大冶铁矿深凹露天开采最终边坡稳定性分析

针对大冶铁矿东露天最终边坡的工程地质条件,结合实际的开挖步骤与顺序,采用极限平衡理论和有限差分数值模拟两种方法,从分析开挖卸荷引起的边坡岩体应力、位移和塑性区变化规律入手,对最终边坡的整体稳定性进行计算分析.结果表明,边坡安全系数大于1.25,基本处于稳定状态.三个计算剖面上,由开挖引起的应力、位移和塑性区的分布和变化规律基本一致.回填体不仅提高了边坡的稳定性,还为转入地下开采提供了所需的安全覆盖层厚度.

结核分枝杆菌对氨基水杨酸耐药的分子机制及研究进展

结核病由结核分枝杆菌感染引起,是我国面临的重大传染病,严重危害人民健康。而近年来日益增长的耐药结核病疫情使我国结核病防控工作面临严峻挑战。对氨基水杨酸(PAS)是治疗耐多药结核病的重要药物,其机制是抑制结核分枝杆菌叶酸的合成。随着其广泛运用,目前部分临床菌株已形成对PAS的耐药性。结核分枝杆菌叶酸代谢通路相关基因fol C、thy A和rib D突变导致对PAS耐药的分子机制已较为明确。此外,近期有研究揭示了一些新的PAS潜在作用靶标及耐药位点。本文综述了PAS作用机制及结核分枝杆菌对PAS耐药机制的研究进展,旨在为研究新的PAS耐药机制提供参考。

结核分枝杆菌Rv3084编码酯酶LipR的生物学特性和体内免疫调节功能

目的探究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Rv3084编码的酯酶LipR的生物学特性及其在体内的免疫调节功能。方法从MTB H37Rv标准毒力株扩增LipR基因,构建重组表达质粒;测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌,诱导LipR蛋白表达并纯化,Western blot鉴定;进行LipR酯酶活性检测,分析影响LipR酶活性的因素;将重组质粒于小鼠胫前肌肉注射0.1 mL(含质粒DNA 100μg)3次(第1,8,15天),末次注射后7 d,处死小鼠,取肺、脾脏进行细胞因子检测。结果成功构建重组表达质粒,并发现LipR蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达,蛋白相对分子质量约为33×10~3;在标准水解活性实验条件(40℃,pH7.5)下,其最适水解底物为4-硝基苯基乙酸酯(pNPA,C2);以4-硝基苯基丁酸酯(pNPB,C4)作为底物,测得LipR水解活性的最适pH值为8.5,最适反应温度为40℃,说明LipR是一种相对耐碱耐热的酯酶;而在不同的除垢剂或金属离子存在的环境下,LipR水解pNPB的活性受到一定程度地抑制。重组质粒注射小鼠后,发现LipR能抑制γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-2的分泌,但IL-10分泌量增加。结论酯酶LipR可能参与帮助MTB协同抵抗宿主内苛刻的环境,并充当免疫调节剂,抑制促炎细胞因子分泌。

优化分枝杆菌重组工程系统构建分枝杆菌突变株筛选方法

目的通过为分枝杆菌重组工程系统(pJV53)加筛选标记,建立一种分枝杆菌突变株的筛选方法。方法为pJV53加入蔗糖反筛选基因SacB和突变的潮霉素抗性基因hygS,通过潮霉素抗性恢复指示耻垢分枝杆菌(Ms)体内同源重组的成功,为突变株的筛选提供标记;通过蔗糖反筛选挑选脱去质粒的突变株。结果成功构建重组质粒pJV53-SacB-hygS,筛选出MSMEG4487 G188A突变株以及利福平耐药的Ms rpoB D516Y和Ms rpoB H526Q突变株,并成功将以上突变株脱去质粒。结论 pJV53-SacB-hygS能够有效帮助构建筛选突变株,并对突变株进行脱质粒操作,具有普遍应用价值;结核分枝杆菌rpoB基因D516Y和H526Q的突变与该菌对利福平的耐药有关。

结核分枝杆菌低氧反应蛋白HRP1(Rv2626c)的分泌致病机制初探

目的验证结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)基因Rv2626c编码的低氧反应蛋白1(hypoxic response protein 1, HRP1)为分泌蛋白。方法从Mtb H37Rv标准毒力株基因组上扩增目的基因并添加His标签;运用扩增产物构建重组质粒,电转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, Ms)(MC2 155)构建重组菌;热诱导重组菌表达蛋白,检测培养滤液及细菌裂解液中蛋白的表达情况,将10 kDa培养滤液抗原(CFP-10)(Ms)和CFP-10(Mtb)设为阳性对照,将胞质蛋白热休克蛋白65(GroEL2)(Mtb)作为阴性对照。结果 PCR成功扩增HRP1、GroEL2(Mtb)、CFP-10(Mtb)、CFP-10(Ms),并且重组质粒测序峰单一且信号稳定,鉴定重组质粒构建成功。成功构建重组Ms并实现蛋白GroEL2(Mtb)、CFP-10(Mtb)、CFP-10(Ms)、HRP1在Ms中的表达。在重组菌裂解液中和培养基滤液中均检测到目标蛋白HRP1;结果与阳性对照CFP-10一致;阴性对照GroEL2(Mtb)仅在细菌裂解液中检测到,在培养滤液在未检测到。结论 Mtb基因Rv2626c编码的蛋白HRP1可以通过Ms的分泌系统分泌到细菌外,作为Mtb分泌蛋白,在Mtb致病机制中发挥作用。