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外源丙氨酸提高蜘蛛牵引丝蛋白天然基因在原核系统中的表达 被引量:5
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作者 马鹤雯 张立树 +2 位作者 郑伟 张永亮 张玉静 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期47-51,共5页
蜘蛛丝蛋白天然基因的体外表达受诸多因素的限制。在获得生长于中国的Nephilaclavipes蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2cDNA(No.AF441245)的基础上,利用限制性内切酶双酶切反应构建含有Spidroin2cDNA的重组表达质粒pET-28b(+)-Sp。将该质粒转化... 蜘蛛丝蛋白天然基因的体外表达受诸多因素的限制。在获得生长于中国的Nephilaclavipes蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2cDNA(No.AF441245)的基础上,利用限制性内切酶双酶切反应构建含有Spidroin2cDNA的重组表达质粒pET-28b(+)-Sp。将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞感受态菌中,以不同浓度的IPTG进行诱导,并通过诱导时间、培养温度、加入外源丙氨酸等途径提高Spidroin2cDNA的表达量,同时利用多克隆抗体对表达产物进行Westernblot检测。重组质粒pET-28b(+)-Sp的测序结果表明Spidroin2cDNA基因以正确的阅读框插入到原核表达载体中;SDS-PAGE结果表明菌体表达蛋白中存在着大小约为31kDa的目的蛋白带(加入外源丙氨酸条件下),Westernblot检测结果进一步证实,目的基因在大肠杆菌中得到正确表达。实验证明,蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2cDNA可在原核细胞内正确表达,外源丙氨酸的加入对于提高天然蜘蛛丝蛋白基因在原核系统的表达作用明显。 展开更多
关键词 蜘蛛 牵引丝蛋白 天然基因 原核表达
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人喉癌细胞端粒酶催化亚基cDNA片段的扩增与克隆 被引量:2
2
作者 马鹤雯 张玉静 +3 位作者 阮承迈 陈守义 张立树 马永红 《白求恩医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期331-333,共3页
目的 :测定人喉鳞状上皮癌 hep- 2细胞的端粒酶活性水平并获得 hep- 2细胞中 h TERT c DNA片段的克隆。方法 :采用 TRAP- ELISA法测定酶活性水平 ,RT- PCR技术扩增获得目的片段。利用酶切法、PCR法和序列分析法对所获克隆进行检测。结果... 目的 :测定人喉鳞状上皮癌 hep- 2细胞的端粒酶活性水平并获得 hep- 2细胞中 h TERT c DNA片段的克隆。方法 :采用 TRAP- ELISA法测定酶活性水平 ,RT- PCR技术扩增获得目的片段。利用酶切法、PCR法和序列分析法对所获克隆进行检测。结果 :hep- 2细胞具有较高的端粒酶活性水平 ,获得含h TERT c DNA片段的克隆。结论 :利用 RT- PCR法能够从具有较高端粒酶活性水平的 hep- 2细胞中扩增获得 h TERT c 展开更多
关键词 端粒酶 端粒酶催化亚基 反义聚合酶链式反应 喉癌 鳞状上皮癌 cDNA 基因扩增 克隆
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端粒(酶)同癌症与衰老关系的研究进展 被引量:3
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作者 马鹤雯 张玉静 +2 位作者 阮承迈 陈守义 张立树 《国外医学(遗传学分册)》 2000年第3期163-165,共3页
端粒是真核生物染色体的天然末端,具有稳定染色体结构,避免遗传信息在复制过程中丢失的作用。端粒酶是端粒复制所必须的一种特殊的DNA聚合酶,在大多数的正常人体细胞中没有活性。在近年来的研究中,人们发现“衰老者的端粒缩短”... 端粒是真核生物染色体的天然末端,具有稳定染色体结构,避免遗传信息在复制过程中丢失的作用。端粒酶是端粒复制所必须的一种特殊的DNA聚合酶,在大多数的正常人体细胞中没有活性。在近年来的研究中,人们发现“衰老者的端粒缩短”,而且在约85%的肿瘤细胞中检测到了端粒酶活性。这些事实提示人们:端粒、端粒酶同癌症与衰老之间存在相关性。 展开更多
关键词 端粒 端粒酶 衰老 癌症 研究进展
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实时荧光定量PCR技术及其应用 被引量:156
4
