分子医学实验教学改革与自主逆向型项目建设

基于推进分子医学实验教学改革的目的,开展自主逆向型实验教学项目的建设和创新,探讨了更有效开展实验教学、完善实验教学管理的模式,以实践证明实验项目的建设和创新是帮助分子医学实验教学工作取得新突破的重要举措。

中国汉族人群apoB VNTR等位基因的多态性分析及其分型标准物的克隆制备

目的对中国汉族人群的apoB VNTR等位基因进行分布频率、序列结构等多态性分析,并通过分子克隆技术制备apoB VNTR等位基因分型标准物。方法通过PCR扩增并结合电泳、测序等方法分析人群apoB VNTR等位基因的多态性,并将该人群中得到的所有类型等位基因片段插入pUC重组质粒,经转染、扩大培养、扩增及再鉴定后,制备出apoB VNTR等位基因分型标准物。结果所检测人群中共检测出16种apoB VNTR等位基因,发现核心序列存在变异体,并成功制备出分型标准物。结论对apoB VNTR的多态性分析应结合等位基因的分布频率与核心序列的结构,所制备的apoB VNTR等位基因分型标准物使apoB VNTR电泳法分型更加准确。

正交试验优化绿茶中茶多糖醇析水提法的实验研究

采用正交试验法对绿茶中茶多糖的醇析水提法的影响因素进行了探讨,应用正交设计、方差分析综合讨论了茶多糖提取的产率、纯度和成本的影响工艺条件,最后确定提取茶多糖的工艺条件为:沸水浸提时间为30min,等量氯仿萃取次数为3次,等量乙酸乙酯萃取次数为1次,沉析用的乙醇浓度为60%。本文的实验结果为改善茶多糖的提取方法提供了实验基础。

银杏内酯B对谷氨酸诱导脑皮质神经元凋亡及Ca^(2+)超载的影响

目的:观察银杏内酯B对谷氨酸诱导培养脑皮质神经元凋亡的拮抗作用,并探讨这种作用与神经细胞内游离Ca2 + 浓度改变的关系。方法:采用改良的方法原代培养胎小鼠脑皮质神经元,用噻唑兰(MTT)法检测神经元的存活情况;细胞凋亡采用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳法和Hoechst332. 5 8核染色方法进行分析;用Fura - 2 /AM荧光指示剂法测定细胞内Ca2 + 浓度。结果:谷氨酸(0 .8mmol/L)能诱导神经细胞凋亡和胞内Ca2 + 超载,银杏内酯B(10 - 2 5 0 μmol/L)能减轻谷氨酸所致的细胞损伤,表现为神经元存活率提高,细胞形态的恢复和DNA断裂减少。结论:银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用,这可能与其能竞争PAF受体并降低神经细胞内[Ca2 + ]从而抑制谷氨酸诱导的神经元凋亡有关。

临床免疫学和免疫检验实验教学资源网站的建设与应用

临床免疫学和免疫检验是重要的医学检验基础课程,建设临床免疫学和免疫检验教学资源网站,对提高检验医学教学的质量、提高学生学习的兴趣将有重要的作用。通过网络和多媒体的特性使实验教学更灵活、主动,从而提高实验教学的效率和质量。本文介绍临床免疫学和免疫检验教学资源网站的建设过程中的主要内容及其在实验教学中的应用。

人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定?【结果】 PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mut1基因片段,正确插入pET-22 b(+)载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量Mr≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L?【结论】 成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白?

开放性实验教学与学生科研创新能力的培养

“以实验为中心安排教学”是近年来美国高校正在开展的一项极有影响力的实验教学改革计划(简称EBE计划),其教学重点不在知识的掌握而在能力的培养。为了更好地强化学生的实验操作和科研创新能力,在全面查阅EBE计划相关文献的基础上,充分结合自身的实际状况并加以改进,创建了一个以技能训练为基础、以研究性实验为核心、以综合能力培养为目标的开放性实验教学模式。在完成分子医学基本实验课程的基础上,以学生实验小组的形式开展灵活多样的研究性实验和学生科研活动。它不仅能最大限度地拓展仪器使用空间为教学服务,更重要的是能体现先进的现代化教学思想,在实验教改上具有重要的推广意义。

