蛋白酶体抑制剂对神经细胞nicastrin表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术、免疫荧光双标技术,检测蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT的蛋白表达变化。结果:Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性转染的NCT的表达显著增强,高度特异的蛋白酶体抑制剂lacta-cystin对NCT蛋白的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;放射性同位素脉冲示踪结果显示,蛋白酶体抑制剂可显著增强细胞内新合成的NCT蛋白的表达水平,其增强作用是通过阻止[35S]-NCT的蛋白降解来实现的;免疫荧光双标结果提示,NCT与泛素在细胞内共存。结论:神经细胞内NCT的降解由蛋白酶体途径介导;NCT在降解之前经泛素化修饰。

严重烧伤后脑水肿的发病机制

严重烧伤可引起多器官的损害，而严重烧伤后脑水肿作为烧伤主要心脏并发症之一，病因复杂，伤情严重，发展越快，后果越严重。尤其小儿，因其特殊的解剖生理特点，严重烧伤后较成人更易发生脑水肿。严重烧伤后脑水肿在临床上往往被其它并发症所掩盖，缺乏特异的症状和体征，了解其发生发展及其机制的研究正同益被人们所重视。脑水肿分为血管源性脑水肿和细胞毒件脑水肿。现研究已证实，严重烧伤后脑水肿兼有瓶管源性和细胞毒性脑水肿两种，前者因血管本身通透性的改变，或伤后补液过多引起细胞内外间隙扩大，细胞外稀释性低钠血症而发生：后者多为烧伤释放毒性物质吸入或烧伤后产生的“毒素”进入血流，引起毛细血管通透性增加而形成，如一氧化氮(NO)及谷氨酸的产生过多等，同时脑内ATP生成减少，钠泵功能障碍致细胞源性脑水肿。大量的研究资料表明，严重烧伤后脑水肿的发生主要与氧自由基、一氧化氮(NO)的毒作用，钙超载，兴奋性氨基酸(EAA)的毒性损害，血脑屏障(BBB)通透性改变，水通道蛋白等因素有关。

AQP9在组织中的分布和功能

AQP9是一种选择性水通透膜转运蛋白 ,属于主体内在蛋白家族的成员之一。AQP9不但对水具有通透性 ,而且对其它一些中性溶质也具有通透性。现已发现 ,AQP9分布在多种器官组织中。在脑组织 ,AQP9主要分布在星形胶质细胞 ,参与水的代谢和渗透压调节 ,还可能与脑的某些水代谢疾病有关。在肝脏 ,AQP9的分布有明显的性别差异 ,其功能可能与尿素清除有关。在睾丸 ,分布在生精小管和Leyding细胞 ,与液体的重吸收及雄性激素产生功能有关。研究AQP9的分子结构 ,生化特性 。

生物医学工程专业人体解剖学教学方法初探

为了适应医学教育新形式的要求,培养符合社会需要的高素质人才,针对医学生物工程专业的特点,在人体解剖学教学中尝试了多项改革.反馈信息显示,此举改变了学生对解剖学的厌烦心理,学生的学习主动性、动手能力和综合素质等方面都有了极大的提高.

浅谈美容专业人体解剖学教学

美容医学是一门以人体形式美理论为指导,采取手术与非手术的医学手段,来直接维护、修复和再塑人体美,以增加人的生命活力美感和提高生命质量为目的的新兴医学交叉学科.它是社会经济发展到一定程度的反映,是广大人民群众日益增长的物质文化生活需要.人体解剖学是美容医学的重要基础学科之一.为了培养适应社会和经济发展需要的美容医学人才,更好地发挥人体解剖学教学在人才培养中的重要作用,针对美容医学的特点,我们在教学实践中做了一些尝试,现就此谈一些粗浅的看法.

