芥子咳喘贴早期安全性评价实验研究

目的:评价芥子咳喘贴早期安全性,为新药临床试验提供可靠依据。方法:以日本大耳白兔和Hartley豚鼠为研究对象,采用皮肤用药急性毒性试验观察空白对照组、芥子咳喘贴常规剂量组、芥子咳喘贴高剂量组日本大耳白兔用药后的一般状况及血生化等;单次及多次给药完整皮肤刺激试验观察日本大耳白兔皮肤有无红斑、水肿,以及上述变化恢复情况和时间;通过过敏试验观察Hartley豚鼠皮肤过敏情况。结果:芥子咳喘贴常规剂量组、芥子咳喘贴高剂量组对日本大耳白兔一般状况无显著影响,其死亡率为0%,肉眼观察皮肤、脊神经及各脏器未见显著异常改变;与空白对照组比较,芥子咳喘贴高剂量组肝脏、肾脏质量及脏器系数显著降低(P<0.05),芥子咳喘贴常规剂量组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);各组日本大耳白兔血脂、肝功、肾功比较差异无统计学意义(P>0.05);芥子咳喘贴单次给药后,各观察时间点日本大耳白兔给药部位皮肤刺激评分均为0分,多次给药改后,其刺激强度平均分值1.5分,为轻度刺激;未引起Hartley豚鼠皮肤出现红斑、水肿等过敏反应。结论:芥子咳喘贴经急性毒性试验、单次及多次给药完整皮肤刺激试验、皮肤过敏试验均未出现毒性反应,具备无毒、低刺激、无致敏性特点,经皮肤给药安全。

黄连解毒汤“异病同治”类风湿关节炎和急性痛风性关节炎的机制探讨

目的 观察黄连解毒汤对胶原抗体诱导性关节炎(collagen antibody induced arthritis,CAIA)和急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)模型小鼠病理改变及免疫损伤的影响,探讨黄连解毒汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和AGA这2种疾病“异病同治”的机制。方法 采用5种克隆抗体合剂诱导Balb/c小鼠,建立CAIA小鼠模型,给药组予黄连解毒汤水煎液(5 g/kg)和单次腹腔注射甲氨蝶呤(2 mg/kg)干预;C57BL/6J小鼠右踝关节腔注射单尿酸钠(monosodium urate, MSU)晶体混悬液(50 mg/mL)建立AGA小鼠模型,给药组予黄连解毒汤水煎液(5 g/kg)和秋水仙碱(0.83 mg/kg)干预;观察CAIA和AGA小鼠关节肿胀症状;HE染色检测2种模型小鼠关节组织病理变化和实时荧光定量PCR检测关节组织炎症因子的表达。结果 CAIA和AGA模型小鼠关节明显肿胀(P<0.001);CAIA模型小鼠病理可见踝关节大量炎性细胞浸润,关节腔内滑膜增生,血管翳形成,血管翳侵蚀关节软骨;AGA模型小鼠可见右踝关节腔大量炎性细胞,以中性粒细胞和巨噬细胞为主;CAIA和AGA小鼠关节组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子MCP-1、IL-8 m RNA表达升高(P<0.01,P<0.001)。黄连解毒汤干预后,分别与CAIA和AGA模型组比较,小鼠关节肿胀症状明显减轻(P<0.05);关节组织病理损伤情况明显减轻;关节组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子MCP-1、IL-8 m RNA表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论 5种克隆抗体合剂诱导的CAIA和MSU晶体注射诱导的AGA这2种关节炎模型小鼠关节组织均出现炎性免疫和病理损伤,黄连解毒汤异病同治,可减轻急性期RA和AGA 2种疾病的炎性免疫和病理损伤,抑制疾病进一步发展。

