人乳头瘤病毒16型E6和E7基因及其突变体转化活性的研究

为筛选出可用于研制HPV治疗性疫苗的HPV16型E6和E7基因突变体 ,故将HPV16型原型株 (德国株 )E6和E7基因及其各种突变体分别转染Balb/c3T3细胞 ,观察转染后的细胞在软琼脂培养中的集落形成能力和在裸鼠体内的成瘤能力。结果表明 ,单独转染和共转染HPV16野生型E6和E7基因的Balb/c3T3细胞系 ,在软琼脂中呈集落样生长 ,并在裸鼠体内成瘤 ;而转染E6基因突变体mE6 (5 0G)、E7基因的两种突变体mE7- 1(2 4G2 6G)和mE7- 3(2 4G2 6G6 7R)以及共转染mE6和mE7- 1的Balb/c3T3细胞 ,在软琼脂培养中极少形成集落 ,也不能在裸鼠体内成瘤。提示经结构改造后的HPV16E6和E7基因已失去了对Balb/c3T3细胞的转化活性 ,而保留了免疫原性 ,可用于HPV16相关肿瘤治疗性疫苗的构建。

苏北盆地海安凹陷南部岩性油藏勘探成果及启示

苏北盆地海安凹陷是晚白垩世发育起来的箕状断陷,早期勘探主要围绕古近系泰州组展开,阜宁组长期以来被认为是"皮厚肉薄",资源有限。通过解放思想,转变勘探思路,海安凹陷南部阜宁组相继发现了张家垛、曲塘、向阳—胡集3个含油气区带,"十二五"期间累计提交探明储量达1353×10~4t。通过海安凹陷南部岩性油藏的勘探实践,取得以下几点认识:(1)海安凹陷南部存在晚期生烃、晚期成藏的"封存箱"生、储体系,具有高效排烃、高效富集的特征,重新计算海安凹陷曲塘次凹资源量达9000×10~4t;(2)建立了海安凹陷南部滩坝砂沉积模式,曲塘次凹滩坝砂发育,坝砂呈现东西向条带状展布,集中分布于北部张家垛曲塘地区,南部以滩砂为主;(3)海安凹陷南部生烃期、排烃期与阜三段圈闭形成期时空匹配关系较好,有利于形成阜三段滩坝砂岩性油气藏;(4)平面上油藏围绕生烃洼陷展布,受沉积微相控制;纵向上主要生储盖组合决定岩性油气藏的分布层位。长期活动断层为输导断层,控制油气富集。

苏北盆地溱潼凹陷古近系阜宁组二段页岩油富集高产主控因素与勘探重大突破

在对苏北盆地溱潼凹陷古近系阜宁组二段泥页岩生烃特征、含油性、储集性研究的基础上,剖析页岩油富集的主控因素。溱潼凹陷阜二段泥页岩厚度大、有机碳含量(TOC)中等,具备页岩油富集的物质基础。深凹带阜二段泥页岩镜质体反射率(R_(o))为0.9%~1.0%,热演化程度适中,页岩油具有轻烃和气测全烃值高、流动性好的特点;断层不发育,保存条件好,地层压力高,有利于富集高产;脆性矿物含量较高,纹层和天然裂缝发育,可压性好。连续性大面积分布的优质泥页岩是油气富集的基础,保存条件是成藏的关键,热演化程度是含油性的决定因素,异常高压、纹层发育和较高脆性矿物是高产的重要因素。沙垛地区SD1井阜二段页岩油具有低TOC(1%)、低气油比(40~80 m^(3)/t)、高异常压力(1.25 MPa)的特征,该井的成功开发,降低了陆相页岩油评价标准的门限,拓展了页岩油的发展空间。

