控释胶质细胞源性神经营养因子对骨髓间质干细胞源性神经元样细胞移植修复猴脊髓轴突的协同作用

目的:采用甘氨酸银浸镀法评价控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间质干细胞源性神经元样细胞联合移植后,其对猕猴脊髓损伤后轴突的修复效果是否优于单纯神经元样细胞移植。方法:实验于2006-03/08在北京市垂杨柳医院病理科完成。①选择2004-01/2005-01中山大学邓宇斌教授课题组研究的猴脊髓石蜡标本12例作为回顾性实验分析对象,其中控释神经营养因子+神经元样细胞联合移植组4例、单纯神经元样细胞移植组4例、磷酸盐缓冲液对照组4例。课题前期实验各组动物均建立急性重度脊髓损伤模型,并于造模后第10天给予对应细胞悬液。②各组每例石蜡标本均制备连续切片3张,片厚0.4μm,对所有切片进行一次性甘氨酸银浸镀法染色。具体步骤:切片脱蜡入水,酸性甲醛液处理10min,蒸馏水清洗后,置于甘氨酸银溶液中,37℃作用5min。取出切片,用滤纸吸干多余银液,入预热45℃的还原液作用1min。用乙醇洗切片10min,再行蒸馏水冲洗,入氯化金水溶液5min,直到棕黄色脱去。滴入苯胺油乙醇液加强染色,冲洗。50g/L硫代硫酸钠液处理30s,冲洗,梯度乙醇脱水,然后在石碳酸二甲苯中浸泡2min,二甲苯透明,中性树胶封固。③应用图像分析系统进行检测,观察各组皮质脊髓束纵切面病理改变,统计每个视野内上行性(后索)与下行性(皮质脊髓束)横切面轴突的数量及横、纵切面面积,取切片两侧各5个非重叠视野,计算平均吸光度值。结果:①各组脊髓损伤处轴突病理改变:控释神经营养因子+神经元样细胞联合移植组皮质脊髓束纵切面部分区域存在较多连续性的轴突;磷酸盐缓冲液对照组脊髓结构破坏严重,轴突大面积消失,纵切面可见崩解的轴突碎片,几乎观察不到连续性轴突;单纯神经元样细胞移植组的变化介于两者之间。②后索与皮质脊髓束的横切面轴突数量、横切面面积、纵切面面积、平均吸光度:控释神经营养因子+神经元样细胞联合移植组、单纯神经元样细胞移植组后索与皮质脊髓束各项检测指标均高于磷酸盐缓冲液对照组,3组间比较差异有显著性意义(F=38.45～487.54,P均<0.01;F=52.66～313.99,P均<0.01)。控释神经营养因子+神经元样细胞联合移植组与单纯神经元样细胞移植组比较,前者对后索轴突的修复作用略优于后者,表现在纵切面面积显著升高(P<0.01);对皮质脊髓束的修复作用明显强于后者,轴突数量、横切面面积、纵切面面积、平均吸光度值差异均有显著性意义(P<0.01或P<0.05)。结论:控释胶质细胞源性神经营养因子可以增强骨髓间质干细胞源性神经元样细胞对猕猴损伤脊髓轴突的修复作用,尤其有利于运动性损伤轴突的修复,其效果优于单纯神经元样细胞移植。

控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植可减少脊髓损伤后空洞形成

背景:前期研究发现控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植可以有效地促进猕猴脊髓损伤后运动功能的恢复。目的:验证控释胶质细胞源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植对猴脊髓损伤后组织结构的保护作用是否优于单纯细胞移植。方法:将急性重度脊髓损伤模型恒河猴分为3组,联合移植组采用控释神经营养因子+神经元样细胞联合移植,单纯细胞移植组给予神经元样细胞移植,对照组给予磷酸盐缓冲液。制备脊髓组织石蜡标本,苏木精-伊红染色后显微镜下观察空洞形成情况,并应用图像分析系统计算空洞面积。结果与结论:对照组脊髓结构严重破坏,空洞面积大、累及范围广;单纯细胞移植组脊髓结构保存较好,有小面积空洞,偶有较大空洞形成;联合移植组脊髓结构保存最好,仅存在小面积空洞。组间两两比较差异有显著意义(P<0.01)。提示与单纯神经元样细胞移植比较,控释胶质细胞源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞移植对脊髓损伤后组织结构的保护作用更佳,可以在更大程度上减少脊髓空洞的形成可能是其作用机制之一。

