人胰腺癌相关粘蛋白核芯多肽的提取与特性

应用分子筛层析及氯化铯密度梯度离心从人胰腺癌细胞株SW1990提取、纯化获得粘蛋白,再用氟氢酸去除粘蛋白的碳水化合物而获得核芯肽。对粘蛋白核芯肽进行了氨基酸组份分析,并以免疫印迹及ELISA法进行免疫原分析,结果表明所提取的核芯肽至少含有Muc-1,Muc-2,及Muc-3三种不同氨基酸序列的多肽,免疫印迹表明此核芯肽含有从28至大于90KD的多条肽。在此基础上,制备了抗此核芯肽的单克隆抗体,5株单克隆抗体与多种癌细胞起反应,但多不与正常组织起反应,仅一株单克隆抗体MY-5与部分正常组织反应。这为进一步观察癌相关核芯肽病理生理功能打下了基础。

癌相关抗原粘蛋白前体诱导人肿瘤引流区淋巴结的细胞毒作用

人肿瘤相关抗原可诱导宿主的细胞免疫反应已被证实。一些肿瘤粘蛋白也证实可诱发T细胞细胞毒作用。本研究是观察从胰腺癌细胞株提取的粘蛋白核芯肽诱导人肿瘤引流区淋巴结细胞的抗肿瘤免疫作用。4例乳腺癌、3例胃癌、3例结肠癌的肿瘤引流区淋巴结手术切除后立即在体外培养于含50μg/ml胰癌核芯肽及50单位IL-2的培养基中,观察其对多种癌细胞的杀伤效应(MMT法)。结果表明体外经胰癌核芯肽刺激后增殖的淋巴结细胞对多种肿瘤细胞有杀伤作用,如结肠癌、胃癌、胰腺癌及白血病细胞K562。本研究结果为以肿瘤粘蛋白核芯肽制备疫苗用于主动特异性免疫治疗或过继免疫治疗打下基础。

肿瘤混合粘液核芯肽诱发小鼠免疫反应实验研究

我们采用凝胶过滤和密度梯度离心技术从胰腺癌细胞株SW1990细胞匀浆和细胞培养上清中提取了肿瘤粘液，用无水氧氟酸方法去掉糖链后获得粘液核芯肽，经PAGE和SDS-PAGE及免疫印迹分析表明．从细胞匀浆和细胞培养上清提取的粘液为同一成份。分子量为670kD，亚单位为28kD，以二硫链相连，

肝癌凋亡细胞相关蛋白的表达分析

目的：分析肝癌凋亡细胞与肝癌细胞所表达的蛋白质在分子量分布上的差异。方法：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后薄层扫描。结果：肝癌凋亡细胞所表达蛋白质的分子量普遍较大。在分子量大于６．７×１０４ｕ时，凋亡的肝癌细胞有７个较为明显的蛋白扫描峰，与未凋亡的肝癌细胞具有明显的区别。部分大分子量的凋亡相关蛋白在肝癌凋亡细胞表达量很高，其蛋白质扫描峰的面积可占总面积的８％。结论：肝癌凋亡细胞有较大分子量的蛋白质表达，可通过分子筛等分离工具分离某些蛋白质并进一步鉴定其生物学功能。

应用消减免疫法制备凋亡肝癌细胞相关蛋白的抗体

目的：探讨消减免疫法在分析肝癌细胞凋亡反应中瞬时表达的某些相关抗原分子的作用。方法：利用消减免疫法制备抗肝癌凋亡细胞相关抗原的抗体；用ＥＬＩＳＡ方法检测抗原、抗体反应。结果：应用消减免疫法制备的抗凋亡肝癌细胞相关抗原的多克隆抗体与肝癌凋亡细胞相关抗原的反应较强；与非凋亡肝癌细胞的抗原反应较弱。其抗原表位主要是蛋白质或多肽。结论：消减免疫法可用于分析肝癌细胞凋亡反应中瞬时表达的相关抗原分子；凋亡过程中有新的蛋白质表达。

肿瘤混合粘液核芯肽诱导的人肿瘤引流区淋巴结细胞毒反应

我们采用凝胶过滤和密度梯度离心技术从胰腺癌细胞株SW1990细胞匀浆和细胞培养上清中提取了肿瘤粘液，用无水氢氟酸去掉糖链后，经鉴定为不含糖的肿瘤混合粘液核芯肽(MUC)，主要成份为MU-C1、MUC2和MUC3。动物实验表明具有诱发细胞免疫反应作用，本研究进一步观察其诱导人肿瘤引流区淋巴结细胞的体外扩增及溶瘤的作用。

肿瘤粘液核芯肽MUC3诱导小鼠的免疫反应实验研究

我们采用凝胶过滤和密度梯度离心技术从胰腺癌细胞株SW1990细胞匀浆和细胞培养上清中提取了肿瘤粘液，用无水氢氟酸去掉糖链后，经鉴定为不含糖的肿瘤混合粘液核芯肽(MUC)，主要成份为MU-C1，MUC2和MUC3。动物实验表明具有诱发细胞免疫反应的作用，为分析混合粘液核芯肽诱发机体免疫功能的有效成份，我们用MUC3的合成肽作了进一步的实验研究。

