益生芽孢杆菌DQHY－7菌株。通过对DQHY-7菌株形态观察、生理生化试验，对DQHY－7菌株进行了分类鉴定。结果显示：DQHY-7菌株具有较强的分泌纤维素酶能力，水解圈／菌落直径比为12．77，20h发酵液酶活为39．61U／mL。急性毒性试验表明，浓度为1．0×108CFU／mL的DQHY-7菌悬液对大鳍鳠没有致病性。结合DQHY-7菌株菌落生长形态和生理生化特性，初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。研究结果表明DQHY-7菌株可以作为一个新的饲用微生态制剂候选菌种。