控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞移植对猴损伤脊髓髓鞘的修复

背景:髓鞘再生障碍是导致脊髓损伤后功能障碍的因素之一。目的:探讨骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞与控释胶质细胞源性神经营养因子联合移植后,对猴损伤脊髓的皮质脊髓束髓鞘的修复效果。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/07在北京市垂杨柳医院病理科完成。材料:选择2004-01/2005-01中山大学邓宇斌教授课题组研究的猴脊髓石蜡标本12例作为回顾性实验分析对象,其中联合移植组4例、细胞移植组4例、模型对照组4例。方法:密度梯度法体外分离培养猴骨髓间充质干细胞,取传至第5～8代细胞诱导为神经元。3组动物均建立急性重度脊髓损伤模型,10d后联合移植组取丹参酮预诱导1.5h的猴骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞3.0×106个/kg,与含2μg胶质细胞源性神经营养因子的单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌共聚体混合,加入200μL磷酸盐缓冲液制成混悬液,分5点注射到脊髓损伤部位;细胞移植组单纯给予含等量丹参酮诱导的骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞的磷酸盐缓冲液,模型对照组给予等量磷酸盐缓冲液。主要观察指标:皮质脊髓束髓鞘苏木精-伊红染色、砂罗铬花青染色结果及髓鞘平均吸光度。结果:砂罗铬花青染色结果示联合移植组对皮质脊髓束髓鞘的修复作用在范围、单位视野密度等方面优于细胞移植组,而苏木精-伊红染色不能区分这种差别;模型对照组皮质脊髓束结构严重破坏,观察不到髓鞘结构。图像分析结果显示,联合移植组、细胞移植组皮质脊髓束髓鞘平均吸光度基本相似(t=1.725,P>0.05)。结论:控释胶质细胞源性神经营养因子可以增强骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞对猴损伤脊髓皮质脊髓束髓鞘的修复效果。

控释GDNF联合MSCs源神经元样细胞移植对猴脊髓损伤后前角运动神经元及bcl-2/bax表达的影响

目的探讨GDNF与MSCs源性神经元样细胞联合移植对猕猴脊髓损伤后前角运动神经元的协同保护作用及机制。方法取12例治疗猕猴脊髓损伤相关的石蜡标本(3组,4例/组),应用光镜统计前角运动神经元数量;应用免疫组化方法及图像分析系统观察bcl-2、bax蛋白表达情况。结果治疗组前角运动神经元数量均明显高于对照组,并且联合移植组数量高于单纯细胞移植组(P<0.01)。联合移植组bcl-2蛋白平均吸光度值高于单纯细胞移植组(P<0.05);Bax蛋白平均吸光度值在两治疗组间表达的差异无统计学意义。结论联合移植组对猕猴脊髓损伤后前角运动神经元的保护作用更佳,可能与GDNF促进前角运动神经元bcl-2蛋白表达增强有关。

控释神经营养因子与细胞移植减少损伤脊髓的胶质瘢痕

背景:前期研究发现控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间充质干细胞源神经元样细胞联合移植可有效促进猕猴脊髓损伤后运动功能和感觉功能的恢复。目的:观察控释胶质细胞源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植抑制猴脊髓损伤后胶质瘢痕形成的作用是否优于单纯细胞移植。方法:取12只恒河猴,采用改良Allen氏法制作急性重度脊髓损伤模型,随机数字表法分为3组,实验组以控释胶质细胞源性神经营养因子联合自体骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植修复,对照组以自体骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植修复,空白对照组以磷酸盐缓冲液修复。修复后5个月,取出脊髓组织制成石蜡标本,应用免疫组织化学染色显示胶质瘢痕的形态特征、构成特点及瘢痕中神经纤维的再生情况,检测胶质瘢痕面积及胶质纤维酸性蛋白染色的平均吸光度值。结果与结论:脊髓损伤部位胶质瘢痕由混合性增生的星形胶质细胞和组织细胞构成。空白对照组脊髓胶质瘢痕累及范围广,星形胶质细胞增生显著,神经丝蛋白免疫组织化学染色阴性,胶质瘢痕面积、胶质纤维酸性蛋白染色平均吸光度值高于实验组与对照组(P<0.05);实验组、对照组脊髓胶质瘢痕累及范围较局限,神经丝蛋白免疫组织化学染色显示有少量神经纤维通过瘢痕区,并且实验组胶质瘢痕面积、胶质纤维酸性蛋白染色平均吸光度值低于对照组(P<0.05)。结果表明,控释胶质细胞源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞移植可更强抑制脊髓损伤后胶质瘢痕的形成。