MUC2诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究

目的：探讨肿瘤粘液糖蛋白的核心多肽ＭＵＣ２诱导的抗肿瘤免疫应答。方法：测定多肽ＭＵＣ２免疫后小鼠的皮肤迟发型超敏反应（ＤＴＨ）和脾淋巴细胞的体外细胞毒反应。结果：ＭＵＣ２可诱导小鼠的ＤＴＨ；体外脾淋巴细胞对ＭＵＣ２表达阳性的粘液腺癌细胞系，如人胰腺癌细胞株ＳＷ１９９０和人胃癌细胞株ＫＡＴＯ－３，都具有强的细胞毒作用；抗ＭＵＣ２的抗体ＬＳＢ可抑制体外鼠脾细胞的细胞毒作用。结论：肿瘤相关抗原ＭＵＣ２可诱导小鼠的细胞免疫应答，并可能作为一种有效的免疫原用于提高抗肿瘤免疫应答。

磁珠-cDNA作为重复使用的cDNA探针合成模板的研究

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DNA断裂损伤在抗癌药物诱导肝癌细胞凋亡反应中的作用

目的：探讨抗癌药物等对ＤＮＡ直接损伤因素所致的ＤＮＡ断裂损伤在凋亡反应中所起的作用．方法：采用定量原位缺口平移技术检测阿霉素等抗癌药物诱导的肝癌细胞凋亡反应中的单位细胞ＤＮＡ断裂损伤程度．结果：高浓度（大于２０μｍｏｌ／Ｌ）阿霉素在凋亡反应的早期无可检测的ＤＮＡ断裂，也无凋亡细胞产生；较低浓度（２μｍｏｌ／Ｌ）阿霉素在药物作用早期有可检测的ＤＮＡ断裂，同时也有凋亡细胞产生；而５－氟尿嘧啶在检测浓度范围内（０．２～１００ｍｍｏｌ／Ｌ）均有ＤＮＡ断裂损伤，但无凋亡细胞产生．结论：ＤＮＡ断裂损伤可能并非诱导凋亡反应所必须．

MUC3诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究

目的 探讨肿瘤粘液糖蛋白的核心多肽ＭＵＣ３诱导的抗肿瘤免疫反应。方法 测定多肽ＭＵＣ３ 免疫后小鼠的皮肤迟发性超敏反应（ＤＴＨ）和脾淋巴细胞的体外细胞毒反应。结果 ＭＵＣ３可以诱导小鼠的ＤＴＨ反应；体外脾淋巴细胞对ＭＵＣ３表达阳性的粘液腺癌细胞系，如人胰腺癌细胞株ＳＷ１９９０、人胃癌细胞株ＫＡＴＯ３都具有强的细胞毒作用，ＭＵＣ３的抗体Ｍ３Ｐ可以抑制体外鼠脾细胞的细胞毒作用。结论 ＭＵＣ３作为一类重要的肿瘤相关抗原，可以诱导小鼠的细胞免疫反应，并可能作为一有效的免疫原用于提高抗肿瘤免疫反应。

肿瘤疫苗(Lipostn)诱导肿瘤引流区淋巴结淋巴细胞的体外溶瘤作用

从12例胃癌患者，6例结肠癌患者引流区淋巴结中分离淋巴细胞，与肿瘤疫苗(Lipostn)中非佐剂部分在体外共培养扩增．借助MTT比色法及^61Cr释放实验研究了淋巴结淋巴细胞在Lipostn的刺激后对抗原表达阳性和阴性的传代肿瘤细胞系的杀伤效应。实验结果表明：(1)．肿瘤引流区淋巴细胞与在无分裂原的刺激下被Lipostn刺激，

利播仃(Lipostn)肿瘤疫苗诱发BALB/c小鼠的抗肿瘤免疫作用Ⅰ——体液免疫

肿瘤疫苗是主动特异性免疫治疗肿瘤的一种重要手段。目前国际上采用提取或合成肿瘤相关抗原制成疫苗，并已进人临床Ⅰ／Ⅱ期应用，我们提取了一种特异性较好的肿瘤相关抗原。它在正常组织中很少表达，在腺瘤中表达很高．并和我室自制的新型佐剂组成了肿瘤疫苗，取名利播仃(Liposton)。用它免疫BACB／c小鼠诱发机体免疫功能。

利播仃(Lipostn)肿瘤疫苗诱发BALB/c小鼠的抗肿瘤免疫作用Ⅱ——细胞免疫

前文阐述了利播仃肿瘤诱发BALB／c小鼠的体液免疫．激活B淋巴细胞，使其分泌高滴度、高特异性及有细胞毒的抗体。对于主动特异性免疫治疗肿瘤的疫苗来说，仅有此作用是不够的，必须能激活机体的免疫系统，发挥免疫功能，产生细胞免疫，对肿瘤细胞发起多方位的主动攻击。这就是肿瘤疫苗的主动特异性免疫治疗肿瘤的独特之处。

