组织工程心脏瓣膜不同脱细胞方法的比较

背景:目前对几种脱细胞方法的效果各家观点不同。大都认为各种方法均可去除细胞,但实验结果却有较大差异。目的:对比胰蛋白酶法、十二烷基硫酸钠法和去氧胆酸钠法去除细胞后心脏瓣膜形态学及生物力学特征。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-10/2008-07在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和上海交通大学医学院附属新华医院进行。材料:40个新鲜猪主动脉瓣120片瓣叶分为3组,分别为胰蛋白酶组、十二烷基硫酸钠组和去氧胆酸钠组,每组40片。方法:胰蛋白酶消化法:置于0.5g/L胰蛋白酶和0.2g/L乙二胺四乙酸,在37℃,体积分数为0.05CO2培养箱中振荡24h。十二烷基硫酸钠法:置于0.3g/L十二烷基硫酸钠和DNase,RNase中持续振荡24h。去氧胆酸钠法:首先在5g/LTriton-X100,5g/L去氧胆酸钠,0.2g/L乙二胺四乙酸中振荡24h,然后在2.5g/LTriton-X100,2.5g/L去氧胆酸钠和0.2g/L乙二胺四乙酸中破膜去污振荡48h,两阶段均加入DNase,RNase。主要观察指标:3种方法去细胞前后心脏瓣膜的生物力学特性变化。3种方法去除细胞程度和对胶原纤维、弹力纤维的影响。结果:去氧胆酸钠组拉伸率、最大拉伸应力、最大载荷均高于十二烷基硫酸钠组和胰蛋白酶组(P<0.01)。胰蛋白酶法脱细胞效果差,对基质破坏明显;十二烷基硫酸钠法可完全脱细胞,对基质破坏较大;去氧胆酸钠法完全脱细胞同时对基质破坏较少。结论:与胰蛋白酶法、十二烷基硫酸钠法比较,去氧胆酸钠法脱细胞效果好,能更好保护基质。

以内皮细胞基础培养液复合不同方法培养犬脐血间充质干细胞的比较(英文)

背景:内皮细胞基础培养液主要用于培养内皮祖细胞,作者所查用此液培养间充质干细胞的报道较少。目的:对以内皮细胞基础培养液为基础的不同方法培养脐血间充质干细胞的效果比较。设计、时间和单位:对比观察的细胞培养实验,于2005-09/2006-05在上海市新华医院市级重点实验室完成。材料:选取妊娠杂交犬8只,抽取脐血进行干细胞的分离和培养。内皮细胞基础培养液及内皮细胞培养基为美国Clonetics产品。鼠抗CD11a单克隆抗体,鼠抗CD11b单克隆抗体,鼠抗CD29单克隆抗体,鼠抗CD71单克隆抗体均为美国Antibodydiagnostica产品;鼠抗CD34单克隆抗体为美国LabVisionCorporation产品。方法:收集的脐血干细胞分为A,B,C,D4组。A组用内皮细胞基础培养液培养;B组用添加有微血管内皮细胞生长培养液的内皮细胞基础培养液在6孔板上培养。C组用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液在纤维连接蛋白包被的6孔板上培养。D组用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液在25cm2细胞培养瓶中培养。主要观察指标:观察各组细胞形态学变化和群体倍增数。应用免疫组化法检测细胞抗原CD11a、CD11b、CD34、CD29及CD71的表达。结果:各组均有成纤维细胞样细胞培养出。A组细胞形态不良,增殖缓慢;B组细胞增殖旺盛;C组细胞克隆不稳定,容易老化;同时出现另一种细胞克隆。D组细胞培养的结果与C组相似。免疫组化法检测抗原显示CD11a(-),CD11b(-),CD34(-),CD29(+)及CD71(+)。结论:在未经处理的6孔板上,用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液细胞培养液可以培养出生长良好、增殖旺盛的间充质干细胞。应用纤维连接蛋白和25cm2细胞培养瓶培养的效果不佳。

本期专题：人工心脏瓣膜材料——生物瓣②

目前关于组织工程瓣膜支架的研究及材料较多，如纤维蛋白覆盖的聚已酸内酯、聚一4一羟基丁酸酯覆盖的聚乙醇酸、结合壳聚糖的羧基乙酸内酯和交联的透明质酸。由于去除细胞后的瓣膜基质具有近乎理想支架材料应具备的特点：良好的组织相容性、独特的立体多孔网状结构、生物可降解性、良好的细胞界面、可塑性和机械强度等而受到研究者的关注．

局麻胸腔镜术治疗难治性结核性胸膜炎385例分析

目的介绍局麻胸腔镜术治疗难治性结核性胸膜炎的方法和疗效。方法对385例难治性结核性胸膜炎行局麻胸腔镜手术。根据术前治疗情况,分A穿刺组,B引流组,C直接胸腔镜术组。三组行局麻胸腔镜治疗方式相同,对比恢复情况、住院天数、住院费用。结果 385例局麻胸腔镜术均顺利完成,三组的术后主要肺功能指标恢复情况无差异,但C直接胸腔镜术组住院天数、住院费用均明显降低,有显著差异。结论局麻胸腔镜术治疗难治性结核性胸膜炎是安全、有效的方法,可明显降低住院天数和费用。