苏北盆地溱潼凹陷岩性油藏勘探成果及启示

苏北盆地溱潼凹陷是典型的小型断陷盆地,该凹陷经过多年的勘探,丰度较高且未被发现的构造油气藏越来越少,而规模较大、丰度相对较低的岩性油气藏勘探潜力较大。"十二五"期间,通过解放思想,转变勘探思路,夯实基础研究,应用层序地层学和地震沉积学等新技术、新方法,溱潼凹陷发现储量大幅增长,其中岩性油藏占比较高,先后发现西部斜坡带帅垛—陈家舍地区戴一段超覆尖灭型岩性油藏,俞垛—华庄、帅垛地区阜三段两个千万吨级构造—岩性油藏,并在与火山岩相关的岩性油藏勘探中发现了良好苗头。研究认为,戴一段岩性油藏相控圈闭是基础,断层—砂体输导体系是关键,保存条件是核心;阜三段构造—岩性油藏具有近源富集、相带控藏、断裂输导的"三元"控制成藏规律,对下一步勘探工作起到了较好的指导作用。"十二五"期间溱潼凹陷岩性油藏丰富的勘探成果表明,该区戴一段、阜三段以及与火山岩相关岩性油藏仍是今后苏北盆地溱潼凹陷岩性油藏勘探的重点。

HPV16型E7复制型DNA疫苗诱发的抗肿瘤免疫反应

为了研制有效的疫苗 ,用于HPV16型重度感染和与其感染相关的宫颈癌晚期病人手术后的免疫治疗 ,用复制型DAN疫苗载体 pSCA1,在其CMVIE启动子之下插入修饰的HPV16型E7基因mE7- 3( 2 4G、2 6G、6 7R) ,构建成 pSCA1mE7- 3复制型DNA疫苗。以重组质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,检测诱发的特异性CTL活性 ;将免疫后的小鼠用TC - 1肿瘤细胞攻击 ,观察免疫保护效果。实验结果显示 :pSCA1mE7- 3复制型DNA疫苗能诱导小鼠产生针对TC - 1肿瘤细胞的特异性CTL反应 ;复制型DNA疫苗免疫后的小鼠能耐受 1× 10 4 TC - 1细胞的攻击 ,成瘤时间推迟 ,并且成瘤率明显下降 ,部分小鼠得到保护能免受肿瘤攻击。因此pSCA1mE7- 3复制型DNA疫苗可作为HPV16相关肿瘤的癌前病变及中晚期病人术后免疫治疗的候选疫苗。

苏北盆地溱潼凹陷古近系阜宁组二段页岩油形成条件及有利区评价

通过对苏北盆地溱潼凹陷古近系阜宁组二段泥页岩段生烃、储集条件及含油性分析,优选了页岩油勘探有利层段;综合岩性、压力、裂缝预测资料,评价出有利区带。溱潼凹陷阜二段有机碳含量大于1.0%的泥页岩厚度为160~260 m,广泛分布;镜质体反射率R o为0.5%~1.1%,成熟范围广;有机质类型好,有机显微组分以藻类体为主,具备页岩油形成的物质基础。阜二段孔隙度平均为8.9%,储集空间主要为溶孔、黏土矿物和碳酸盐晶间孔,纹层状泥灰岩和粉砂质泥岩微裂缝较发育,裂缝控制了储层渗透性。阜二段③~⑤亚段脆性矿物含量为62%~65%,以石英、方解石和白云石为主,游离烃含量S 1为0.1~2.7 mg/g,平均为0.54 mg/g,为页岩油勘探的最有利层段。溱潼凹陷阜二段页岩油整体评价为Ⅱ类和Ⅲ类,其中时堰和储家楼深凹带是寻找粉砂质泥岩和泥灰岩油藏最有利区,东斜坡是寻找凝灰岩夹层型页岩油藏有利区。

表达人乳头瘤病毒58型L1、L2壳蛋白的非复制型重组痘苗病毒疫苗株的构建

采用PCR定点突变方法 ,对HPV5 81L1基因中痘苗病毒早期基因转录终止信号TTTTTNT结构进行修饰 ,并保留氨基酸不变。选用非复制型重组痘苗病毒为载体 ,将修饰的L1基因 1 5kb和L2基因 1 4kb分别插入痘苗病毒表达载体 pJSD的 7 5k和H6早期启动子之后 ,使之与非复制型重组痘苗病毒在TK区重组。经单斑筛选纯化 ,获得共表达HPV5 8L1、L2晚期蛋白的非复制型重组痘苗病毒疫苗实验株。该病毒在CEF细胞上连续传至第15代 ,经斑点杂交分析 ,重组痘苗病毒基因组中有L1和L2基因插入 ;经Westernblot检测 ,重组病毒能稳定表达HPV5 81L1及L2蛋白。此结果为HPV5

