猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。

人白细胞介素23 p19亚基基因的克隆和序列分析

目的:克隆人白细胞介素-23(IL-23)p19亚基基因。方法:分离健康成年人外周血单个核细胞,常规培养后用脂多糖至终浓度为100 ng/m l刺激增殖12 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增人IL-23 p19 cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,PCR鉴定后进行序列测定。结果:RT-PCR产物电泳结果显示所扩增的基因为734 bp,基因测序显示其序列与GenBank报道的人IL-23 p19基因序列完全一致。结论:成功地克隆了人IL-23 p19 cDNA编码基因。

分析2型糖尿病患者的肾糖阈及相关因素

目的探究2型糖尿病患者的肾糖阈(RTG)及相关因素。方法本院对2014年12月-2018年9月466例2型糖尿病患者为研究对象,正常肾糖阀值为8.9~10 mmol/L,据此将患者分为高阀值组、中等阀值组以及低阀值组,不同组肾糖范围分别为RTG>10 mmol/L、8.9 mmol/L≤RTG≤10 mmol/L、RTG<8.9 mmol/L,以此对各组生化特征进行分析。结果高阀值组与中等阀值组相比,RTG值、年龄、病程、空腹血糖(FPG)、体质量指数(BMI)、总胆固醇(TC)、血糖均值(MBG)、24 h血糖对比差异明显,P<0.05。高阀值组与低阀值组相比,RTG值、性别、FPG、BMI、TC、MBG、糖化血红蛋白(HbA1C)对比有差异,P<0.05。性别、年龄、BMI、HbA1C、TC以及低密度酶蛋白胆固醇(LDL-C)与2型糖尿病相关,且呈正比关系,P<0.05;通过多元线性回归分析发现,2型糖尿病的影响因素主要有BMI、HbA1C、LDL-C,数据具有统计学意义,P<0.05。结论较多2型糖尿病患者肾糖阀值较高,且肾糖阀值与HbA1C、LDL-C相关。

猪囊尾蚴特异性抗原cC1重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定

目的构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA,用xho I和BamH I双酶切,用Klenow酶补平xho I酶切末端,同时提取pMV261穿梭质粒载体,用Hind III和BamH I双酶切,用Klenow酶补平Hind III酶切末端,纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接,构建pMV261-cC1穿梭质粒,测序验证正确后,将pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌,构建重组耻垢分枝杆菌,经热诱导后,以猪囊尾蚴病患者血清为一抗进行Western-blotting鉴定。此外,比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果构建的重组穿梭载体经酶切、测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后,SDS-PAGE电泳分析显示,在40 kDa处有外源性蛋白表达,与预期值相符。Western-blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别,表明cC1抗原基因在耻垢分枝杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论成功构建了表达猪囊尾蚴特异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。