二尖瓣成形术临床应用112例分析

目的 总结二尖瓣关闭不全心脏病患者施行二尖瓣成形手术的疗效,讨论手术方式的选择、临床适应证及影响手术疗效的主要因素. 方法 回顾性分析1999年1 月～2005年12 月二尖瓣成形术112 例,手术前、中、后应用彩色多普勒超声心动图观察二尖瓣返流的情况.成形方法为:楔形切除37例,腱索缩短17例,腱索转移4例,人工腱索4例,瓣膜修补4例,瓣叶裂隙直接缝合30例,'双孔'技术8例,交界环缩8例;其中瓣环成形加放Carpentier 环57例.以打水试验无明显返流、经食管心脏超声心动图检查二尖瓣返流不超过Ⅱ°作为成形满意的标准. 结果 术后早期死亡3例.存活者术后50 d胸壁彩色心脏超声心动图检查二尖瓣膜无返流和Ⅰ°返流90例,Ⅰ～Ⅱ°返流8例,Ⅱ°返流6 例;左心室舒张与收缩末期内径和二尖瓣口面积与术前比较均有明显统计学意义.79例随访3个月～4年,心功能(NYHA标准) 恢复Ⅰ～Ⅱ级73例,Ⅲ级4例,Ⅳ级2例. 结论 二尖瓣病变的类型关系到成形方式,而心胸比例及左心室扩大指数及手术技术是影响手术疗效的重要因素.慎重选择手术适应证与提高手术技巧是提高临床疗效的关键.

犬脐血干细胞肌源性诱导分化移植对细胞间连接的影响(英文)

背景:脐血间充质干细胞诱导分化为心肌细胞后移植入心肌缺血组织,可以通过与宿主细胞建立联系来修复取代缺血心肌组织。目的:对犬脐血干细胞进行肌源性诱导,观察其植入后与宿主细胞间的连接情况。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-07/2007-10在上海交通大学医学院附属新华医院动物实验中心完成。材料:接近足月的妊娠杂种犬2只,用于分离培养脐血间充质干细胞。成年杂种犬36只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,18只/组。方法:取传至第4代的犬脐血间充质干细胞,加入含lacZ基因的重组腺相关病毒载体进行基因转染,继续培养3d后,行10μmol/L5-氮杂胞苷肌源性诱导,常规培养3周。两组犬均建立心肌梗死模型,造模后细胞移植组经冠状动脉和局部注射将2mL细胞悬液(约107个脐血间充质干细胞)移植到梗死区,模型对照组同法注射等量生理盐水。分别于移植后2,4,8周取材制备心肌组织切片,免疫组化检测细胞间连接情况。主要观察指标:脐血间充质干细胞的基因转染、肌源性诱导分化情况,移植细胞与宿主心肌细胞的细胞间连接情况。结果:转染72h后大部分细胞表达LacZ基因,并合成半乳糖苷酶,X-gal染色呈蓝色。5-aza诱导3周后,脐血干细胞α-Actin(+),Desmin(+),Connexin43(+),而诱导前均呈阴性。移植后第8周,心肌切片中移植细胞和宿主心肌相连处可形成连接,连接处可见cadherin和connexin43绿色荧光阳性表达;模型对照组仅表达cadherin和connexin43,未见带红色荧光的移植细胞。结论:脐血间充质干细胞可在体外诱导为心肌样细胞,移植后能与宿主心肌可能形成有效连接,从而具有通讯联系。

叠氮钠对脱细胞组织工程心脏瓣膜形态学及生物力学的影响

目的对比加叠氮钠和传统的去氧胆酸钠法去除细胞后心脏瓣膜形态学及生物力学差别，为构建理想的组织工程心脏瓣膜提供实验依据。方法应用两种方法处理6～7月龄新鲜猪主动脉心脏瓣膜。光学显微镜、透射电镜观察脱细胞基质改变，厚度仪测量组织厚度，行拉力测试观察两种方法处理后力学变化上的差异。结果两种方法处理后组织厚度差异无统计学意义（P〉0．01）。显微镜检和透射电镜见叠氮钠-去氧胆酸钠法对基质破坏较少，处理后生物力学优于传统去氧胆酸钠法，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论叠氮钠-去氧胆酸钠法能更好保护去除瓣叶组织后的细胞外基质。

骨髓间充质干细胞移植上调热休克蛋白70的表达及改善急性心肌梗死早期心功能

我们将骨髓间充质干细胞（MSCs）直接注射到急性心肌梗死区，观察热休克蛋白70（HSP70）及早期心功能改变，探讨MSCs移植对急性缺血心肌早期作用机制。