移植用微囊化细胞低温保存的研究

目的:探索移植用微囊化细胞低温保存的可行性。方法:以海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊(APA微胶囊)为研究体系,以转内皮抑素重组中国仓鼠卵巢细胞(rCHO)为模型细胞,观察低温保存过程中降温方式、预平衡方式、冷冻保护剂浓度等关键条件对微囊化细胞复苏活性的影响,以及低温保存后微囊膜对IgG的通透性及微囊内细胞的存活、增殖及产物分泌情况。结果:包埋功能细胞的APA微囊经一定时间的低温保存后,微囊膜仍可屏蔽IgG,并未改变其原有的免疫隔离特性,且囊内细胞具有较高的细胞活性,能够正常生存并保持增殖和产物分泌能力。结论:微囊化细胞进行低温保存是可行的。

谷氨酰胺对微囊化重组CHO细胞生长代谢及内皮抑素表达的影响

微囊化技术是一种有发展潜力的生物技术,在细胞移植和药物控释等方面具有广泛的应用。然而由于目前微囊化细胞规模化培养技术还不成熟,阻碍了其在临床治疗中的推广与应用。为了了解微囊化重组CHO细胞的生长代谢特性为今后规模化培养优化提供技术参考,考察了主要氮源物质谷氨酰胺对微囊化重组CHO细胞生长代谢及内皮抑素表达的影响。结果显示:当谷氨酰胺起始浓度从2.69mmolL增加到9.05mmolL时最大活细胞密度并没有增高,细胞增殖没有显著差异。当谷氨酰胺起始浓度较低(2.69mmolL)时,葡萄糖的比消耗速率较大;当谷氨酰胺起始浓度增高时(7.91mmolL～9.05mmolL)葡萄糖和谷氨酰胺的比消耗速率增大,但细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的利用率降低。谷氨酰胺对产物表达有显著影响,起始浓度为4.97mmolL时的内皮抑素累积浓度最高,达546.36ngmL,过低和过高谷氨酰胺起始浓度下内皮抑素的累积浓度均较低。