作者 欧阳松应 杨冬 +1 位作者 欧阳红生 马鹤雯 《生命的化学》 CAS CSCD 2004年第1期74-76,共3页
实时荧光定量PCR技术是一种多色荧光检测核酸定量技术 ,该文简要介绍实时荧光定量PCR技术的原理及其应用。
关键词 实时荧光定量PCR 基因 荧光探针 SYBR Green
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盐胁迫下短芒大麦cDNA文库的构建 被引量:6
5
作者 陆一鸣 李彦舫 +3 位作者 白杰英 曹明富 马鹤雯 阮承迈 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期499-502,共4页
为了克隆与研究盐胁迫相关的基因,以盐胁迫后的短芒大麦叶片为材料,用Trizol一步法提取总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第一链cDNA和第二链cDNA.cDNA纯化后,与λZAP表达载体连接,体外包装后得到盐胁迫下短芒大麦cDNA文库,... 为了克隆与研究盐胁迫相关的基因,以盐胁迫后的短芒大麦叶片为材料,用Trizol一步法提取总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第一链cDNA和第二链cDNA.cDNA纯化后,与λZAP表达载体连接,体外包装后得到盐胁迫下短芒大麦cDNA文库,其重组率达96%,滴度为2×107 pfu/mL,插入片段长度0.5~3.0 kb. 展开更多
关键词 盐胁迫 短芒大麦 CDNA文库 Trizol一步法 提取 纯化
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地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶的纯化及性质 被引量:11
6
作者 赵荧 刘红岩 +4 位作者 宫正宇 冯启 阎宝山 马鹤雯 梁安杰 《吉林大学自然科学学报》 CAS CSCD 1997年第3期85-88,共4页
地衣芽孢杆菌A.4041(Bacillus,licheniformisA.4041)耐高温α-淀粉酶,经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化,得到三种电泳均一的组分,α-Ⅰ,α-Ⅱ和α-Ⅲ.其相对质量分数分别为14.7%,32.2%和52.9%;等电点为5.2,5.4和... 地衣芽孢杆菌A.4041(Bacillus,licheniformisA.4041)耐高温α-淀粉酶,经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化,得到三种电泳均一的组分,α-Ⅰ,α-Ⅱ和α-Ⅲ.其相对质量分数分别为14.7%,32.2%和52.9%;等电点为5.2,5.4和5.5;相对分子质量为48000,55000和60000.酶作用于可溶性淀粉的米氏常数分别为4.5mg/mL,3.4mg/mL和2.6mg/mL.最适作用温度皆为90℃;最适pH为6.0~6.5;稳定pH范围皆为4~11.5在温度高于70℃,保温30min条件下,三组分的活力开始下降,但α-Ⅱ和α-Ⅲ在100℃,保温30min时仍分别保持15%和20%的残余活力,表明该酶的热稳定性良好.Ca2+,Mg2+,K+对酶明显激活;Cu2+,Fe3+,Zn2+,Al3+,EDTA、甲醛、戊二醛对酶强烈抑制. 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 淀粉酶 提纯 耐高温性 发酵
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xylazine+DHE对大鼠的麻醉作用及其对β-内啡肽含量的影响 被引量:5
7
作者 张立树 闫章年 +5 位作者 李东郊 田慧英 马鹤雯 刘全 杨永胜 冯海华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期393-396,共4页
采用恒温水浴摆尾法测定二甲苯胺噻嗪 ( xylazine) +双氢埃托啡 ( DHE)对大鼠的镇痛作用 ,放射免疫分析法测定不同时间大鼠血液、垂体和下丘脑中 β-内啡肽 ( β-EP)的含量 ,并初步探讨了行为学改变与 β-EP含量变化间的关系。结果表明 ... 采用恒温水浴摆尾法测定二甲苯胺噻嗪 ( xylazine) +双氢埃托啡 ( DHE)对大鼠的镇痛作用 ,放射免疫分析法测定不同时间大鼠血液、垂体和下丘脑中 β-内啡肽 ( β-EP)的含量 ,并初步探讨了行为学改变与 β-EP含量变化间的关系。结果表明 ,xylazine+DHE使大鼠在 1 5min时的翻正反射消失阳性率为 93 .3 %,并增加了大鼠的痛阈值及血液β-EP的含量 ,而对垂体和下丘脑β-EP含量的影响则为双相作用 :前时相表现为降低 ,后时相表现为升高 ;统计学分析表明 ,这些作用均较阳性和阴性对照组差异显著。本研究提示 ,xylazine+DHE是一个良好的复合麻醉剂 ;下丘脑释放的 β-EP可能参与了 xylazine+DHE的中枢镇痛作用 ;血液 β-EP主要来自于垂体 ,可能参与了大鼠对 xylazine+DHE作用的适应性反应 。 展开更多