大麻素HU-210对APP/PS转基因小鼠学习记忆及脑内老年斑的影响

目的:研究大麻素HU-210对APP/PS转基因小鼠空间学习记忆能力和脑组织中老年斑表达变化的影响。方法:3.5月龄APP/PS转基因小鼠随机分为HU-210处理组和生理盐水对照组,每组10只,用大麻素HU-210[100μg/(kg·次)]和等量生理盐水分别腹腔注射1个月。应用Morris水迷宫和恐惧实验检测各组小鼠学习记忆能力的变化;采用免疫组化染色以观察小鼠脑内老年斑的变化。结果:水迷宫实验显示,与对照组相比,HU-210处理组小鼠找到平台的潜伏期及搜索路程显著缩短;HU-210处理组小鼠穿越平台次数(5.40±1.52)明显高于对照组小鼠(1.60±1.14,P<0.01);恐惧实验显示,电击后HU-210处理组小鼠出现Freeze次数(电击后即刻:38.30±15.16;电击后24 h:99.89±5.71)明显高于生理盐水对照组(电击后即刻:17.84±5.33;电击后24 h:56.00±4.78,P<0.01)。免疫组化显示,与对照组(3.90±2.51)相比,HU-210处理组小鼠脑内老年斑数量(9.70±5.67)明显减少(P<0.05)。结论:在老年斑形成初期使用大麻素可明显减少痴呆模型小鼠脑内老年斑的形成,从而改善痴呆模型小鼠的认知功能。

严重烧伤后血浆AVP水平与脑含水量的相关性研究

目的:探讨大鼠在严重烧伤后血浆精氨酸加压素(AVP)水平的动态变化及其与脑含水量(BWC)变化的关系。方法:用放射免疫分析法(RIA)检测严重烧伤后血浆AVP含量,干湿重法测定脑组织含水量的变化。所得数据分别经统计学处理。结果:严重烧伤后各时相点AVP水平和脑含水量不同程度的升高,在烧伤后6h达高峰,二者呈显著正相关(r =0 .8790 ,P <0 .0 1)。结论:血浆AVP水平可反映严重烧伤后脑水肿严重程度。

水通道蛋白4和内向整流性钾通道4．1在星形细胞瘤组织中的共定位及表达差异

目的:观察水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)与内向整流性钾通道4.1(inward rectifying potassium channel 4.1,Kir4.1)在人不同病理级别星形细胞瘤组织中的共定位现象及其二者的表达差异,探讨星形细胞瘤增殖、生长的病理机制。方法:共收集人不同病理级别星形细胞瘤标本50例。采用石蜡切片HE、激光共聚焦和Western blot分析,以肿瘤周围相对正常脑组织作为对照,观察AQP4与Kir4.1的共定位及其蛋白表达差异。结果:AQP4和Kir4.1在人不同病理级别星形细胞瘤组织中并没有完全共定位;与正常脑组织相比,人星形细胞瘤组织Kir4.1表达上调,并随着星形细胞瘤病理级别的升高表达增强。而AQP4在低级别肿瘤组织中却表达减弱,在高级别肿瘤组织中表达又逐渐增强。结论:AQP4和Kir4.1在各级别肿瘤组织中没有完全共定位,二者的蛋白含量与肿瘤病瘤级别相关,并表现出不同的变化规律,提示二者在肿瘤组织水与离子平衡的维持中可能具有不同的作用。

医学留学生解剖学教学模式的改革与实践

解剖学是基础医学主干课程之一，医学中有2／3的医学术语来自解剖学，是学习其他基础学科和临床学科的基础[1]。我室承担留学生系统解剖学与局部解剖学的全英文教学10年，初步创建了留学生全英文教学模式和教育质量保障体系。本文就留学生解剖学教学方面的经验及体会报告如下。