黄连解毒汤对高脂饮食apoE^(-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应影响的研究

目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。普食组与高脂组分别给予普食和高脂饮食4周。ApoE-/-高脂加中药组同时给予黄连解毒汤5 g/(kg·d)灌胃,其他小鼠采用等量纯净水灌胃。4周后,检测血脂水平、外周血单核细胞比例及其表面Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和清道夫受体CD36的表达;检测主动脉病理变化和主动脉血管局部细胞因子表达水平;进一步采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激检测血浆细胞因子的水平。结果 (1)与野生普食组比较,apoE-/-普食组TC、TG和LDL-C水平显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组TC和LDL-C水平显著增高(P<0.05);apoE-/-高脂组与apoE-/-高脂加中药组血脂各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与野生普食组比较,apoE-/-普食组外周血单核细胞比例无明显变化,TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠外周血单核细胞比例及TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组外周血单核细胞比例及其表面TLR4表达显著降低,清道夫受体CD36表达水平亦显著降低(P<0.05)。(3)LPS刺激3 h后,与野生普食组比较,apoE-/-普食组血浆TNF-α和IL-10表达显著增加(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠血浆IL-12、TNF-α、MCP-1和IL-10表达增加,但差异无统计学意义(P>0.05);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组MCP-1表达显著下调,而IL-10水平进一步显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)与野生普食组比较,apoE-/-普食组主动脉血管壁炎症因子IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1βmRNA水平显著升高,抑炎因子IL-10亦显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组主动脉血管壁不仅IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1β水平进一步显著升高,且抑炎因子IL-12、IL-10和TGF-β亦显著升高(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组主动脉血管壁炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-1β和IL-12显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论高脂饮食引发apoE-/-小鼠全身性炎症反应和血管局部炎症反应,血管局部炎症反应程度超过全身性炎症反应。黄连解毒汤干预后能够减轻炎症反应,并且对血管局部的作用更为显著,同时增强全身抗炎反应。

黄连解毒汤对高脂血症小鼠肝脏保护作用的观察

目的观察黄连解毒汤对高脂饮食导致的载脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)基因敲除(ApoE-/-)小鼠肝脏损伤的保护作用。方法野生型小鼠分为野生普食组、野生高脂组,ApoE-/-小鼠分为ApoE-/-普食组、ApoE-/-高脂组、ApoE-/-高脂加中药组,每组5只,分别给予普食和高脂饮食4周。ApoE-/-高脂加中药组同时给予黄连解毒汤5g/(kg·d)灌胃。检测小鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,HE染色观察肝脏病理组织变化,流式细胞仪检测肝脏巨噬细胞及其亚型比例和巨噬细胞表面受体CD206、CD36表达水平。结果 ApoE-/-高脂组小鼠肝脏组织呈典型单纯性脂肪肝病理变化,TC、TG、LDL-C升高,巨噬细胞比例增多,巨噬细胞表面受体CD206表达水平降低,与ApoE-/-普食组比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);CD206+替代活化型(alternatively activated macrophages,M2型)巨噬细胞比例较野生普食组显著减少(P<0.05);CD36表达水平无明显变化。黄连解毒汤干预4周后,血脂无明显改善,但肝脏CD206+M2型巨噬细胞比例较ApoE-/-高脂组显著提高(P<0.05),肝脏脂肪肝病理变化显著减轻。结论黄连解毒汤的肝脏保护功能可能与M2型巨噬细胞免疫调节、修复损伤组织有关,其免疫调节作用和肝脏保护作用独立于降脂作用。

