H_2O_2对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv通道的作用

目的:观察H2O2在常氧时对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的Kv的影响,探讨H2O2对肺动脉平滑肌细胞的Kv通道的作用。方法:用酶解法急性分离单个PASMCs,以全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压依赖性钾通道(voltage-gated potassium channel,Kv)电流。结果:常氧下H2O2可显著增加Kv电流,电流-电压关系曲线左上移;而且Kv电流呈浓度依赖性增加。结论:常氧下H2O2可使Kv通道开放。

电针“人中”穴的抗过敏性休克作用及与脑内神经降压肽含量的关系

目的 观察电针“人中”穴的抗过敏性休克作用及与脑内神经降压肽含量的关系，探讨电针“人中”穴的抗过敏性休克作用机制。方法 选用76只成年健康豚鼠，制成过敏性休克模型，以平均动脉压（MAP）为指标，观察同强度（电压3V）不同频率（4～16、30～40、80～100Hz）电针“人中”穴对过敏性休克低血压反应的影响，并用放射免疫法测定各脑区内神经降压肽（neurotensin，NT）的含量。结果 ①不同频率分别电针“人中”穴的升压效应均显著高于各自的非穴位电针对照组（P〈0.05，P〈0.01）；不同频率分别电针“人中”穴的三组之间以及非穴位电针三组之间MAP的变化差异无统计学意义。②正常组与过敏性休克组下丘脑、延髓、腺垂体、神经垂体中NT含量的变化差异均无统计学意义，而过敏性休克加不同频率电针“人中”穴各组的下丘脑、延髓、腺垂体、神经垂体中NT的含量均显著高于单纯休克组（P〈0．05，P〈0.01）。过敏性休克加不同频率电针“人中”穴三组间各脑区内NT含量的变化差异均无统计学意义。结论 ①电针“人中”穴对过敏性休克时的低血压反应确有迅速而良好的改善作用。②NT可能参与电针“人中”穴的抗过敏性休克作用。

大鼠肺动脉平滑肌细胞的分离及电压门控性钾电流的记录方法

目的介绍一种大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的急性分离方法并观察电压门控性钾电流电生理特性。方法应用胶原酶和木瓜蛋白酶联合消化法获得大鼠PASMCs,利用全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压门控性钾通道(Kv)电流。结果在相差显微镜下观察大鼠PASMCs呈舒展梭形,边界清晰,有完整的细胞膜,胞浆均匀,数量多,活性好。结论用酶急性分离的大鼠PASMCs,容易进行全细胞膜片钳记录,方法简单、稳定、可靠。

粉防己碱对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾通道的影响

应用膜片钳全细胞记录技术研究了粉防己碱（ｔｅｔｒａｄｒｉｎｅ，Ｔｅｔ）对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流（Ｉｋ）的影响。结果发现：（１）Ｔｅｔ１０－６ｍｏｌ／Ｌ对心室肌细胞Ｉｋ的外向部分有显著的激活作用。（２）Ｔｅｔ对Ｉｋ外向部分的激活作用呈剂量依赖性。阈浓度为３×１０－８ｍｏｌ／Ｌ，最大有效浓度为３×１０－５ｍｏｌ／Ｌ。（３）Ｔｅｔ使心室肌细胞Ｉｋ的外向部分呈时间依赖性增加。结果提示：Ｔｅｔ对Ｉｋ的外向部分有激活作用，这种激活作用可能是其降低心肌收缩力、抗高血压和抗心律失常的作用机制之一。

