华支睾吸虫溶血磷脂酶对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞的作用

目的:观察华支睾吸虫溶血磷脂酶(CslysoPLA)重组蛋白体外对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞的作用。方法:应用免疫荧光方法,观察CslysoPLA重组蛋白是否可与大鼠肝星状细胞和卵圆细胞膜结合;应用MTT方法,测定CslysoPLA重组蛋白对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞的促增殖作用;应用流式细胞术(FCM)检测CslysoPLA重组蛋白对大鼠卵圆细胞细胞周期的影响。结果:CslysoPLA重组蛋白可与大鼠肝星状细胞和卵圆细胞膜结合,MTT方法测定结果表明低浓度重组蛋白对大鼠肝星状细胞和卵圆细胞有一定促增殖作用(P<0.05),20mg/L重组蛋白可促进大鼠卵圆细胞进入G2期,但高浓度重组蛋白可导致大鼠肝星状细胞和卵圆细胞死亡。结论:低浓度的CslysoPLA重组蛋白在体外可刺激大鼠肝星状细胞和卵圆细胞增殖,表明CslysoPLA可能是华支睾吸虫导致胆管上皮增生、腺瘤样病变和肝纤维化的效应分子之一。而高浓度的CslysoPLA重组蛋白可引起肝星状细胞和卵圆细胞死亡,表明CslysoPLA亦可能是华支睾吸虫引起的化学损伤的毒力因子之一。

恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因体外扩增、克隆及序列分析

目的 构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因原核表达质粒pET2 8α -Pf12 ,测定Pf12基因序列 ,并为FCC1/HN株Pf12的体外表达奠定基础。方法 采用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增出Pf12基因 ,扩增产物经纯化后 ,用BamHI +XhoI双酶切 ,定向克隆入pET2 8α质粒 ,转化大肠杆菌DH5α,再用BamHI +XhoI酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定 ,并应用PCGENE软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果 筛选出编码FCC1/HN株Pf12基因的原核表达质粒 pET2 8α -Pf12 ,FCC1/HN株Pf12基因序列与FMG株高度同源 ,Pf12基因序列中可能存在抗原表位。 结论 pET2 8α-Pf12重组质粒的构建 ,为恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因的体外表达奠定基础。

鼠伯氏疟原虫CSP基因真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达

目的分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)环子孢子(CSP)全长基因和去除中央重复序列的CSP的融合蛋白真核表达质粒,并检测其在Hela细胞中的表达。方法采用PCR技术,从伯氏疟原虫基因组中扩增全长CSP基因,将其定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP全长基因重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定;同样,采用PCR技术扩增PbCSP的N端和C端两个片段,先将C端片段定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP-C重组质粒,再将PbCSPN端片段定向克隆入pEGFP/PbCSP-C,构建pEGFP/PbCSP'重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定。将pEGFP/PbCSP和pEGFP/PbCSP′分别用脂质体介导转染体外培养的Hela细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测融合蛋白的表达。结果PCR、酶切及测序证实目的基因PbCSP全长和片段分别正确连接至pEGFP-N1的多克隆位点,两种重组质粒转染Hela后,荧光显微镜及RT-PCR均检测到目的蛋白在Hela中表达。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫CSP全长基因和该基因片段的融合蛋白真核表达质粒,并在Hela细胞中获得表达。

成人医学教育《临床寄生虫学和寄生虫检验》教学改革初探

目的探讨成人教育《临床寄生虫学和寄生虫检验》教学改革,培养实际应用型医学人才。方法对本院成人班《临床寄生虫学和寄生虫检验》教学进行改革,优化教学内容,改革教学方法和教学结果的评价。结果通过征求意见,成人学生普遍反映改革后的教学既重视理论教学,又重视实验技能训练,符合成人教学特点,真正学到了所需知识。结论成人教育《临床寄生虫学和寄生虫检验》教学改革取得了一定效果。