关键词 二甲苯胺噻嗪 双氢埃托啡 Β-内啡肽 麻醉作用
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蜘蛛牵引丝蛋白cDNA的扩增、克隆与序列分析 被引量:4
8
作者 张立树 马鹤雯 +1 位作者 陆一鸣 张玉静 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期641-643,共3页
Spider dragline silk is synthesized in special gland named major ampulate (MA) gland. The MA glands were dissected from the abdomen of the spiders Nephila clavata and the total RNA was extracted by the TRIZOL. The cDN... Spider dragline silk is synthesized in special gland named major ampulate (MA) gland. The MA glands were dissected from the abdomen of the spiders Nephila clavata and the total RNA was extracted by the TRIZOL. The cDNA of dragline silk was amplificated by RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction), multiplex PCR and cloned. PCR identification, restriction analysis and DNA sequence analysis were carried out to verify the recombinant plasmids. The codon usage frequencies of the cloned cDNA were added up, and the predicted amino acid sequence was compared with Spidroin2 of Nephila clavipes. Predicted secondary structure of the predicted amino-acid sequence was analysized by DNAStar software. All results showed that the cloned cDNA we got (GenBank Accession No. AF441245) was the very fragment of spider dragline silk Spidroin2 cDNA. 展开更多
关键词 蜘蛛牵引丝蛋白 CDNA 扩增 克隆 序列分析 蜘蛛丝
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xylazine对大鼠血液和垂体β-内啡肽、亮啡呔和强啡呔A含量的影响 被引量:2
9
作者 张立树 闫章年 +3 位作者 马鹤雯 刘全 吴永魁 张祚新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期113-114,共2页
关键词 二甲苯胺噻嗪 Β-内啡肽 亮啡呔 强啡呔A 麻醉药 实验研究 大鼠
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端粒酶活性在哺乳动物细胞中的表达 被引量:1
10
作者 阮承迈 陈守义 +4 位作者 吴东林 李鹏 马鹤雯 马永红 张玉静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期66-68,共3页
为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染... 为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染和 TRAP- EL ISA定量方法测定转染细胞。结果显示 ,在人肝癌细胞株中仅 h TERT表达即可使端粒酶活性显著增加 ,而 DK细胞中 h TERT必须和 h TR同时转染才有端粒酶活性表达。这一结果表明 ,端粒酶活性表达主要和 h TERT/ h TR有关 ,采用人的端粒酶 h TERT/ h TR在其他哺乳动物细胞中表达端粒酶活性是可行的。 展开更多
关键词 端粒酶活性 哺乳动物细胞 表达 激活 DK细胞 人肝癌细胞
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利用生物化学教学培养学生创造性思维能力 被引量:2