小鼠胚胎心肌细胞的分离及电生理特性

本文旨在探索小鼠胚胎心肌细胞的分离方法并观察其电生理特性。应用胶原酶B 消化法获得不同时期单个小鼠胚胎心肌细胞; 利用全细胞膜片钳技术, 记录胚胎心肌细胞的超极化激活的非选择性内向阳离子电流(If)和L-钙电流( ICa-L), 并用电流钳记录其自发性动作电位。胚胎心肌细胞通过相差显微镜依据其形态和自发性收缩进行鉴定。本法分离所获得的胚胎心肌细胞容易进行全细胞膜片钳记录, 可用于记录If、ICa-L电流和自发性动作电位, 已证实胚胎心肌细胞If 和ICa-L的电生理特性与成年起搏细胞或心肌细胞相似。本实验建立的分离方法简单、稳定、有效、可靠, 最早可获得 8.5 d 的胚胎心肌细胞。胚胎心肌细胞的电生理记录为探索胚胎心肌细胞的电生理特性提供了一个可用的模型, 并可能为某些心脏疾病产生的机制提供实验依据。

生理学实验教学探讨

阐述生理学实验课课前准备、课堂教学、课后总结等各个教学环节的内容和要求,说明生理实验教学方法的重要性;探讨如何在实验教学中培养学生的创新能力,开展自行设计实验,培养科研动手能力,激发学生的学习兴趣,以提高生理学实验课的教学质量和效果。

高校改革对实验技术人员自身素质的要求

高校实验技术人员是教学、科研队伍的一个重要组成部分.为适应高校改革,需重视实验技术队伍的建设,提高实验技术人员的自身素质,调动实验技术人员的工作积极性,使他们应具有较好专业技术知识、专业技能并有一定的管理能力,这是提高实验教学质量及完成科研任务的关键.

小鼠胚胎心肌细胞的I_f和I_(Ca-L)电流表达的发育依赖性变化

目的 :研究不同时期胚胎心肌细胞超极化激活的电流 (hyperpo larization activatedcurrent,If)和L 型钙电流 (L typecalciumcurrent,ICa L)表达的发育依赖性变化。方法 :运用全细胞膜片钳技术 ,记录不同发育阶段胚胎心肌细胞的If 和ICa L。结果 :If 通道在早期(EDS)、中期 (IDS)、晚期 (LDS)胚胎心室肌细胞上的功能性表达水平分别为 85 .70 %、71.60 %、44 .40 % ;其电流密度分别是 -7.2 4±1.2 8pApF- 1 、-6.48± 0 .99pApF- 1 、-3 .76± 1.0 4pApF- 1 (P均<0 .0 1)。If 通道在中、晚期胚胎心房肌细胞上的功能性表达水平分别为 77%、48.3 0 % (P <0 .0 1) ;其电流密度分别是 -8.86± 2 .3 4pApF- 1 与 -4 .62± 1.0 6pApF- 1 (P <0 .0 1)。早、中、晚期胚胎心肌细胞的ICa L的功能表达变化不明显 (P >0 .0 5 )。结论 :胚胎心肌细胞的If的功能表达呈发育依赖性下降 ,ICa

肾上腺髓质素对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的调制(英文)

应用全细胞膜片钳技术研究了肾上腺髓质素 (ADM )对豚鼠心室肌细胞L 型钙电流 (ICa ,L)的影响及其信号传导机制。结果发现 :ADM ( 1～ 10 0nmol/L)浓度依赖性抑制ICa,L(P <0 0 5 ) ,并可被ADM特异受体阻断剂ADM2 2 52 ( 10 0nmol/L)完全阻断。用蛋白激酶A特异拮抗剂H 89( 10 μmol/L)预处理 ,对ADM抑制ICa ,L的作用无影响。但用蛋白激酶C (PKC)特异性拮抗剂PKC19 36 预处理 ,可完全阻断ADM的抑制效应 ;而PKC特异性激动剂PMA则可以模仿ADM的抑制效应 (P <0 0 5 )。上述结果提示 :ADM作用于特异性ADM受体可浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞ICa ,L,而此作用可能是PKC介导的。