溱潼凹陷低熟油的生烃母质特征及油源分析

通过对溱潼凹陷低熟油中不同类型饱和烃生源标志物的分析认为,其生源构成具有多源复合型特征,高等植物和菌藻类微生物是该凹陷低熟油最重要的成烃母质,分别占生源构成的40%～70%和12%～40%.另外根据不同层位生油岩与低熟原油生物标志物地球化学特征,分析了研究区低熟油的主要油源。

苏北盆地溱潼凹陷阜宁组第三段物源-沉积特征

通过岩心观察、薄片鉴定、测井曲线等资料的综合分析,探讨苏北盆地溱潼凹陷阜宁组第三段的物源方向、岩石类型、古生物及沉积构造特征。阜宁组第三段沉积期物源主要来自北部,南部泰州凸起及西南斜坡无物源供给;溱潼凹陷斜坡带主要发育三角洲前缘亚相沉积;泰州凸起两侧及溱潼凹陷西南斜坡南华-兴旺地区为浅湖沉积环境,发育浅湖滩坝砂储层。斜坡带三角洲前缘主体部位是构造型油藏勘探有利区,西南斜坡带南华-陈家舍地区三角洲前缘侧翼-浅湖滩坝沉积区是岩性油藏勘探的有利区。

苏北盆地溱潼凹陷阜二段烃源岩生烃潜力及形成环境

在阜二段层序划分基础上,通过大量有机地球化学分析系统评价阜二段烃源岩,揭示优质烃源岩的发育层段和形成环境。结果表明,溱潼凹陷阜二段中、下部烃源岩生烃条件较好,优质烃源岩主要分布于七尖峰亚段、四尖峰亚段和龟背亚段,形成于半咸水的还原环境中,TOC大于2%,有机质类型以Ⅰ型、Ⅱ_1型为主,有机质生源构成为低等水生生物和陆源高等植物,有机质成熟度普遍达到成熟阶段。阜二段顶部和底部的烃源岩品质相对较差。建立了阜二段泥页岩层序—沉积发育模式,认为烃源岩发育受控于区域气候变化、降水强度、水介质条件和陆源物质供给等因素,阜二段沉积早期到晚期,水体盐度逐渐降低,沉积环境由强还原到弱还原变化,蒸发作用减弱,古气候由干旱变为潮湿,阜二段沉积中期最有利于形成优质烃源岩。

一个新的水稻矮秆突变体的遗传分析和基因定位

新的水稻矮秆基因的发掘,对深入研究植物株高的调控途径及株型育种有非常重要的作用。本研究报道了从日本特早熟粳稻品种Kitaake的组织培养后代获得的一个矮秆突变体dm,该突变体植株细小,紧凑,机械强度降低,结实率下降,子粒变窄,千粒重降低等。利用分离群体中的矮秆株,最终将目标基因定位在第4染色体长臂末端InDel标记EL-72和L-1之间,物理距离为168 kb的区间内,该区间内无已报道的水稻矮秆基因,该基因可能是一个尚未被克隆的新的株高决定基因。

