温针灸调控膝骨关节炎模型兔关节软骨中PI3K/Akt信号通路的变化

背景:温针灸临床治疗膝骨关节炎疗效显著,但基础治疗机制尚未明确。目的:观察温针灸对兔膝骨关节炎模型关节软骨中PI3K/Akt信号通路及其下游因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法:取6月龄新西兰兔40只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、药物组、温针灸组,每组10只。模型组、药物组、温针灸组兔右后肢膝关节伸直位以石膏管型固定4周,制备膝骨关节炎模型。造模成功后,模型组每日置于兔架上固定15 min,药物组每天行硫酸氨基葡萄糖灌胃治疗(77 mg/kg,1次/d),温针灸组每天行温针灸治疗(15 min/次,1次/d)。连续治疗28 d后,利用苏木精-伊红染色观察软骨损伤程度,Tunel法检测软骨细胞凋亡,RT-PCR法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表达,Western blot法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色显示,模型组软骨细胞数量减少,细胞排列无序,层次紊乱,软骨面被破坏,Mankin评分显著升高;药物组与温针灸组软骨细胞数量明显增多,基质着色深,Mankin评分降低;(2)与正常组相比,模型组软骨细胞凋亡率增高(P<0.05);与模型组相比,药物组、温针灸组软骨细胞凋亡率降低(P<0.05);(3)RT-PCR与Western blot检测显示,与正常组相比,模型组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),Bax的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,温针灸组与药物组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),Bax的mRNA与蛋白降低(P<0.05);(4)结果表明温针灸可通过调控PI3K/Akt信号通路引起下游因子Bcl-2表达升高、Bax表达降低,进而抑制软骨细胞过度凋亡,达到保护关节软骨的作用。

温针灸对膝关节骨性关节炎软骨下骨中OPG、RANKL蛋白表达的影响

目的观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔软骨下骨中OPG、RANKL蛋白的影响,探讨温针灸治疗膝骨关节炎的效应机制。方法选取6月龄新西兰雄兔40只,经随机数字表法分为温针灸组、西药组、模型组、空白对照组,每组10只。实验干预后采用HE染色观察软骨及软骨下骨形态结构,免疫组化法检测各组软骨下骨组织中OPG、RANKL蛋白的表达。结果 (1)HE染色:空白组软骨层结构清晰完整;模型组软骨及软骨下骨受损严重,软骨下骨中软骨细胞排列紊乱,大小、密度不均;西药组与温针灸组较模型组软骨面光滑、完整,软骨下骨细胞分布较均匀。(2)免疫组化:OPG于空白组与模型组中表达差异无统计学意义(P>0.05),相对于空白组与模型组,温针灸组与西药组中OPG的表达均增高(P<0.01);RANKL于模型组的表达高于空白组、温针灸组和西药组(P均<0.05);温针灸组和西药组OPG/RANKL比例高于空白组与模型组(P均<0.01)。结论温针灸可促进软骨下骨中OPG蛋白表达,抑制RANKL蛋白表达,从而减缓软骨下骨骨重塑,达到治疗KOA的目的。

温针灸与骨髓间充质干细胞移植对兔膝骨性关节炎模型血清中MMP-1、MMP-13和IL-10表达的影响

目的探讨温针灸及骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对膝骨性关节炎(KOA)模型兔功能的影响。方法将50只新西兰兔随机分为空白组(CT组)、模型组(Model组)、温针灸组(WNM组)、骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)、温针灸联合骨髓间充质干细胞组(WNM+BMSCs组)。采用右后肢伸直位固定法制备兔KOA中期软骨退变模型,依据Mankin法予以评估软骨组织损伤程度;用ELISA法检测MMP-1、MMP-13和IL-10的含量表达;采用Western blot检测MMP-1、MMP-13蛋白表达。结果Model组Mankin评分高于CT组(P<0.05);治疗后WNM组、BMSCs组、WNM+BMSCs组Mankin评分均比MX组低(P<0.05),但比CT组升高(P<0.05)。WNM+BMSCs组Mankin评分低于WNM组与BMSCs组,差异有统计学意义(P<0.05);经温针灸与BMSCs移植治疗后,兔KOA模型血清中MMP-1和MMP-13均下降,IL-10水平升高,且WNM+BMSCs组治疗效果优于BMSCs组及WNM组(P<0.05);WNM+BMSCs组MMP-1、MMP-13蛋白水平显著降低。结论温针灸与BMSCs移植可以降低MMP-1和MMP-13水平,升高IL-10水平的表达。