11
作者 赵凤云 张永亮 +2 位作者 丁鸿浩 马鹤雯 张玉静 《高等农业教育》 2001年第8期58-60,共3页
通过深入挖掘生化教学内容中创造性思维中的发散型和定向思维内容 ,并引导学生运用发散型思维方式创造性地学习 ,收到了良好的效果。
关键词 创新性思维能力 生化教学 教学内容 教学过程
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大鼠β微管蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗体制备
12
作者 尹云厚 欧阳松应 +3 位作者 柳巨雄 欧阳红生 马鹤雯 胡仲明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期336-337,共2页
在获得重组质粒 p MD- 18T- BTU B的基础上 ,成功地构建了重组表达质粒 p ET- 2 8a- BTU B,并将其转化入大肠杆菌 BL 2 1(DE3)感受态细胞中 ,经 IPTG诱导表达 ,该诱导菌经 SDS上样缓冲液进行处理后 ,SDS- PAGE电泳检测到相对分子质量约... 在获得重组质粒 p MD- 18T- BTU B的基础上 ,成功地构建了重组表达质粒 p ET- 2 8a- BTU B,并将其转化入大肠杆菌 BL 2 1(DE3)感受态细胞中 ,经 IPTG诱导表达 ,该诱导菌经 SDS上样缓冲液进行处理后 ,SDS- PAGE电泳检测到相对分子质量约为 14 4 0 0的目的蛋白带 ,薄层扫描分析表明目的蛋白占总蛋白的 4 1.8%。目的蛋白经透析袋电洗脱法纯化后 ,采用常规方法制备家兔多克隆抗体 ,EL ISA检测表明此蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 大鼠 β微管蛋白 大肠杆菌 原核表达 多克隆抗体 制备 ELISA 抗原性 蛋白质重组 微管
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应用mTR^(-/-)鼠模型系统研究肿瘤发生机制的进展
13
作者 李鹏 吴东林 +2 位作者 马鹤雯 杨焕民 张玉静 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期219-222,共4页
端粒酶是真核细胞体内的一种核糖核酸蛋白质复合体 ,是一种特殊的DNA聚合酶 ,具有延伸DNA末端的功能 ,能够维持端粒长度和功能 ,TERT具有反转录酶活性。在大多数体细胞和原代细胞中 ,端粒酶活性很低 ,通常检测不到 ,但在肿瘤细胞中 ,端... 端粒酶是真核细胞体内的一种核糖核酸蛋白质复合体 ,是一种特殊的DNA聚合酶 ,具有延伸DNA末端的功能 ,能够维持端粒长度和功能 ,TERT具有反转录酶活性。在大多数体细胞和原代细胞中 ,端粒酶活性很低 ,通常检测不到 ,但在肿瘤细胞中 ,端粒酶则被广泛激活 ,因此认为端粒酶与肿瘤的发生具有密切的关系 ,本文介绍了应用端粒酶阴性鼠研究端粒酶与G链悬垂和P5 展开更多
关键词 mTR^-/^-鼠 肿瘤发生 P53 G链悬垂 动物模型 机制
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从DNA双螺旋模型的建立看创造性思维模式
14
作者 赵凤云 张永亮 +1 位作者 马鹤雯 张玉静 《高等农业教育》 2001年第7期42-44,共3页
本文通过考察 DNA双螺旋建立过程 ,揭示创造过程中所采用的思维方法 ,从中可以看出在创造性思维的全过程中 ,发散性思维占有非常重要的地位 ,创造过程往往首先用发散型思维 ,然后才是定向思维 ,两者是互相配合 。
关键词 DNA双螺旋模型 发散型思维 创造性思维模式 定向思维
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分子时钟
15
作者 马鹤雯 张立树 《国外医学(遗传学分册)》 1999年第3期164-166,共3页
研究推测:生物活动的节律是由细胞内的分子控时机制调节控制的。目前,已分别在果蝇及小鼠等动物体内发现了与节律调控相关的per基因及clock基因等。而且,这些基因蛋白产物中的高保守区(PAS区)也被初步认为是生物钟调控... 研究推测:生物活动的节律是由细胞内的分子控时机制调节控制的。目前,已分别在果蝇及小鼠等动物体内发现了与节律调控相关的per基因及clock基因等。而且,这些基因蛋白产物中的高保守区(PAS区)也被初步认为是生物钟调控过程中的主要蛋白组份。 展开更多
关键词 分子时钟 生物活动 节律 Per基因 CLOCK基因
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肾癌组织中端粒酶活性的测定与分析
16
作者 马永红 陈守义 +2 位作者 阮承迈 张玉静 马鹤雯 《生物技术》 CAS CSCD 2000年第2期41-43,共3页
关键词 肾癌组织 端粒酶 酶活性 定量检测 TRAP-ELISA