溱潼凹陷西斜坡阜三段断陷湖盆砂质滩坝沉积特征

以溱潼凹陷西斜坡阜三段砂质滩坝为研究对象,通过对钻井岩心、测井、录井以及各类分析化验数据进行综合研究,分析砂质滩坝沉积特征与沉积动力学条件,划分砂质滩坝成因类型并总结沉积主控因素,并在时空条件下讨论砂质滩坝沉积体系与分布特征。研究认为,溱潼凹陷西斜坡砂质滩坝可进一步划分为滩砂与坝砂,两者在岩性、颜色、厚度、粒度、沉积构造等方面存在较大差异。西斜坡带砂质滩坝沉积按照成因可以划分为远源三角洲前缘前端与侧缘再沉积砂质滩坝和近源冲积扇控制下的近岸砂质滩坝两种类型。远源三角洲前缘前端与侧缘再沉积砂质滩坝见于阜三段各砂组中,且在Ef_3~4砂组中分布最为广泛;近源冲积扇控制下的近岸砂质滩坝则仅见于Ef_3~4砂组中,局限于西斜坡东南沿岸呈条带状发育。对陆相断陷湖盆砂质滩坝沉积特征研究,以及湖相薄互层岩性油气的勘探与开发具有一定的理论借鉴。

休闲个体的分类及其收益研究--以马拉松跑者为例

在我国马拉松运动"井喷式"发展的背景下,从深度休闲的视角,对579名马拉松休闲跑者进行问卷调查,旨在考察马拉松深度跑者是否存在不同的类别,以及不同类别跑者的休闲收益是否存在显著差异。研究结果显示:1)马拉松跑者呈现出较高均值水平的深度休闲特质。2)根据坚持不懈、显著的个人努力、生涯性、强烈的认同感和独特的文化等5个深度休闲特质,采用聚类分析法,将马拉松跑者区分为一般跑者、中等跑者和核心跑者3个类别。3)3类跑者在9种休闲收益上均存在显著差异,总体上表现为核心跑者高于中等跑者,中等跑者高于一般跑者。研究结果丰富了国内休闲体育领域的研究内容,有利于理解当下马拉松跑者的休闲体育行为,并为有关政府部门或组织机构提供经验参考。未来应进一步考察马拉松跑者深度休闲特质与健康和幸福感等变量之间的关系。

苏北盆地溱潼凹陷戴一段沉积-层序特征及其对岩性勘探的指示意义

为厘清溱潼凹陷戴一段岩性勘探有利层段及区带这一关键地质问题,应用高分辨率层序地层学、沉积学等基础理论、技术方法,综合地震、钻井岩心及测井资料,对溱潼凹陷戴一段进行了沉积-层序研究,识别出层序界面及洪泛面两类转换面,并进一步划分为1个长期、5个中期旋回层序,深凹带5个中期旋回层序发育齐全,中-外坡逐渐减少至2个,明确了泰州凸起是戴一段的主物源方向,戴一段发育扇三角洲沉积体系,沉积相带展布受物源、基准面升降共同控制。沉积-层序综合研究表明纵向上戴一段MSC1、MSC2、MSC3时期泥岩隔层发育、储盖组合有利,是岩性勘探最有利层段;平面上相带的展布决定了岩性勘探的有利区带,西斜坡的蔡家堡-陈家舍、帅西、帅垛及帅北地区处于多期扇体前缘砂岩尖灭区,是岩性/构造-岩性圈闭勘探的重点区域。

溱潼凹陷火山岩油藏成藏特征研究

近年来,苏北盆地火山岩油藏勘探取得一系列成果,但针对火山岩分布、岩相及油藏成藏特征研究较少。本文在井震结合的基础上,充分应用岩心、薄片、物性分析等资料,尝试系统研究溱潼凹陷火山岩岩相模式,总结油藏类型,分析勘探潜力。溱潼凹陷火山岩沿深大断裂呈中心式喷发,喷发期次单一,主要形成于渐新世三垛运动期,主要发育火山通道相和溢流相。火山通道相的次火山岩亚相和隐爆角砾岩亚相主要分布在阜二段—戴南组,其中次火山岩亚相分布最为广泛;溢流相的玄武岩主要分布在垛一段顶部,是一套区域性标志层。溱潼凹陷新生代火山岩油藏主要发育3种类型:隐爆角砾岩型、接触蚀变型、侧向遮挡型,并建立了5种火山岩油藏成藏模式。火山岩油藏富集受火山岩形成时间、规模、岩性等因素影响。火山作用既能催熟烃源岩,又有利于砂岩储层形成裂缝,溱潼凹陷火山活动主要对油气成藏起促进作用。未震穿阜四段泥岩的隐爆角砾岩体具有更有利的成藏组合。针对不同类型火山岩油藏勘探均取得一定成果。在茅山—帅垛—储家楼地区共发育12个火山口,118km2侵入岩,预计3种类型火山岩油藏资源量1500×104 t,是溱潼凹陷重要的资源接替领域。