具有微乳头状结构的乳腺单纯型黏液癌1例

患者女性，39岁，因“发现左乳肿物1个月余”就诊。查体：双乳对称，外观大致正常，左乳内下可触及一1.0 cm ×0.8 cm大小肿物，质韧硬，界欠清，活动度差，左乳内上象限可及片状不均回声区，右乳未及明显异常，双腋下未及明显肿大淋巴结。外院B超示：左侧乳腺内侧腺体结构显示紊乱，呈片状，分布欠均匀。外院双侧乳腺CC＋MLO示：双乳致密腺体型，左乳结节伴钙化，右乳结节，BI-RADS 3级。外院乳腺 MRI 示：左乳乳头内侧节段性明显强化，考虑 BI-RADS-MRI 4级；左乳乳头上方小结节，BI-RADS-MRI 3级；右乳BI-RADS-MRI 2～3级。

滤泡性淋巴瘤伴弥漫性大B细胞淋巴瘤转化合并转移性鳞癌1例

患者男性，75岁，因“喉癌肿物切除术后7年，呼吸困难2个月”入院。纤维喉镜检查示：双侧声带有菜花状肿物。颈部增强CT示：喉部软组织占位，双侧颈部多发肿大淋巴结。临床诊断：喉癌术后复发。临床摘取右侧颈部肿大淋巴结2枚送检。

子宫分割性平滑肌瘤1例

患者，43岁，因停经于2011年12月5日入院检查。外院B超：子宫肌瘤，子宫内可见多个低回声包块，最大位于宫底，115mm×113mm×60mm大小。患者于2011年12月7日入本院就诊。妇科检查时于盆腔处触及一包块，无压痛，双侧附件未触及明显异常。术中见子宫质软，不规则增大如孕20周大小，宫底部肌瘤质软如囊状，子宫下段近宫颈处及右阔韧带处见多个囊性质软结节，大小不等。

成骨不全继发骨肉瘤1例

患者男性，24岁，闲成骨不令致双下肢重度多发弯曲畸形，右股骨陈旧性骨折，双胫骨陈阳性骨折，于2007年11月16日入院治疗。X线检查：患者骨质普遍性疏松，骨小梁，骨皮质薄，

回盲部肠系膜韧带样型纤维瘤病伴阑尾黏液囊肿1例

患者男性,50岁,因＂腹部外伤24 h＂急诊以＂腹部闭合性损伤＂收入院。查体：腹平坦,全腹压痛阳性,伴有明显反跳痛及肌紧张,其中以右下腹压痛为主;右下腹可触及1质硬包块,4 cm×4 cm大小,无压痛。

伴肠上皮化生的宫颈微偏腺癌1例

患者女性,54岁。自诉1年多前阴道分泌物增多,为稀水样分泌物,无异味,未诊疗。近2个月开始阴道淋漓出血。专科检查：外阴已婚经产型,阴道通畅,分泌物稀薄透明,无异味,宫颈肥大,见大量分泌物自宫颈管流出,子宫水平位,饱满、质中,无压痛,双附件未及异常。盆腔MRI增强示子宫颈前壁区类圆形囊实性异常信号,考虑良性占位性病变（宫颈息肉？纳氏囊肿？）可能性大,建议宫腔镜进一步检查。行全子宫及双附件切除术。

控释GDNF对BrdU标记的骨髓MSCs源性前体神经细胞在体内分化的影响

目的评价BrdU标记骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)用于体内示踪的效果,及控释胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)干预对移植细胞分化的影响。方法应用免疫双重标记技术对前期关于治疗猴脊髓损伤实验研究的相关的石蜡标本进行回顾性研究。控释GDNF+细胞移植组4例,单纯细胞移植组织4例,分别进行BrdU-Nestin双重染色、BrdU-NF双重染色、BrdU-GFAP双重染色。结果猴脊髓组织石蜡标本内可以显示BrdU阳性细胞,并且可以同时呈NF或GFAP阳性表达,Nestin呈阴性表达;添加控释GDNF者BrdU阳性细胞数量多(P=0.10),并且NF阳性表达水平高(P<0.05),自体神经元保存数量较多(P<0.05)。结论 BrdU体外标记干细胞进行体内示踪研究是一种有效的方法;控释GD-NF可以增强移植细胞的存活、增强其向神经元分化的能力,并且可以更加有效的保护自体神经元,促进神经功的恢复。