恶性疟原虫FCC1/HN(CQS)株Pfmdr1、Cg1基因T-A克隆及序列分析

目的 将恶性疟原虫FCC1/HN株 (CQS)Pfmdr1和Cg1全基因编码区克隆入测序载体 ,测定其序列 ,为以后研究其与疟原虫耐药性的关系奠定基础。方法 利用PCR扩增技术 ,分 3个片段从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中 ,特异扩增Pfmdr1全基因编码序列 ;分 2个片段特异扩增Cg1全基因编码序列。扩增产物经纯化回收后 ,T -A克隆入测序载体 pMD18-T ,转化大肠杆菌 (E coli)JM 10 9,筛选阳性克隆 ,并进行双酶切及PCR扩增鉴定 ,获得阳性重组质粒 ,用Sanger双脱氧链终止法进行DNA测定。结果 CQSFCC1/HN株Pfmdr1基因序列与CQSFc2 7株同源性高 ,全长 4 2 4 8bp ,编码 14 15个氨基酸 ;测得Cg1基因全长为 2 82 0bp ,编码 939个氨基酸 ,存在串联α重复序列。 结论 恶性疟原虫FCC1/HN(CQS)株Pfmdr1和Cg1全基因编码序列的测定 ,为以后研究耐药性虫株的上述基因以及它们与疟原虫耐药性的关系奠定基础。

疟原虫复合多价疫苗研究进展

疟疾是流行于热带地区最严重的寄生虫病.据WHO最新统计,疟疾分布于世界约100个国家和地区,年发病人数3～5亿,死亡人数150～270万.大多数患者分布于非洲、亚洲、中美以及南美,我国也是疟疾流行区之一.近年来疟原虫、蚊虫耐药现象日益严重,这就更迫切需要尽快开展研制高效的抗疟疫苗[1].由于疟原虫生活史复杂、抗原成份多、抗原变异等原因,单价疫苗免疫效果不理想.复合多价疫苗的问世是疟疾疫苗研制的一条新途径.多价疫苗包含子孢子、裂殖子、配子的有效保护性抗原表位(包括T细胞和B细胞表位),较单价疫苗更好地诱导宿主免疫反应,给有效预防疟疾带来一线曙光.本文对近年来研制的主要复合多价疫苗作一介绍. 1 疟原虫的主要抗原 1.1已经确定的有较强免疫原性的恶性疟原虫主要抗原有:

“三明治”教学与传统教学相结合在病原生物学课程教学中的实践

目的:探讨"三明治"教学法对学生的主动学习能力和教学效果的影响。方法:在2013级临床医学专业病原生物学理论教学中,采用了"三明治"教学法与传统教学法相结合的教学模式。结果:"三明治"教学法有效调动了学生的学习积极性和主动性,提高了学生的自主学习能力,传统教学法则系统地传授了专业理论知识。结论:将两者有效结合,能取得优于传统教学法的教学效果。

恶性疟原虫Pf12基因在大肠杆菌中的表达及其产物的初步鉴定

目的 克隆并表达恶性疟原虫Pf12基因 ,为进一步研究其抗原表位奠定基础。 方法 将恶性疟原虫Pf12基因克隆入高效融合表达载体 pGEX 4T 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,2 8℃、IPTG诱导表达 ,SDS PAGE和Western blot免疫印迹分析表达产物。 结果 成功构建重组质粒 pGEX Pf12 ,经诱导后表达出含外源基因的融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物分子质量约 66ku ,Western blot免疫印迹表明 ,表达的产物能特异地被抗GST多抗 (1∶5 0 0稀释 )识别 ,亦能较特异地与抗疟原虫鼠免疫血清结合。 结论 恶性疟原虫Pf12在原核表达系统 pGEX 4T 1/BL2 1(DE3 )中获得成功表达 ,为下一步表达蛋白纯化 ,以及研究Pf12基因包含的抗原表位提供试验依据。

陕西高速公路某滑坡形成原因及其治理方法探讨

高速公路路线滑坡灾害普遍存在。根据陕西省某高速公路滑坡的工程地质特性、形态、结构特征及变形破坏特征,分析了滑坡形成的机制,指出其属于牵引式滑坡。通过稳定性计算可知,在天然情况下,滑坡坡体处于极限平衡状态。由于滑坡坡区处在地震7度区内,因此滑坡的整治要考虑地震的影响,其抗滑安全系数选取1.10。在分析成因机制和卸载后滑坡体设计推力计算的基础上,提出了削方减载、滑坡体后壁加固、设置截排水沟和坡面整修、绿化等整治措施,为此类滑坡整治对策提出了依据。

弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区在大肠杆菌中的表达

目的:克隆并表达弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区片段,为下一步表达蛋白纯化奠定基础。 方法:将弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区片段克隆入高效融合表达载体pET32α,转化大肠杆菌BL21(DE3), 37℃、IPTG诱导表达,SDS PAGE分析表达产物。结果:成功构建重组质粒pET32α SAG1,经诱导后表达出含 外源基因的融合蛋白,SDS PAGE分析表达产物分子质量约44kDa。结论:弓形虫SAG1成熟蛋白编码区在原 核表达系统pET32α/BL21(DE3)中获得成功表达,为下一步表达蛋白纯化提供试验依据。

华支睾吸虫溶血磷脂酶在虫体组织定位及其特异性抗体类型分析

目的观察华支睾吸虫溶血磷脂酶(CsLysoPLA)在成虫的组织定位,分析其诱导人体产生的特异性抗体类型。方法应用免疫荧光方法,观察CsLysoPLA在成虫的组织定位;应用ELISA方法,CsLysoPLA重组蛋白检测25份华支睾吸虫病人血清的IgG1、IgG2、IgG4、IgE。结果CsLysoPLA定位于虫体的口吸盘、排泄囊、肠支、生殖孔,与虫体分泌/排泄抗原物质密切相关的部位;以CsLysoPLA重组蛋白检测华支睾吸虫感染者血清,IgG1抗体水平较高,IgG2抗体水平稍高,而感染者的IgG4、IgE水平则与健康人无明显差异。结论CsLysoPLA主要经虫体消化道、生殖道、排泄系统分泌/排泄到体外,刺激人体免疫系统产生Th2为主的免疫应答。

恶性疟原虫Pf12基因重组质粒DNA接种诱导小鼠的免疫应答

目的 观察重组质粒VR10 12 -Pf12DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠所产生的免疫应答 ,分析Pf12基因的抗原性和作为疫苗抗原候选分子的可能性。方法 构建重组质粒VR10 12 -Pf12 ,直接免疫BALB/c小鼠 ,通过NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平、ELISA、体外抑虫试验测定 ,观察其诱导的细胞和体液应答以及体外抑虫效果。结果 重组质粒VR10 12 -Pf12免疫BALB/c小鼠 ,NK细胞杀伤活性、脾T淋巴细胞增殖水平明显高于对照组 (P <0 0 1) ,诱导小鼠产生的抗体水平明显增高 (P <0 0 1) ,免疫血清在体外能抑制恶性疟原虫的生长、发育。结论 重组质粒VR10 12 -Pf12DNA直接免疫接种诱导BALB/c小鼠产生一定水平的体液和细胞免疫应答 ,其免疫血清在体外对恶性疟原虫的生长、发育有明显的抑制作用。

恶性疟原虫海南株线粒体复合体Ⅱ辅基铁-硫蛋白基因克隆及序列分析

目的 构建恶性疟原虫海南株线粒体复合体Ⅱ琥珀酸 泛醌还原酶辅基铁 硫蛋白 (iron sulfurprotein ,Ip)基因原核表达质粒pET2 8α Ip ,测定Ip基因序列 ,为研究铁 硫蛋白基因功能奠定基础。方法 采用PCR技术从恶性疟原虫海南株基因组DNA中扩增出Ip基因 ,扩增产物经纯化后 ,用BamHI +XhoI双酶切 ,定向克隆入pET2 8α质粒 ,转化大肠杆菌DH5α ,再用BamHI+XhoI酶切及PCR扩增对重组子进行鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定 ,并进行同源性比较。结果 筛选出编码海南株Ip基因的原核表达质粒pET2 8α Ip ,海南株Ip基因序列与K1、3D7株高度同源。结论 pET2 8α Ip重组质粒的构建 ,为进一步研究铁

GIS技术在地质灾害防治系统中的应用探索

GIS是地理信息系统的简称,随着信息化技术的不断发展与普及,GIS技术的发展速度越来越快。GIS技术在经济建设中有很好的应用前景,已经应用到很多领域当中。我国国土辽阔,地形多样,地质灾害种类多样,地质灾害防治系统建设十分重要。GIS技术在地质灾害防治系统中有很高的利用价值,现行的GIS技术可以收集整理大量信息数据,对地质灾害的预测、预报、灾后重建等工作由重要意义。