人乳头瘤病毒58型L1壳蛋白在原核细胞中的高效表达及抗体制备

目的 人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)是重要的高度致瘤性病毒之一 ,用原核细胞表达HPV5 8L1主要壳蛋白 (McP) ,并制备相应抗体血清 ,为基因工程疫苗研制打下基础。方法 用聚合酶链反应 (PCR)扩增HPV5 8L1完整编码区基因 ,并克隆、测序。构建原核表达载体pRSETB 5 8L1,表达的L1蛋白经SDS PAGE纯化 ,免疫BALB c小鼠。结果 在原核细胞中表达了HPV5 8L1壳蛋白 ,该壳蛋白的相对分子质量为 6 0 0 0 0 ,此蛋白与HPV16L1抗体有交叉反应。获得抗HPV5 8L1壳蛋白特异性抗体 ,抗体滴度为 1∶80 ,并用该抗体鉴定了昆虫细胞中表达的HPV5 8L1壳蛋白。结论 HPV5 8壳蛋白在原核细胞中获得有效表达 ,纯化免疫小鼠后能产生抗HPV5 8L1特异性抗体 ,此抗体可用于鉴定真核细胞表达的HPV5

利用Bio-real-time PCR技术检测玉米内州萎蔫病菌

玉米内州萎蔫病是北美玉米生产上的严重病害之一,为预防其传入我国,利用人工注射接种的方法模拟自然感病的玉米籽粒,通过Clavibacter michiganensis不同亚种的转录间隔区序列,设计了特异性的TaqMan-MGB探针,将Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis(Cmn)的半选择性培养基sCNS和特异性的探针结合,建立了进出境玉米种子上Cmn的Bio-real-time PCR检测方法,该方法可以检测到105粒玉米种子中含有一粒感病籽粒(带菌量为1.2×106 CFU/粒)的种子样品,可以应用于实际检测。

4种葫芦科植物病毒复合胶体金免疫层析试纸条的研制

使用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在pH值7.6,蛋白用量10～15μg/mL条件下,制备形成4种葫芦科植物病毒多克隆抗体的稳定胶体金蛋白复合物;设计了双向复合试纸条,使用微定量喷头在试纸条两侧的硝酸纤维素膜上分别喷2条病毒检测线和1条质控线,组装制成免疫层析检测试纸条。结果表明经过条件优化后制备的双向复合试纸条特异性好,可在10min内同时检测4种葫芦科植物病毒,且对不同病毒阳性材料的检测灵敏度可达到稀释103倍以上。

西瓜花叶病毒单克隆抗体及TAS-ELISA试剂盒的研制

将纯化的西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)制剂免疫BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与经西瓜花叶病毒免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选出1株稳定分泌西瓜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株6C6。用间接ELISA方法对所获得的杂交瘤细胞株进行亚型鉴定为IgG1。间接ELISA方法测定腹水效价为1∶105。以单克隆抗体为包被抗体、多克隆抗体为检测抗体的TAS-ELISA试剂盒与引自ATCC的西瓜花叶病毒毒源PV-27、PV-379、PV-394、PV-511分离物均有反应,与同属的马铃薯A病毒(Potato virus A)、莴苣花叶病毒(Lettuce mosaicvirus virus)、李痘病毒(Plum pox virus)不发生交叉反应,与同属的番木瓜环斑病毒呈弱阳性反应。。

浅析昆虫测量审核样品制备和检验的一般原则和注意事项

本文对植物检疫测量审核活动中昆虫类样品制备和检验所涉及到的方法和流程进行了梳理,通过比较分析,总结出昆虫类测量审核样品的制备和检验注意事项,为在该领域开展测量审核活动的同行提供参考。