祛痰化瘀解毒方药对高脂血症痰瘀互阻证患者单核细胞亚群异常的影响

目的研究高脂血症痰瘀互阻证患者外周血单核细胞亚群比例及其表面受体TLR4、CD163和CD36表达变化,初步探讨和评价祛痰化瘀解毒方药干预的治疗效果。方法采用流式细胞仪将单核细胞分为CD14highCD16-(Mo1)、CD14highCD16+(Mo2a)和CD14lowCD16+(Mo2b)3个亚群。检测83例高脂血症痰瘀互阻证患者和42名同龄健康对照者外周血单核细胞亚群比例及其表面TLR4、CD163和CD36的表达水平。对其中11例接受祛痰化瘀治疗(对照组)和10例在祛痰化瘀基础上加用解毒治疗(治疗组)的患者,比较治疗前后外周血单核细胞亚群比例及其表面TLR4、CD163和CD36的表达变化。结果患者外周血单核细胞Mo2a亚群比例较正常对照显著升高(5.35±2.57vs3.09±2.38,P<0.01)。Mo1亚群TLR4受体的表达较健康组降低(50.73±24.45vs69.92±21.06,P<0.01),其余亚群差异无统计学意义。经过4周治疗,治疗组患者Mo2a亚群细胞比例明显地降低(疗后/疗前3.73±1.05vs5.50±2.06,P=0.043;对照组疗后/疗前4.20±1.81vs5.65±1.89,P=0.097)。两干预组对TLR4、CD36、CD163的表达影响差异无统计学意义。结论高脂血症痰瘀互阻证患者外周血单核细胞Mo2a亚群比例及Mo1表面受体TLR4的表达具有特征性改变,可能与高脂血症导致的免疫损伤有关;祛痰化瘀解毒方药能较好地改善Mo2a亚群比例失调。

反义c-myc寡脱氧核苷酸对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

为研究硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃＯＤＮ、正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ进入体外培养的大鼠主动脉ＳＭＣ内，观察其对ＳＭＣ细胞ｃｍｙｃ表达、增殖、迁移和凋亡的影响。结果：①反义ＯＤＮ降低ｃｍｙｃ蛋白的表达。②反义ｃｍｙｃＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖、迁移，并诱导ＳＭＣ凋亡。而正义ＯＤＮ及错配ＯＤＮ则无上述作用。结果提示：应用反义技术抑制ｃｍｙｃ表达在防治经皮腔内冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）术后再狭窄中具有潜在作用。

缺氧诱导因子在动脉粥样硬化中的调节作用

缺血性心脑血管疾病导致心脑组织缺氧,对心脏和脑组织造成进一步的损伤。对于缺氧这一病理生理刺激,机体通过适应性的变化调节机制维持自身的稳定。缺氧激活的缺氧诱导因子通过调节一系列靶基因如血管内皮生长因子、肾上腺髓质素、一氧化氮合成酶2和血红素加氧酶1等,进一步来调节血管舒张和新生血管生成、红细胞生成和抗炎症反应,从而改善心脑组织缺氧和损伤。近年来,通过构建载体提高缺氧诱导因子表达水平,进一步调控缺氧诱导因子靶基因表达,从而改善缺血组织中血液供应,在动脉粥样硬化及其所致的缺血性心脑血管疾病基因治疗的实验和临床中取得很大进展。

宫颈鳞状上皮癌蜡块中 HPV16 感染检测方法的比较研究

分别用原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）和原位多聚酶链反应（ＩＳ－ＰＣＲ）方法，检测３９例宫颈鳞状上皮癌石蜡切片中ＨＰＶ的感染。ＩＳＨ的检出率为４６．２％（１７／３９），明显低于ＩＳ－ＰＣＲ的６６．７％（２６／３９，Ｐ＜０．０１）和ＰＣＲ的８４．６％（３３／３９，Ｐ＜０．０１）。用常规ＩＳＨ和地高辛标记探针能检出宫颈鳞状上皮癌ＨＰＶ１６感染的表皮细胞，而用ＩＳ－ＰＣＲ方法在同样标本中可显示出更多的ＨＰＶ１６阳性表皮细胞，并且着色更深。ＰＣＲ方法敏感性最高，但它不能用于组织细胞内的ＨＰＶ１６ＤＮＡ精确定位。

反义c－myc寡脱氧核苷酸抑制血管平滑肌细胞的增殖、迁移和诱导其凋亡作用的研究

反义ｃ－ｍｙｃ寡脱氧核苷酸抑制血管平滑肌细胞的增殖、迁移和诱导其凋亡作用的研究首都医科大学电镜室马雅銮，王家宁，高天祥经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄发生中，平滑肌细胞的增殖、迁移及凋亡起很重要的作用。ｃ－ｍｙｃ是各种有丝分裂原刺激后的早期反应基因。转...