β-淀粉肽-(1-40)对电压依赖性钙电流的作用及铝和银杏内酯B对该作用的影响

目的 探讨不同时期配制的 β 淀粉肽 (1 4 0 ) (Aβ1 40 )对大鼠海马CA1区锥体神经元高电压依赖性钙通道电流 (IHVA)的作用并观察铝和银杏内酯B (GB)对该作用的影响。方法 应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元IHVA电流 ,并观察药物对其的作用。结果 (1)细胞外给予老化处理的Aβ1 40 可以增强IHVA幅度 ,Aβ1 40 的作用具有不可逆性和浓度依赖性 ;新鲜配制的Aβ1 40 对IHVA几乎没有影响。 (2 )Aβ1 40 增强IHVA的作用可以被L 型钙通道阻断剂nifedipine抵消。 (3)PKA的抑制剂H 89可以抵消Aβ1 40 对IHVA的增强作用。 (4)Aβ1 40 增加IHVA的作用可被 1 0mmol/L的AlCl3 进一步增加。 (5 )细胞外给予GB对正常的IHVA没有影响 ,但可抵消Aβ1 40 对IHVA的增强作用。结论 β 淀粉肽(Aβ)通过增强IHVA可引起胞内钙超载 ,这可能是其产生神经毒性作用的机制之一 ,铝可以加强Aβ的毒性作用 ;GB可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用。

Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1钾通道在缺氧性肺血管收缩中的作用

目的和方法雄性Wistar大鼠随机分为两组常氧对照组和低氧组。用酶消化的方法获得单个大鼠肺内动脉平滑肌细胞(PASMC)。采用全细胞膜片钳技术,记录PASMC静息膜电位(Em)和电压门控性钾通道电流(IKv),通过细胞内灌流Kv12/Kv15/Kv21抗体混合液(1∶125),探讨Kv12、Kv15、Kv21钾通道在缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用。结果①低氧组膜电位明显去极化,由(-518±08)mV去极到(-472±07)mV,P<001,IKv与常氧组相比显著降低,在测试电压-30mV时,IKv由(616±058)pA/pF降为(331±037)pA/pF(P<001)。②细胞内灌流Kv12/Kv15/Kv21抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC的IKv,使Em去极化,然而细胞内灌流Kir21/Kir23/Kir41(1∶125)抗体混合液对常氧对照组PASMC的IKv和Em无显著影响。③细胞内灌流Kv12/Kv15/Kv21抗体混合液和Kir21/Kir23/Kir41抗体混合液对低氧组PASMC的IKv和Em均无显著影响。结论Kv12、Kv15、Kv21可能是氧敏感型通道,并介导了低氧性肺血管收缩。

慢性间歇性低氧降低急性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞膜上电压门控性钾通道的抑制

为了从离子通道水平上探讨机体低氧适应的离子机制,本实验将雄性 SD 大鼠随机分为常氧对照组和慢性间歇性低氧组[氧浓度(10 ± 0.5) %, 间断缺氧每天 8 h]。用酶解法急性分离单个大鼠肺内动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smoothmuscle cells, PASMCs),以全细胞膜片钳技术记录 PASMCs 膜上的电压门控性钾通道 (voltage-gated potassium channel, KV) 电流,观察急性缺氧对慢性间歇性低氧大鼠 PASMCs 的 KV 的影响, 为机体适应低氧能力提供实验依据。结果显示:⑴常氧对照组在电流钳下,急性缺氧可使膜电位明显去极化(由-47.2 ±2.6 mV 去极到 -26.7 ±1.2 mV ); 在电压钳下, 急性缺氧可显著抑制 KV电流(+60 mV 时, KV电流密度从 153.4 ± 9.5 pA/pF降到 70.1 ± 10.6 pA/pF), 峰电流的抑制率为(57.6 ± 3.3) %, 电流-电压关系曲线向右下移。⑵慢性间歇性低氧组KV电流密度随低氧时间延长而逐渐减少(慢性低氧10 d后就有显著性意义),电流- 电压关系曲线逐渐右下移。⑶急性缺氧对慢性间歇性低氧大鼠PASMCs KV电流的抑制作用随慢性间歇性低氧时间延长而逐渐减弱。上述观察结果提示慢性间歇性低氧减弱急性缺氧对 KV 的抑制, 这可能是机体低氧适应的一种重要机制。