舌癌Tca8113细胞来源exosomes的制备及鉴定

目的探讨舌癌Tca8113细胞能否分泌exosomes,为舌癌的免疫治疗寻找新方法。方法采用超速离心及差异密度梯度离心法,从Tca8113细胞中分离并纯化exosomes,通过透射电子显微镜观察其超微结构,蛋白质印迹法分析其表面蛋白成分。结果从Tca8113细胞中成功分离并纯化出exosomes,其结构及携带蛋白与其他细胞来源的相似,并发现其分泌的exosomes还携带有肿瘤抗原。结论舌癌Tca8113细胞能分泌exosomes,而且其携带多种与肿瘤免疫相关的蛋白可能具有抗肿瘤作用。

Tca8113细胞exosomes的制备、鉴定及体外抗瘤作用观察

目的:探讨舌癌Tca8113细胞能否分泌exosomes,为口腔肿瘤的免疫治疗寻找新方法。方法:采用超速离心及差异密度梯度离心等方法,从Tca8113细胞中分离并纯化exosomes,透射电镜观察其超微结构,Westernblot分析其表面蛋白成分,最后通过与树突状细胞(dendritic cells,DC)及细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)等介导的细胞毒性实验来观察exosomes体外抗肿瘤效应。结果:从Tca8113细胞中成功分离并纯化出exosomes,其结构及携带蛋白与其他细胞来源的相似,并发现其分泌的exosomes还携带有肿瘤抗原MAGE蛋白。体外抗瘤实验表明:负载exosomes的DC诱导的CTL对Tca8113细胞的杀伤率明显高于未负载exosomes的DC诱导的CTL及加IL-2培养的T细胞,有显著性差异(P<0.01)。结论:舌癌Tca8113细胞能分泌exosomes,exosomes携带各种与肿瘤免疫相关的蛋白,负载DC后,可以诱导T细胞成为抗原特异性CTL,具有特异杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔肿瘤的免疫治疗开拓了新的途径。

分子医学实验室仪器设备管理的实践与探索

仪器设备管理是实验室工作的重要内容。分子医学实验室自组建以来,建立健全了仪器设备管理制度,在开放与培训、仪器共享与信息化管理方面进行了探索与实践,提高了仪器设备的使用效益,使实验管理与实验教学工作走上了良性循环、可持续发展的道路。

以逆向教学法创建“分子医学技能”新课程体系

在创建《分子医学技能》新课程中,在教学内容上以学科融合、科研探索和联系临床应用为特点,使学生在系统地学习和掌握基本理论和技术的同时,能及时地和医学应用联系在一起,既提高了学生的学习兴趣,又培养了他们的综合科研和创新能力。在教学方法上改革传统的以单纯老师授课为主的单一教学方法,建立一个以主体课程、专题讲座和学生科研三大支柱为支撑的,以课内课外结合、老师学生互动、课程学习和科研探索交叉,多种教学手段并进为特色的逆向型、立体化教学体系,使学生在学习过程中得到全方位,多层面的综合训练。

姜黄素对人喉癌细胞株Hep-2增殖和端粒酶活性的影响

目的研究姜黄素(curcumin)对人喉癌细胞Hep-2增殖和端粒酶活性表达水平的影响。方法 CCK-8法检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后24h、48h、72h的细胞增殖活性;集落形成试验检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后的细胞增殖抑制率;StretchPCR-银染法检测细胞端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶主要组分hTERT的mRNA表达情况。结果①姜黄素对Hep-2细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。五种浓度(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L、100μmol/L)姜黄素作用12、24、48、72小时后,IC50分别为81.17μmol/L、40.90μmol/L、33.26μmol/L、31.63μmol/L;②四种浓度(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)姜黄素作用于Hep-2细胞48h,一周后各组Hep-2细胞集落形成数和细胞增殖抑制率均呈浓度依赖性,其细胞增殖抑制率与对照组相比,分别为36.25%、57.4%、98.48%、100%;③60μmol/L姜黄素作用于Hep-2细胞24、48、72小时后,与对照组相比,端粒酶活性总光密度值(IOD)分别下降23.19%、60.28%和70.15%,各时间组间有显著性差异(P<0.01);端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平IOD值分别下降2.90%、58.69%和88.35%,各时间组间有显著性差异(P<0.01)。结论姜黄素可抑制体外培养的Hep-2细胞的增殖活性,下调hTERTmRNA的转录水平并抑制细胞的端粒酶活性,有较好的临床应用前景。

分子医学实验室网站建设及其应用

建设一个兼备分子医学实验室全貌和实验教学网络化资源的综合型网站。主要目的,一是为广大学生的自主学习、科研探索和学术交流提供一个方便快捷的网络平台;二是进一步促进分子医学实验室这一现代化实验平台的开放推广和信息流通,使其更好地服务于学校的教学和科研活动,并推动实验教学改革的不断深入。