温针灸对兔膝骨性关节炎软骨中Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨温针灸治疗膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞凋亡抑制的相关机制。方法将40只新西兰兔分随机分为4组(空白组、模型组、阿仑膦酸钠组、温针灸组)。采用经典膝关节右后伸直位石膏管型固定制备KOA兔模型。空白组不予造模;模型组不予任何治疗;温针灸组在造模3 d后开始治疗,每日1次,每次15 min,7 d为1个疗程,共治疗4个疗程;阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液,按150μg·(kg·d)^(-1)剂量配比蒸馏水灌胃治疗,同上疗程。干预结束后取兔关节软骨行HE染色观察软骨病理变化,免疫组织化学检测软骨细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl2-Associated X蛋白(Bax)的表达。结果空白组软骨滑膜表面完整、光滑,软骨细胞排列正常;模型组软骨表面粗糙、有裂隙,软骨细胞排列紊乱;阿仑膦酸钠组软骨表面毛糙、有裂隙延伸至软骨下骨,软骨细胞排列不均匀;温针灸组软骨表面平整、无明显缺损,细胞排列局部紊乱。Mankin's评分结果:与空白组比较,模型组评分增高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组及阿仑膦酸钠组评分均降低(P均<0.05)。免疫组织化学结果:与空白组比较,模型组Bcl-2表达降低(P<0.05),Bax表达升高(P<0.05);与模型组相比,温针灸组和阿仑膦酸钠组中Bcl-2表达均升高(P均<0.05),Bax表达均下降(P均<0.05);温针灸组与阿伦磷酸钠组Bcl-2、Bax表达差异无统计学意义(P均>0.05)。结论温针灸治疗兔KOA效果良好,可能与Bcl-2、Bax相关凋亡抑制有关。

大学生情绪变化的影响因素分析与对策——以某高校针灸推拿专业为例

目的分析新生情绪变化，为其尽快适应大学生活提供建议。方法：以某高校针灸推拿学专业100名大一新生为调查对象，采用调查问卷的形式，分析影响大学生情绪的因素。结果：对新生娱乐活动、人际关系、学习三个方面进行分析。发现新生情绪波动大，未能充分适应大学生活。结论：大学生情绪变化对高校学生心理健康教育起至关重要的指导作用。

温针灸对早期膝骨关节炎软骨下骨中OPG/RANKL水平的影响

目的:观察温针灸对早期膝骨关节炎(KOA)模型兔软骨下骨中骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响,探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法:6月龄新西兰雄兔40只,随机分为空白组、模型组、西药组、温针灸组,每组10只。采用管型石膏伸直位固定法建立兔早期KOA模型,经4周实验干预后采用HE染色观察各组软骨及软骨下骨形态结构,免疫组化及Western blot检测各组软骨下骨中OPG、RANKL蛋白的表达,qPCR检测各组软骨下骨中OPG、RANKL mRNA表达。结果:HE染色结果:空白组软骨层表面光滑,软骨细胞排列整齐,软骨及软骨下骨结构完整;模型组软骨层表面粗糙,软骨层明显变薄,骨小梁架构紊乱,软骨细胞排列不均;温针灸组与西药组软骨及软骨下骨病理学表现均有显著改善,软骨细胞较多,分布较为整齐,骨小梁完整。免疫组化与Western blot实验结果:与空白组比较,模型组RANKL蛋白表达显著升高(P<0.01),OPG/RANKL比值显著降低(P<0.01);与模型组比较,温针灸组与西药组OPG蛋白表达显著上调(P<0.01),RANKL蛋白显著降低(P<0.01),OPG/RANKL比值均显著升高(P<0.01)。qPCR实验结果:与空白组比较,模型组RANKL mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,温针灸组与西药组OPG mRNA显著上调(P<0.01),RANKL mRNA显著下调(P<0.01),OPG/RANKL比值显著升高(P<0.01)。结论:温针灸治疗早期KOA可通过促进骨保护因子OPG,抑制破骨细胞活化因子RANKL,上调OPG/RANKL比值水平表达,以调节软骨下骨重塑平衡,阻抑软骨下骨退变,延缓KOA发展。