小鼠嗅黏膜中水通道蛋白1对嗅觉形成的作用

目的研究水通道蛋白1(aquaporin1,AQP1)在小鼠嗅黏膜中的表达模式及其对嗅觉形成的作用。方法应用免疫荧光和免疫印迹技术研究野生型和AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中AQP1的表达差异;采用埋藏食物小球实验(含对照实验)、嗅觉迷宫实验(含对照实验)2种嗅觉行为学方法以及气体刺激性嗅觉电位记录(electroolfactogram,EOG)检测2组小鼠嗅觉功能的差异。结果免疫荧光和免疫印迹结果均证实了AQP1基因敲除小鼠嗅黏膜中没有AQP1的表达;免疫荧光结果表明AQP1主要分布于嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上。行为学检测结果显示,埋藏食物小球实验中第1、2天2组寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05),而第3天和对照实验之间无明显差异(P>0.05);嗅觉迷宫实验中2组除对照实验外,寻找食物时间差异具有统计学意义(P<0.05)。气体刺激性诱发电位结果显示,2组小鼠嗅黏膜在不同气压强度饱和Trithylamine作用下的嗅觉电位波形相似,波幅均随气压的逐渐增加而增大;而在相同气压作用下,AQP1基因敲除小鼠嗅觉电位的波幅低于野生型小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AQP1主要分布在嗅黏膜的血管内皮细胞和嗅神经束膜上;AQP1基因敲除小鼠的嗅觉敏感性较野生型小鼠有一定程度的降低,但嗅神经元兴奋性没有差异。AQP1可能在嗅觉信号传递过程中发挥作用。

Kir 4.1基因沉默对U-251细胞周期的影响

目的:针对人内向整流性钾离子通道(inwardly rectifying potassium channel protein,Kir)4.1基因构建si RNA干扰载体,探讨其对U-251细胞增殖、生长的影响,为临床治疗及开发新的抗肿瘤药物提供实验依据。方法:采用细胞培养、质粒转染、流式分选、RT-PCR、Western blot及流式细胞仪对构建的质粒进行鉴定并观察对照组和干扰组细胞周期的变化。结果:对DH5α中抽提的重组载体测序验证结果和插入序列一致;成功筛选出一个有效质粒;质粒转染U-251细胞后,细胞周期中的G2期细胞数量由19.39%降至1.5%,明显减少(P=0.018),S期细胞数量由36.32%升至51.22%,明显增多(P=0.027)。结论:成功构建针对人Kir 4.1基因的si RNA干扰载体;Kir 4.1干扰载体可能是通过抑制U-251细胞周期中的G2期,使U-251细胞的生长停滞在S期,从而达到干扰U-251细胞的增殖能力。

人体解剖标本考试评价方法的实践与探索

医学是一门实践性很强的应用学科,医学生动手操作及临床实践能力的高低是评价医学教育质量的重要指标之一。人体解剖学不仅是重要的基础学科,也是基础医学向临床医学过渡的桥梁学科,采用恰当的教学手段提高学生实践和动手能力对于其他基础医学和临床医学课程的学习具有举足轻重的作用，而人体解剖标本的学习和考试是实现这一教学目标极其重要的方式[1]。本文现将人体解剖标本考试评价方法的实践与探索报告如下。

卵巢切除对APP/PS1双转基因小鼠脑内老年斑及自噬的影响

目的研究雌激素对APP/PS1双转基因小鼠脑内老年斑及自噬的影响,探讨雌激素缺乏导致阿尔茨海默病(AD)的病理机制。方法将3月龄雌性APP/PS1双转基因AD模型小鼠分为卵巢切除组与假手术组,术后2个月采用免疫组化染色及透射电镜观察两组小鼠脑内老年斑及自噬功能的变化,同时检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达情况。结果免疫组化结果显示,与假手术组相比,卵巢切除组小鼠脑内老年斑显著增加,分布更广,自噬相关蛋白LC3、Beclin-1阳性神经元数量均显著下降。电镜观察可见,与假手术组相比,卵巢切除组小鼠海马神经元及突起肿胀明显,暗神经元增加,神经元突起周围自噬小泡显著增多。结论雌激素缺乏可导致自噬泡成熟受阻、活性降低、自噬功能减弱,从而导致AD病理改变加重。