恶性疟原虫FCC1/HN株EBA-175基因克隆及序列分析

目的 将恶性疟原虫 FCC1/ HN株 175 ku的红细胞结合抗原 (EBA- 175 )基因克隆入测序载体 ,测定其序列 ,为以后研究其结构与功能奠定基础。 方法 利用 PCR扩增技术 ,分两个片段从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中 ,特异扩增 EBA- 175全基因编码序列。扩增产物经纯化回收后 ,T- A克隆入测序载体 p MD18- T,转化大肠杆菌 (E.coli) DH5 α,筛选阳性克隆 ,并进行双酶切及 PCR扩增鉴定 ,获得含有编码 EBA- 175基因的重组质粒 p MD18- T- EBA。用Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定。 结果 FCC1/ HN株 EBA- 175基因序列与 Camp株基本一致 ,全长 430 8bp,编码 1435个氨基酸 ,含有与 Camp株相似的 C片段。利用计算机软件对其 RII区的 F2亚区以及 4肽进行抗原表位分析 ,结果显示这些区域可能含有抗原表位。 结论 EBA- 175全基因编码序列的测定 。

柴北缘马海古隆起形成机制数值模拟分析

柴北缘马海古隆位于柴北缘西段中部,由于受多期构造运动的影响,构造极为发育,油气勘探难度大。以构造地质学、石油地质学、层序地层学等理论为指导,利用下伏地层的削截和上覆地层层序的超覆、尖灭、地层的缺失等标志来识别古隆起,分析认为马海古隆起的形成是印支运动所引起的古特提斯洋关闭与基底岩性及刚度差异联合作用所致;利用美国Itasca公司开发的基于拉格朗日元法的有限差分程序FLAC3D,建立岩性均匀的莫尔-库仑弹塑性介质模型,从定性的角度模拟验证马海古隆起形成所受的构造应力的方位。

复合多价疟疾疫苗研究进展

疟疾是严重威胁人类健康的寄生虫病,研制安全、高效的疫苗是全球疟疾防治的共同 目标。针对疟原虫生活史复杂、抗原成份多、抗原变异等原因,开发复合多价疟疾疫苗令人注目。 本文对近年来复合多价疟疾疫苗研制情况作一综述。

地震诱发滑坡地质灾害的地貌因子敏感性评价模型

为了解决传统地质灾害危险区预测精准低,计算过程复杂问题,提出一种地震诱发滑坡地质灾害的地貌因子敏感性评价模型,以满足不断增长安全需求。首先,基于贡献率法量化得出不同地形地貌因子对应的面积值,其次,利用确定性系数法更为直观分析地震滑坡发生的关键因子种类,提高后续评价精准度,根据地质因子、外界诱发因子以及人为因子建立评价体系。最后通过几率数值模型、信息量评价模型对敏感性评价,将其分为低敏感性区、中敏感性区、高敏感性区、极高敏感性区。实验证明:评价模型计算简便、精准度高,有着较强的合理性和适用性,可作为地震滑坡相关研究和发展规划的基础科学依据。

中药材粉螨孳生情况的调查

粉螨属小型节肢动物,栖息地多种多样,多孳生于粮食、干果和中药材中,造成这些物品质量下降和变质。据李朝品(1986年)报道,粉螨在中药材中可以大量繁殖,使中药材质量下降,药效降低以致破坏。本次对127种中药材,1270份样品中的粉螨孳生情况进行了调查。

煤与有机岩石学在煤矿安全中的应用研究

煤岩学目前广泛应用于多个领域,主要包括:煤化工、煤田地质、选煤工业和石油地质等。对国内外应用煤岩学的研究成果进行了调研,将煤岩学在煤矿安全中的应用概括为4个方面:煤自燃、煤与瓦斯突出、岩石力学和职业健康安全。对每一应用方面,综述了对应的煤岩学研究成果。最后,展望了煤岩学在煤矿安全领域的发展方向:①建立全国煤炭资源煤岩特征数据库,利用大数据技术分析安全问题;②煤岩学与地质学、采矿学等多学科交叉,研究岩石力学、煤与瓦斯突出和煤自燃等煤矿安全问题。