血脂异常及动脉粥样硬化不同痰瘀证候血浆蛋白差异表达谱的研究

目的通过研究血脂异常及动脉粥样硬化不同痰瘀证候(包括痰证、血瘀证、痰瘀互阻证)血浆蛋白质的表达差异,寻找不同痰瘀证候的特异性标志蛋白群。方法收集146例北京地区汉族血脂异常及动脉粥样硬化中医痰证、血瘀证、痰瘀互阻证和非痰非瘀类证候患者及37名健康对照的血浆样品,采用二维凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)方法进行电泳和图像扫描及差异度分析,找出不同痰瘀证候的差异蛋白质表达谱;从凝胶上切取相应差异蛋白质斑点,酶切后于Q-TOF-MS仪上进行二级质谱分析,进一步采用Fisher判别法对差异蛋白进行典型性分析,筛选出能够显著区分不同痰瘀证候可能的标志蛋白群。结果在组间匹配变异度超过100%的11个斑点中除2个斑点未确定外,发现有7种不同的蛋白质。经对这9种不同的蛋白质进行典型性分析后发现:能区分血脂异常及动脉粥样硬化患者与正常人群间的血浆标志蛋白群可能是结合珠蛋白前体和纤维蛋白原γ链;能区分血脂异常及动脉粥样硬化患者痰瘀类证候与非痰瘀类证候的血浆标志蛋白群可能是纤维蛋白原β链和载脂蛋白AI前体;能区分痰证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群是纤维蛋白原γ链、白蛋白和载脂蛋白AI前体;能区分痰证与瘀证可能的标志蛋白群是结合珠蛋白前体、肾上腺髓质素结合蛋白前体、白蛋白和补体C4;能区分瘀证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群是白蛋白和肾上腺髓质素结合蛋白前体。结果还发现上述可能的标志蛋白的表达差异可随痰瘀证候间不同的传变方式而有不同的变化规律。结论采用蛋白质组学方法获得了可显著区分血脂异常及动脉粥样硬化不同痰瘀证候及痰瘀类证候与非痰瘀类证候间可能的标志蛋白群的特异性组合,及在功能蛋白质水平上有关痰瘀证候的传变主要是由痰致瘀进而形成痰瘀互结的初步证据。

高脂血症和动脉粥样硬化不同痰瘀证候患者血浆蛋白质差异表达谱与脏腑功能的关系

目的:探讨高脂血症及动脉粥样硬化不同痰瘀证候患者血浆特异性蛋白质群与脏腑功能之间的相关性。方法:采用中医证候诊断,观察146例高脂血症及动脉粥样硬化不同痰瘀证候病人的脏腑功能状况。获取病人的血浆样品进行二维凝胶电泳,对差异表达蛋白进行二级质谱分析,寻找可区别不同痰瘀证候的特异性标志蛋白群。采用图模型分析方法研究不同痰瘀证候可能的标志蛋白与脏腑功能之间的相关性。结果:区分高脂血症及动脉粥样硬化病人中医痰证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群中纤维蛋白原γ链、白蛋白及载脂蛋白AI前体主要与心气虚、肾气虚及脾气虚有关;区分痰证与血瘀证可能的4种标志蛋白质中,白蛋白和肾上腺髓质素结合蛋白前体与心气虚、肾气虚均有关,结合珠蛋白前体只与肾气虚有关,并通过肾上腺髓质素结合蛋白前体与心气虚相关,补体C4与之均无关;区分血瘀证与痰瘀互阻证可能的标志蛋白群中白蛋白与心气虚、肾气虚及脾气虚均有关,而肾上腺髓质素结合蛋白前体只与脾气虚相关;区分非痰非瘀类与痰瘀类证候可能的标志蛋白纤维蛋白原β链主要与肾气虚有关,载脂蛋白AI前体主要与肾气虚及心气虚有关。结论:高脂血症及动脉粥样硬化不同痰瘀证候可能的血浆标志蛋白与不同的脏腑功能之间存在不同的关联组合。