肾透明细胞癌伴同侧肾上腺皮质腺瘤内转移1例及文献复习

目的:探讨1例肾透明细胞癌(clear-cell renal cell carcinoma,clear-cell RCC)伴同侧肾上腺皮质腺瘤内转移的临床病理特征及转移机制。方法:观察1例肾透明细胞癌转移至同侧肾上腺皮质腺瘤的临床表现、组织学特征、免疫组织化学特点,并复习相关文献。结果:患者,男性,63岁,右季肋部不适半月余入院。术后结果显示右肾透明细胞癌。单纯性孤立性肾囊肿。右肾上腺皮质腺瘤,瘤内见转移的肾透明细胞癌、直径约3 mm。结论:肾透明细胞癌转移至同侧肾上腺皮质腺瘤是非常罕见的现象。

FEZ1和survivin蛋白在宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

目的探讨FEZ1和survivin在宫颈上皮内瘤变中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测93例宫颈上皮内瘤变组织及10例正常宫颈组织中FEZ1、survivin的表达情况。结果在正常宫颈组织、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级中,FEZ1的阳性表达率分别为90.0%、67.9%、36.0%、22.5%,survivin分别为10.0%、25.0%、52.0%、57.5%。FEZ1在CIN组中的表达率明显低于正常组(P<0.05),survivin则高于正常组(P<0.05)。二者在CINⅠ级与Ⅱ级、CINⅠ级与Ⅲ级两组间表达差异均有统计学意义(P<0.05),在CINⅡ级与Ⅲ级之间表达差异均无统计学意义(P>0.05)。FEZ1和survivin在宫颈上皮内瘤变中的表达呈负相关,差异有统计学意义(r=-0.553,P<0.001)。结论 FEZ1的异常低表达与survivin的异常高表达参与宫颈上皮内瘤变的发生、发展,二者的联合检测可为宫颈上皮内瘤变的诊断提供新的依据。

P57^(Kip2)及Ki67抗原在水泡状胎块及水肿性流产中的表达特点及意义

目的:探讨P57Kip2及Ki67抗原在水泡状胎块(HM)及水肿性流产(HA)中的表达特点及意义。方法:回顾性搜集HM及HA病例共182例,应用免疫组织化学(免疫组化)染色方法检测P57Kip2及Ki67抗原表达情况,并对病理诊断结果进行重新评估。结果:P57Kip2在完全性水泡状胎块(CHM)中呈阴性表达,ki67高水平表达;P57Kip2在部分性水泡状胎块(PHM)及HA病例中呈阳性表达,Ki67在PHM中以中、高等水平表达,在HA病例中低水平表达;Ki67在PHM与HA病例两两比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:P57Kip2及Ki67蛋白可作为HM诊断与分型的一种有效参考指标。

甲状腺低分化癌伴对侧乳头状癌1例

1病例报告 患者,女,22岁,发现颈部肿物1周入院。专科检查：颈部增粗,甲状腺双侧肿大,可触及包块,左叶5cm×4cm,右叶1cm×1cm,质地韧,无压痛,与周围组织无明显粘连,包块可随吞咽动作上下移动,颈部淋巴结未触及肿大。

FEZ1和p16在宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

目的 探讨FEZ1和p16在宫颈上皮内瘤变（CIN）中的表达及其相关性.方法 应用免疫组织化学方法检测93例CIN组织及10例正常宫颈组织中FEZ1、p16的表达情况.结果 在正常宫颈组织、CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ中,FEZ1的阳性表达率分别为90.0％（9/10）、67.9％（19/28）、36.0％ （9/25）、22.5％（9/40）,p16的阳性表达率分别为10.0％ （1/10）、32.1％（9/28）、76.0％（19/25）、92.5％（37/40）.FEZ1在CIN中的阳性表达率明显低于正常宫颈组织,p16则高于正常宫颈组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）.二者在CIN Ⅰ与CINⅢ间阳性表达率比较差异均有统计学意义（P＜0.01）,在CINⅡ与CINⅢ间阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05）.FEZ1与p16在CIN中的表达呈负相关（r=-0.712,P＜0.01）.结论 FEZ1的异常低表达与p16的异常高表达参与了CIN的发生、发展过程,二者的联合检测可为CIN的诊断提供新的依据.