开放型实验室教学管理的探讨

作为基础医学实验教学中心分子医学实验教学平台，我们承担了本校医科类本科生和研究生的分子医学基础实验课程．为了更好地强化学生的实验操作能力和科研创新能力。我们借鉴了美国高校的实验教学改革计划——EBE计划的教学理念。并充分结合自身的实际状况加以改进。创建了一个以技能训练为基础、以研究性实验为核心、以综合能力培养为目标的开放性实验教学模式。

高校实验教学体系之三要素及立体化管理模式探讨

教学实验室、实验技术人员团队,实验教师团队是完成实践型教学的三大基本要素。本研究从分子医学实验平台的综合型网络化管理体系建设;一专多能、点面结合的技术人员团队和实验技术系统建设;因地制宜、灵活多样的组合型教师团队建设,构建一个三者之间既各成体系又有机组合的立体化管理模式,以其形成高质高效运作的实验教学系统,同时为学生探索性实验、学生科研活动以及实验设施的开放使用等提供一个便捷实用、渠道通畅的实验空间,最终目标是使实践学教学的整体水平达到一个新的层次。

分子医学实验室质量管理体系的构建与实践

根据分子医学实验室近年来承担实验教学课程的管理与实践，构建了教学实验室的全面质量管理体系，该体系是通过运行组织和管理、文件控制、效果评价、供应质量、开放服务、投诉处理、纠正措施、持续改进、记录管理、内部考核等模式进行管理的，为提高实验教学质量及优秀学生的培养提供了基础和保障。

舌癌exosomes诱导CTL细胞体外抗瘤效应的观察

目的:研究舌癌exosomes诱导CTL体外抗肿瘤效应。方法:通过连续离心及超滤法从Tca8113细胞培养上清中分离、纯化出exosomes,然后与树突状细胞(DC)共培养,诱导T淋巴细胞活化为CTL。通过乳酸脱氢酶法测定特异性CTL对Tca8113的杀伤效应。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:exosomes可促使DC成熟。杀伤实验表明:负载exosomes的DC诱导CTL对Tca8113细胞的杀伤率显著高于未用exosomes负载的DC诱导的CTL及加IL-2培养的T细胞,其差异有显著性(P<0.01)。结论:Tca8113细胞来源的exosomes负载DC后,可以诱导T细胞成为抗原特异性CTL,具有特异性杀伤肿瘤细胞的功能。

基于微信的分子医学自主学习平台的构建和应用

基于微信的分子医学自主学习平台以自主学习模式为框架,在教学中能引导学生由被动学习逐步向主动学习方式转换、由记忆模仿的思维方式向独立思考的学习能力迈进,对综合创新人才的培养有现实意义。文章通过对平台的设计和应用,表明其教学效果良好。

分子医学实验教学体系数字化资源平台的建设与应用

以分子医学实验教学体系为主体创建分子医学技能学习型网络课程,进行课程网页、网络教学课件、实验技能录像、在线自测题库、网络教学资源库、实验室仪器设备网络管理系统等的建设,打造学科数字化实验教学资源平台。并将教学信息和参考资源有机地融入到教师和学生的教与学的整个过程中,形成全方位、立体化的新型实验教学体系。

人端粒酶hTERT可诱导RNAi系统的建立及其对TREx-HeLa细胞生长的影响

目的:建立可诱导性沉默hTERT的RNA干扰系统,并初步探讨端粒酶与细胞增殖调控之间的关系。方法:构建沉默端粒酶催化亚基hTERT的Tet-on可诱导性RNAi载体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA,并稳定转染表达TR的TREx-HeLa细胞,用半定量RT-PCR检测hTERT的转录后水平,TRAP法检测端粒酶活性。MTT法检测细胞的增殖,流式细胞仪和Hoechst33342染色法观察细胞凋亡。结果:构建了可诱导性沉默端粒酶催化亚基hTERT的重组体psiRNA-hH1/TO-hTERTshRNA,并建立了可诱导性沉默hTERT的TREx-HeLa细胞株。短期内的端粒酶活性降低后TREx-HeLa细胞生长增殖有下降趋势,而其凋亡情况则未见明显变化。结论:本研究建立了可诱导沉默hTERT的RNAi系统,为研究端粒酶活性与细胞增殖和衰老的关系提供了实验基础。