冠心病痰瘀互结证与炎症生物学指标相关性探讨

痰瘀互结证是冠心病的主要证候类型。在冠心病发生、发展的全过程中都伴随着炎症反应。既往研究表明,以下13个炎症相关指标与冠心病痰瘀互结证存在一定相关性。分别是:C反应蛋白、同型半胱氨酸、细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-18、MMPS、MCP-1、M-CSF)、免疫细胞膜分子(CD4\CD4L、PS\PSL、ICAM-1)和脂蛋白(Apo A-Ⅰ、α1-AT)。其中已被公认为冠心病独立危险因素的C反应蛋白、同型半胱氨酸研究证据最多。另外,冠心病患者血中大部分炎症因子水平随着非痰瘀证→痰证/瘀证→痰瘀互结证依次升高,提示痰瘀互结证患者较其他证候炎症程度增高。这些指标有助于痰瘀互结证的客观评估。

冠心病痰瘀互结证脂质与脂蛋白研究评析

冠心病痰瘀互结证与脂质和脂蛋白紊乱密切相关。其中血脂中胆固醇和甘油三酯含量的升高,各种脂蛋白的异常包括脂蛋白浓度异常、脂蛋白中的胆固醇含量异常以及载脂蛋白异常等都与冠心病痰瘀互结证的发生发展密切相关。在已往的研究中,主要关注了单一的脂质或脂蛋白与冠心病痰瘀互结证的关系,脂质和脂蛋白成分复杂,未来脂质和脂蛋白的整体性研究可能更符合中医证候的特点。

中医方剂治疗脓毒症的研究进展

脓毒症是一种由感染引起的全身性炎症反应综合征,其高发病率和致死率威胁人类的健康和生存,加重了医疗卫生资源的负担。中医在诊治脓毒症方面积累了丰富的经验,并据脓毒症的临床三大主要证型采用相应的治则治法,即热证治以清热解毒、通腑泻热,瘀证治以活血逐瘀和虚证治以扶正祛邪,这些治疗通过改善和提高机体免疫功能,减轻患者临床症状,提高临床疗效和降低患者的死亡率,取得了较好的成果,故将中医方剂治疗脓毒症进行归纳阐述,以期为临床提供新的治疗思路。

黄连解毒汤调控肠道菌群抗apoE^(-/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病和动脉粥样硬化的研究

目的:观察黄连解毒汤对高脂饮食导致的apoE基因敲除(apoE^(-/-))小鼠血脂水平、肠道菌群、单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)活力及其脂肪肝和血管动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块形成的影响。方法:8周龄雌性apoE^(-/-)小鼠给予高脂饮食,治疗组同时给予黄连解毒汤或阿托伐他汀干预,4周后常规检测血脂水平,检测血浆和肝脏的MAO活力;取小鼠结肠内容物,16S rRNA相对应的DNA序列(16S rDNA)检测肠道菌群,干预18周后病理检测主动脉血管动脉粥样硬化(AS)斑块和脂肪肝形成情况。结果:高脂饮食导致apoE^(-/-)小鼠血浆总胆固醇(cholesterol,TC)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平升高(P<0.001),差异有统计学意义;血浆和肝脏检测MAO活性增高(P<0.05),差异有统计学意义;结肠菌群α多样性增加,变形菌门增加,拟杆菌门减少。黄连解毒汤干预4周,血脂水平无明显改变,血浆和肝脏MAO活力降低(P<0.05),差异有统计学意义;结肠菌群α多样性降低,厚壁菌门和变形菌门减少,拟杆菌门和疣微球菌门增加;干预18周高脂导致apoE^(-/-)小鼠肝脏脂肪肝病变和主动脉血管AS斑块形成,黄连解毒汤明显干预改善脂肪肝和主动脉血管AS斑块病变程度。结论:黄连解毒汤可能通过调节肠道菌群失衡,降低MAO活性,从而抑制高脂饮食导致apoE^(-/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcholic fatty liver disease,NAFLD)和AS斑块的形成。