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人工设计的HIV-1重组鸡痘病毒诱导恒河猴产生免疫应答的研究
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作者 张立树 金宁一 +8 位作者 宋英 洪宝庆 马鹤雯 尚玉璞 王宏 孙岩松 金洪涛 战大伟 李昌 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1198-1203,共6页
将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),ELISA法检测血清HIV-1抗体... 将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性。结果表明:HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒可刺激恒河猴产生HIV-1特异性抗体;免疫猴的PBMC在HIV-1抗原肽刺激下细胞增殖能力加强,针对HIV-1靶细胞的特异性CTL杀伤活性产生,分泌Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2的水平升高。研究提示,HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒能诱导恒河猴产生特异性细胞和体液免疫应答。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒I型 人工设计 重组鸡痘病毒 恒河猴 免疫应答
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鸡马立克氏病肿瘤组织细胞端粒长度的测定
18
作者 陈守义 阮承迈 +5 位作者 张玉静 马永红 马鹤雯 吴东林 谌旭红 吴明福 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期225-227,共3页
用马立克氏病病毒 ( MDV)京 -1株血毒对 SPF鸡攻毒 ,7周后扑杀 ,采取各内脏组织 ,一部分组织做病理切片 ,发现有肿瘤细胞浸润者即判定为阳性 ;另一部分组织用于端粒长度测定。以 DIG标记的探针( TTAGGG) 4,通过 Southern Blot方法测定... 用马立克氏病病毒 ( MDV)京 -1株血毒对 SPF鸡攻毒 ,7周后扑杀 ,采取各内脏组织 ,一部分组织做病理切片 ,发现有肿瘤细胞浸润者即判定为阳性 ;另一部分组织用于端粒长度测定。以 DIG标记的探针( TTAGGG) 4,通过 Southern Blot方法测定细胞端粒长度 ,结果表明 ,阳性肾脏、肝脏、脾脏、神经。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病 肿瘤细胞 端粒长度 端粒酶活性
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鸡马立克氏病肿瘤组织端粒酶活性的测定 被引量:1
19
作者 陈守义 阮承迈 +3 位作者 马永红 马鹤雯 张玉静 李军涛 《中国兽医科技》 CSCD 1999年第12期13-15,共3页
用鸡马立克氏病病毒( MDV) 京1 株血毒对2 日龄SPF 鸡攻毒,40 d 后剖杀取部分内脏组织,一部分做病理切片,发现有肿瘤细胞浸润者判定为阳性;另一部分组织利用TRAP ( Telom eric repeat am plification protocol) 法进行端粒酶活性测定... 用鸡马立克氏病病毒( MDV) 京1 株血毒对2 日龄SPF 鸡攻毒,40 d 后剖杀取部分内脏组织,一部分做病理切片,发现有肿瘤细胞浸润者判定为阳性;另一部分组织利用TRAP ( Telom eric repeat am plification protocol) 法进行端粒酶活性测定。结果发现有肿瘤细胞浸润的肾、肝、脾、神经、卵巢、精巢等组织细胞端粒酶活性非常高,且其阳性率与肿瘤细胞浸润的阳性率吻合。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病 肿瘤 端粒酶
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吸入一氧化氮的毒理学
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作者 张立树 闫章年 +2 位作者 马鹤雯 吴永魁 张祚新 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第z1期73-73,共1页
  一氧化氮(NO)是一个肺扩张剂,它能够提高新生儿持续性肺动脉高血压(PPHN)的临床疗效,并可有效地治疗一些早产新生儿的急性呼吸抑制综合症或肺性疾病.NO在多种生理过程中具有重要的调节作用,但其毒性不容忽视.   ……
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