雌激素缺乏通过ERβ/GSK-3β通路加重痴呆小鼠认知损害的机制初探

目的:研究雌激素缺乏对APP/PS1双转基因小鼠认知功能和病理变化的影响以及对小鼠脑内雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)和糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达的影响,探讨雌激素缺乏促进阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发生发展的分子机制。方法:将3月龄雌性APP/PS1双转基因小鼠随机分为假手术组(AD-Sham组)和手术组(AD-OVX组),同月龄野生型小鼠为对照组(WT组),每组10只。分别于术后1个月和术后5个月,采用多种方法检测小鼠外周血雌激素水平、行为学、脑组织形态学及相关蛋白的变化。结果:OVX 1个月(F=22.441,P=0.002)和5个月(F=210.959,P=0.000)组AD小鼠体循环雌激素水平显著下调;OVX 1个月组小鼠子宫无明显缩小,而OVX 5个月出现明显萎缩。Morris水迷宫显示,OVX 1个月后,与AD-Sham组相比,AD-OVX组小鼠找到平台的平均潜伏期和路程显著增加(P<0.05),跨越平台的次数明显减小(P<0.05)。随着OVX时间的延长,至OVX 5个月后,AD-OVX组小鼠找到平台的时间和经过的路程更进一步延长(P<0.05),跨越平台的次数也相应下降(P<0.05)。免疫荧光结果显示,与AD-Sham组相比,OVX 1个月组AD-OVX组小鼠仅大脑皮质内老年斑增多(5.667±0.577 vs.3.333±0.577,P=0.023),而OVX 5个月AD-OVX组小鼠大脑皮质(11.667±1.528 vs.6.000±1.000,P=0.001)和海马内(6.333±1.528 vs.3.667±0.577,P=0.013)老年斑均显著增加。Western blot结果显示,与AD-Sham组相比,OVX 1个月(F=65.625,P=0.000)及5个月(F=18.462,P=0.003)组AD-OVX组小鼠脑内ERβ蛋白水平出现进行性下调(P<0.05);相应地,AD小鼠脑内p-GSK-3β水平降低的趋势与ERβ一致,尽管正常小鼠和AD小鼠脑内GSK-3β总蛋白无明显差异。结论:雌激素缺乏可能通过ERβ/GSK-3β通路加速脑内的病理改变,进而加重痴呆小鼠认知功能的障碍。

水通道蛋白4在小鼠嗅觉系统中的表达及功能

目的研究水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在小鼠嗅觉系统中的表达及功能。方法应用免疫荧光和免疫印迹技术研究野生型和AQP4基因敲除小鼠嗅觉系统中AQP4的表达差异;采用埋藏食物小球实验、嗅觉迷宫实验两种嗅觉行为学方法以及气体刺激性嗅觉电位记录(electroolfactogram,EOG)检测两组小鼠嗅觉功能的差异。结果免疫荧光和免疫印迹结果均证实了AQP4基因敲除小鼠嗅觉系统中没有AQP4的表达。免疫荧光结果表明AQP4主要分布于嗅黏膜上皮层中支持细胞膜、Bowmann’s腺管上皮细胞膜以及基底细胞膜上,还分布于嗅黏膜固有层中Bowman’s腺上皮细胞膜、嗅神经束周围的嗅鞘细胞膜,以及嗅球的嗅神经层和小球层。行为学检测结果显示,埋藏食物小球实验和嗅觉迷宫实验中除对照实验外,野生型和AQP4基因敲除小鼠在所有测试时间点的差异具有统计学意义(P<0.05)。气体刺激性诱发电位结果发现,两组小鼠嗅黏膜在不同气压强度饱和三甲胺(trimethylamine)作用下的嗅觉电位波形相似,波幅均随气压的逐渐增加而增大;而在相同气压作用下,AQP4基因敲除小鼠嗅觉电位的波幅低于野生型小鼠,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP4广泛分布于嗅觉系统包括嗅黏膜、嗅神经和嗅球的多个部位,其可能具有保护嗅神经束和促进神经信号传递的作用。

改良的乙状窦后-内耳道上入路显微应用解剖学研究

目的:探讨将现代影像技术与神经导航仪相结合用于改良的乙状窦后—内耳道上入路来进行量化研究内耳道上结节和岩尖的扩大磨除的范围以及其安全性、有效性和实用性。材料:10%甲醛固定好的成人尸头标本15例(双侧共计30组数据)、64排螺旋CT(0.625mm层厚)、Mimics V10.0软件、神经导航仪等。方法:在神经导航仪的精确引导下模拟该手术入路,并进行逐层显微解剖定位,从后向前对内耳道上结节和岩尖的骨质进行安全磨除,以提高骨质磨除的安全性,并采用CT测量的方法来观察和测量内耳道上结节和岩尖的磨除范围以及三叉神经等结构的显露范围;并借助Mimics V10.0软件来三维重建内耳及颞骨,以此来估算岩骨骨质磨除相对比较安全的范围。结果:通过本次实验研究,在改良的RSSMA中,内耳道上结节前—后、中线一侧方的骨质可以全部磨除;岩尖的上—下(可磨除8.22mm骨质)、前—后:中线一侧方的骨质可以部分磨除;其中三叉神经在磨除后可增加显露9.26mm;内耳道前后壁夹角可扩大33.06°的手术视野;可显露上斜坡的范围约93.08mm2,中颅窝约148.76mm2。结论:在现代医学影像技术与神经导航仪相结合的条件下进行改良的RSSMA较传统入路更简便、安全、实用、微创,改良的RSSMA是岩斜区肿瘤手术治疗的较佳选择。