肝癌凋亡细胞cDNA文库构建及其凋亡相关基因的初步筛选

目的：通过肝癌凋亡细胞。DNA文库的构建，进而筛选人肝癌细胞凋亡相关基因。方法：用阿霉素诱导人肝癌HCC－9204细胞凋亡，磁珠法提取mRNA，然后将其反转录为cDNA，将合成的cDNA加上EcoR1接头，并与λgt11载体臂连接，构建为表达的cDNA文库．PCR法鉴定插入片断长度，T载体法克隆插入片断。消减杂交和点杂交法相结合筛选。DNA文库。结果：肝癌凋亡细胞CDNA文库容量为1×106pfu／μgDNA，平均片断长度为1～2kb．筛选CDNA文库得到一长度为1．5kb的DNA片段，并已测其部分序列。结论：构建的肝癌凋亡细胞CDNA文库对筛选和鉴定人肝癌细胞凋亡相关基因具有重要作用。筛选的基因可能是人肝癌细胞凋亡调控基因中的一个。

肿瘤组织中淋巴细胞与瘤细胞相互关系的电镜研究

对12例不同部位癌组织中浸润淋巴细胞与瘤细胞的相互关系进行了电镜研究。发现有少数淋巴细胞以多种方式和瘤细胞相接触。与淋巴细胞接触的瘤细胞有些出现了破坏性改变,这些改变符合细胞自谢(Apoptosis)变化。此等结果表明,有些浸润淋巴细胞在体內对瘤细胞具有杀伤作用,被杀伤瘤细胞的主要死亡形式为自谢。然而由于和瘤细胞接触的淋巴细胞极少,浸润淋巴细胞在肿瘤局部的杀伤作用是非常有限的。

转龙湾煤矿末采快速上网技术研究

在转龙湾煤矿23303工作面末采和贯通回撤通道的过程中,采用高强涤纶纤维柔性塑料假顶网,末采期间一次性铺网,保持顶板的完整性,简化了普通末采上金属网作业流程,消除了普通上网作业期间联网、上网作业期间的安全隐患,保证工作面末采期间的施工连续性,提高了工作面末采期间的推进速度,为工作面安全、高效回撤创造了条件。

ANTI-TUMOR ACTIVITY AND IMMUNE RESPONSES INDUCED BY HUMAN CANCER-ASSOCIATED MUCIN CORE PEPTIDE

Objective: To investigate the immune responses induced by apomucin which is a mixture of mucin core peptide, in mice for elucidating the role of mucin core peptide in the modulation of cancers. Methods: Apomucin was isolated from human pancreatic cancer cell line SW1990. The mice were immunized with this apomucin (10μg/time×6) plus DETOX. Results: When immunized, all mice developed delayedtype hypersensitivity (DTH) after challenged with apomucin or synthetic peptide MUC2 or MUC3, while the mice immunized with apomucin alone did not develop DTH. No antibodies were detected by ELISA after immunization. When the spleen cells of vaccinated mice were cocultured with this apomucin (10—50μg/ml) and rhIL2(50U/ml) in vitro, the proliferated lymphocytes showed cytotoxicity against human cancer cells, including colon cancer, gastric cancer, pancreatic cancer and leukemia as measured by Cr51 release assay. Antibodies against MUC2 and MUC3 could block the cytotoxicity. Conclusion: It was identified that a vaccine combined of apomucin and immune adjuvant DETOX can induce cellular immune response and antitumor cytotoxicity in mice.

肝癌凋亡细胞相关抗原的初步研究

目的分析肝癌细胞凋亡反应中瞬时表达的某些相关抗原分子。方法利用消减免疫法制备抗肝癌凋亡细胞相关抗原的抗体，ＥＬＩＳＡ和免疫斑点法检测抗原抗体反应，免疫细胞化学法鉴定抗原的细胞内定位。结果该抗体与肝癌凋亡细胞相关抗原反应较强，与非凋亡的肝癌细胞抗原反应较弱，其抗原决定簇主要是蛋白质或多肽。该抗原主要表达于肝癌凋亡细胞的细胞膜、细胞浆及细胞核未见该抗原的表达。结论凋亡的肝癌细胞有一定的表型，可用来检测细胞的凋亡反应；凋亡过程中有新基因的表达，可用该抗体筛选肝癌凋亡细胞新表达的基因。

人癌相关粘蛋白前体诱发小鼠抗肿瘤免疫反应的研究

从胰腺癌细胞株ＳＷ１９９０提取粘蛋白核心肽，加佐剂ＤＥＴＯＸ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，观察其诱发小鼠的抗肿瘤免疫反应。六次免疫后，产生了皮肤迟发超敏反应，其脾细胞在体外可杀伤种种瘤细胞，包括胃癌，结肠癌，胰腺癌；对急性料细胞白血病Ｋ５６２也有弱杀伤。