沉默RRM1可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性

目的阐明沉默核苷酸还原酶M1亚基(RRM1)对乳腺癌耐药细胞MCF-7/R逆转耐药的作用。方法通过高浓度紫杉醇诱导耐药株MCF-7/R;运用Kaplan-Meier Plotter绘制RRM1基因的生存曲线;通过siRNA沉默MCF-7/R细胞中RRM1基因表达,并用Western blot和qRT-PCR方法检测蛋白和基因水平的表达,筛选出高效特异的si-RRM1序列;将该si-RRM1序列转染MCF-7/R细胞,筛选得到能稳定抑制RRM1基因表达的细胞株MCF-7/R/siRNA;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测RRM1沉默后MCF-7/R细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,并观察周期、凋亡相关蛋白的变化;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默RRM1后给予紫杉醇治疗对裸鼠体内抑瘤效果的影响。结果生存曲线分析显示RRM1基因表达与乳腺癌患者的生存率呈负相关(P=0.000);MCF-7/R细胞中证实RRM1蛋白和mRNA表达水平较MCF-7细胞均显著升高(P<0.01);si-RRM1序列筛选中,转染si-RRM1-04组细胞的RRM1蛋白和mRNA表达量降低最为显著(P<0.001);沉默RRM1后,MCF-7/R细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,细胞晚期凋亡比例明显升高(P<0.001),同时降低Akt蛋白的磷酸化并抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进p53蛋白表达水平的增加(P<0.001);裸鼠实验显示,与si-NC组相比,沉默RRM1后给予紫杉醇治疗可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长(P<0.001)。结论沉默RRM1可通过诱导细胞凋亡增加提高MCF-7/R细胞化疗敏感性,逆转乳腺癌紫杉醇化疗耐药。

基于网络药理学构建中药复方改善加速性动脉粥样硬化的作用研究

目的将网络药理学和传统中医理论结合构建出改善慢性肾衰竭加速性动脉粥样硬化的新型中药复方——益肾降脂方,并探讨其治疗效果。方法从中药网络药理学数据库TCMSP中获取中药、成分和靶点等相关信息,使用Cytoscape软件从中筛选出可以作用于慢性肾衰竭加速性动脉粥样硬化相关靶点的中药,然后根据中医辨证理论和组方原则进一步筛选并构建复方。最后通过动物实验观察益肾降脂方对动脉粥样硬化的作用,检测血脂、组织形态学及血清生化指标水平的变化。结果确认益肾降脂方组成成分为杜仲、淫羊藿、丹参、沙棘和甘草,动物实验结果表明益肾降脂方能降低血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和单核趋化蛋白-1(MCP-1)的水平,提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的水平,并且可以显著减少动脉粥样硬化斑块的形成,部分恢复肾功能,对肝功能指标没有影响。结论运用网络药理学和传统中医理论构建的益肾降脂方具有改善慢性肾衰竭加速性动脉粥样硬化的作用。

西藏胡黄连醇提物对动脉粥样硬化小鼠主动脉PPARγ和PON1表达的影响

目的观察西藏胡黄连醇提物(ethanol extraction of Picrorhiza scrophulariiflora,EPS)对apoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的干预机制。方法将30只apoE^(-/-)小鼠随机分为对照组,模型组,EPS低、中、高剂量组和辛伐他汀组,每组5只。分别给予相应药物灌胃,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,连续灌胃12周。超声和病理切片观察各组主动脉中的斑块形成情况,试剂盒检测血清生化指标,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应检测PPARγ和PON1的表达。结果与模型组比较,EPS和辛伐他汀组可以显著减少动脉粥样硬化斑块的形成,降低血清TC,LDL-C,TNF-α,IL-6,MCP-1,MDA水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001),显著升高GSH-Px,SOD活性(P<0.01,P<0.001),增加主动脉中PPARγ和PON1的表达显(P<0.001)。结论西藏胡黄连具有改善动脉粥样硬化的功能,其机制可能与上调动脉壁中PPARγ和PON1的表达有关。