蛋白酶体抑制剂处理神经细胞系后Nicastrin的表达变化及其与Aβ的关系

目的探讨蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内Nicastrin(NCT)的表达变化,及其与γ-分泌酶活性和Aβ生成的关系。方法运用亚细胞器分级分离技术、免疫共沉淀、Western blot和ELISA等检测神经细胞内NCT的表达及Aβ水平。结果正常情况下NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,极少量分布于溶酶体,蛋白酶体抑制剂Lac-tacystin处理后NCT水平升高(P<0.001),且细胞内增多的NCT也主要聚集在内质网和高尔基复合体;NCT与泛素在细胞内共存;NCT的蛋白降解不受PS的影响;NCT降解受阻可引起细胞内γ-分泌酶的底物C99、C83显著减少,而γ-分泌酶的产物Aβ40、Aβ42的生成显著增多(P<0.01)。结论 NCT的降解可通过泛素-蛋白酶体途径实现,蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT水平升高,且增多的NCT可促进APP的代谢及Aβ的生成。

麻醉解剖学教学改革浅议

麻醉解剖学是麻醉专业学生必修课之一，是基础和临床之间的桥梁课程，麻醉专业学生学好麻醉解剖学对今后临床工作起着至关重要的作用。因此，笔者结合近年来在麻醉解剖学教学过程中遇到的问题，结合麻醉专业特色，对麻醉解剖的教学内容与教学方式进行改革。本文主要从多媒体、网络、教材建设、学习主动性的培养、专业特色及其课程形成性评价等多方面浅议如何提高本门课程的教学质量。

慢性脑缺血模型小鼠视网膜内血管内皮生长因子和胶质纤维酸性蛋白的表达变化

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)在慢性脑缺血模型小鼠视网膜内的表达规律及两者的关系。方法:采用C57小鼠建立慢性脑缺血模型,结合免疫组化方法,观察缺血不同时间段小鼠视网膜中VEGF、GFAP在时间和空间上的表达变化。结果:在假手术组中VEGF、GFAP呈弱表达或不表达;在手术组中,缺血120 d时VEGF、GFAP表达增加(P=0.002,P=0.006),随缺血时间的延长,缺血180 d时VEGF、GFAP表达强度及空间分布范围呈进行性增加(P=0.050,P=0.000)。结论:VEGF、GFAP在慢性脑缺血模型小鼠视网膜中表达进行性上调,提示两者参与了视网膜缺血损伤的病理改变过程,并在视网膜缺血损伤机制中起着重要作用。

去甲肾上腺素和激动蛋白2α在大鼠蒲肯野细胞的共表达

目的观察大鼠小脑浦肯野细胞内去甲肾上腺素(NA)和激动蛋白-2α(AP-2α)的共存状况。方法利用免疫组化、Western bloting和免疫荧光双重标记技术,观察神经递质NA的特异性标志酶-多巴胺β羟化酶(DBH)和AP-2α在成年大鼠浦肯野细胞中的表达及共存。结果免疫组化和免疫荧光显示大鼠小脑浦肯野细胞DBH和AP-2α表达呈阳性;Western blot检测结果表明小脑中有DBH和AP-2α的表达;免疫荧光双标显示DBH和AP-2α共存于浦肯野细胞胞浆内。结论小脑浦肯野细胞同时含有NA和AP-2α,NA可能作为神经调质参与小脑蒲肯野细胞的功能调节;AP-2α作为调节因子,可能参与NA的表达调控。