miRNA-21种子序列反义核酸及抗多发性骨髓瘤应用

成熟microRNA的种子序列通过与其靶mRNA的3'-UTR区完全互补结合,发挥负性调节作用.针对miR-21的种子序列设计并合成8个碱基的微小反义核酸(tiny anti-miR-21,t-antimiR-21),研究t-antimiR-21对多发性骨髓瘤的抑制效应.利用LipofectamineTM2000转染多发性骨髓瘤RPMI-8266细胞系,激光共聚焦显微镜检测荧光标记的反义寡核苷酸的细胞内定位,流式细胞仪检测转染效率;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测细胞增殖抑制率;台盼蓝拒染法测活细胞数;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果显示:t-antimiR-21主要定位于细胞质,与antimiR-21具有相同的转染效率,但是t-antimiR-21转染后降解较快.t-antimiR-21显著抑制细胞增殖和促进细胞凋亡,最佳作用浓度为0.4μmol/L,最佳作用时间为48 h.结果表明t-antimiR-21可用于血液系统相关肿瘤的实验治疗,miRNA-21可作为多发性骨髓瘤基因治疗的潜在靶点.

miR-155种子序列的反义寡核苷酸对抗多发性骨髓瘤的作用

目的:探讨针对miR-155种子序列的微小反义核酸(tiny antimiR-155,t-antimiR-155)对多发性骨髓瘤细胞的抑制效应。方法:化学合成t-anti miR-155,通过脂质体转染多发性骨髓瘤RPMI-8266细胞株;实验分为t-antimiR-155组、随机对照组(SCR)和空白对照组;通过MTT法检测细胞增殖抑制率;使用细胞集落形成实验观察集落形成情况;流式细胞术(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡率。结果:(1)MTT筛选t-antimiR-155显著抑制RPMI-8266细胞生长的浓度,t-antimiR-155的最佳浓度是0.4μmol/L,最佳作用时间是转染后48 h。(2)细胞集落形成实验显示,相比于SCR组,t-antimiR-155组细胞形成集落的能力减弱,集落形成率显著降低。(3)相比于SCR组,t-antimiR-155组的细胞凋亡率明显增加,差异显著。结论:t-antimiR-155可能通过干扰miR-155表达有效抑制多发性骨髓瘤细胞的进展;miR-155可能作为多发性骨髓瘤基因治疗的潜在靶点。