瘦素缺陷型ob/ob小鼠和C57BL/6J小鼠生物学特性的对比研究

目的对比瘦素基因遗传缺陷ob/ob小鼠与C57BL/6J野生型小鼠的生物学特征,为进一步的中药研究提供可靠的脂肪肝动物模型。方法将8周龄、雌性C57BL/6J野生型及ob/ob小鼠分别作为对照组和模型组,标准饲料喂养至16周。每周测量1次体质量和体温;检测血清肝功能(天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶)和血脂(总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)含量;检测肝质量、肝组织中总胆固醇、甘油三酯含量,并进行肝组织HE染色。结果与C57BL/6J野生型小鼠比较,ob/ob小鼠体质量显著增加(P<0.000 1);肛温明显降低(P<0.001);血脂总胆固醇、高密度脂蛋白、肝重、肝脏指数、肝功能、肝组织中总胆固醇、甘油三酯含量明显增高(P均<0.01)。大体及组织病理结果显示,16周ob/ob小鼠肝脏表现为中、重度脂肪肝的病理特征。结论 ob/ob小鼠是较好的非酒精性脂肪性肝病动物模型,具有发病快、稳定、显著、重复性高等特点。

单味中药治疗脓毒症的研究进展

脓毒症是机体对感染的反应失调损伤了自身组织,表现为炎症反应过度或免疫功能抑制,导致机体受到伤害,从而出现的一种威胁生命的状况,因此改善脓毒症免疫紊乱成为治疗脓毒症的新方向。中医在诊治脓毒症方面积累了丰富的经验,中药的免疫调节作用已受到广泛的关注。近年来中医药治疗脓毒症取得了较好成果,发现中药大黄、连翘、黄连、人参、冬虫夏草等能有效改善脓毒症症状,降低脓毒症死亡,提高临床疗效,改善病人的预后,具有一定的临床参考价值,故将疗效显著的单味药物及其有效成分进行阐述,为临床治疗提供借鉴。

益气活血法对缺氧损伤血管内皮细胞保护作用的研究

目的:观察以黄芪注射液和盐酸川芎嗪注射液联合用药为代表的益气活血法对缺氧损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法:建立人脐静脉内皮细胞缺氧损伤模型,实验设对照组、模型组、黄芪组、川芎嗪组及联合用药组。采用MTT检测法、Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术凋亡检测法和ELISA检测法,观察药物对HUVEC增殖、凋亡和功能(分泌NO和ET)的影响。结果:与模型组比较,黄芪组和川芎嗪组及联合用药组均可不同程度地减轻缺氧对HUVEC的损伤,提高其生存率,降低其凋亡率,促进NO的分泌,抑制ET的分泌,两药联用比单用效果好。结论:益气活血法可通过促进增殖、抗凋亡及改善细胞分泌功能,有效减轻缺氧后血管内皮细胞的损伤。

祛痰、化瘀和祛痰化瘀方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞增殖及凋亡功能的影响

目的:观察祛痰、化瘀和祛痰化瘀方对ox-LDL损伤HUVEC增殖及凋亡功能的影响。方法:建立HUVEC ox-LDL损伤模型,采用MTT检测法、Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术和Western blot检测法,观察方药对HUVEC增殖率、凋亡率及与增殖、凋亡相关蛋白VEGFR、P66、P53、Bcl-2、BAX表达的影响。结果:在细胞增殖方面,祛痰化瘀方能增加HUVEC吸光度,祛痰方、祛痰化瘀方可上调HUVEC VEGFR的表达水平,ox-LDL作用下4种方剂均可增加HUVEC吸光度并上调VEGFR表达水平。在细胞凋亡方面,祛痰方、化瘀方和祛痰化瘀方均能降低P66的表达水平;ox-LDL作用下,HUVEC Bcl-2表达降低,BAX、P66表达升高;祛痰化瘀方等4种方剂对早期、晚期及总凋亡率都有极大改善,且均可降低BAX的表达水平;祛痰方组、化瘀方组和祛痰化瘀方可降低P66的表达水平,祛痰化瘀方可提高Bcl-2的表达水平,Ox-LDL及4种方剂均对P53的表达水平无明显影响。结论:祛痰、化瘀和祛痰化瘀方及基础方均可在不同程度上通过促进增殖、抗凋亡达到对抗HUVEC氧化损伤的作用,其中祛痰化瘀方的效果最显著。