COS-7细胞上转染的人类三型酸敏感离子通道的生理学和药理学特性

目的研究人类三型酸敏感离子通道(hASIC3)的生理学和药理学特性。方法应用全细胞电压钳技术检测转染在COS-7细胞上的hASIC3通道的生理学和药理学特性。结果hASIC3通道能通过迅速降低胞外pH值而被激活,并在酸性环境中迅速脱敏。脱敏后的hASIC3通道恢复到50%备用状态时所需的时间为(618±21)ms。胞外pH值在(6.40±0.05)时可使50%的hASIC3通道激活。pH值低于8时hASIC3通道的利用率降低,在生理状态pH值条件下,通道利用率降低了大约50%。阿米洛利能特异性阻断快速激活快速失活hASIC3通道且半数抑制浓度为(12.5±3.0)μmol/L。hASIC3通道的电流电压(I-V)关系曲线在很宽广的电压范围内呈线性关系(-80^+80 mV),翻转电位为(+43±5)mV。结论hASIC3通道作为一种酸感受器,可能对感受人体pH值的变化起很重要的作用。

血小板活化因子对豚鼠心室肌细胞动作电位和钾通道的影响(英文)

应用全细胞膜片钳技术研究了皿小板活化因子(platelet activating factor,PAF)对豚鼠心室肌细胞动作电位和钾电流的影响。结果发现,当电极内液ATP浓度为5mmol/L(模拟正常条件)时,1μmol/L PAF使APD_(90)由对照的225.8±23.3ms延长至352.8±29.8ms(n=5,P<0.05);使I_K尾电流在指令电压+30mV由对照的173.5±16.7pA降至152.1±11.5pA(P<0.05,n=4);使I_(K1)在指令电压为-120mV时由对照组的-6.1±1.3nA降至-5.6±1.1nA(P<0.05,n=5);但PAF在生理膜电位范围(-90mV～+20mV)对I_(K1)没有影啊。当电极内液ATP浓度为0mmol/L时,I_(K-ATP)开放(模拟缺血条件),1μmol/L PAF却显著缩短APD_(90),由对照的153±24.6ms缩短至88.2±19.4ms(n=5,P<0.01)。而用1μmol/L格列本脲(I_(K-ATP)的特异阻断剂)预处理后,恢复了PAF可显著延长动作电位时程的作用。结果提示,PAF可能扩大缺血心肌和正常心肌细胞动作电位时程的不均一性。

不同信号分子参与M胆碱能受体激动剂对不同胚胎发育阶段小鼠心肌细胞起搏电流的调控(英文)

应用全细胞膜片钳技术,研究了M胆碱能对不同孕期的胚胎小鼠心肌细胞的起搏电流(If)的调节。我们发现,在胚胎发育的早期阶段,M胆碱能受体激动剂(muscarinicagonistcarbachol,CCh)明显抑制If,但在胚胎发育的晚期阶段,CCh对If的抑制作用消失。腺苷酸环化酶(adeinylatecyclase,AC)激动剂毛喉素Forskolin和非选择性磷酸二酯酶(PDE)抑制剂IBMX均可增强发育早期阶段和晚期阶段的If。但有趣的是,尽管Forskolin和IBMX可增加基础If,它们对CCh抑制的If的作用却大不相同。在胚胎发育的早期阶段,Forskolin不能拮抗CCh对If的抑制作用,但IBMX可以。在发育的中期阶段Forskolin可以拮抗CCh的抑制作用,但IBMX不可以。因此,我们推断,CCh可能是通过调控细胞内的CAMP水平来调节If的。但是在胚胎发育的早期阶段和中期阶段,CCh可能通过不同的信号转导通路来实现对胞内cAMP的水平调控。在发育的早期阶段,CCh主要是通过增强PDE的活性,加速cAMP的降解而实现对If的调控。而在发育的中期阶段,CCh则主要通过与AC耦联,抑制其活性,通过减慢cAMP的合成而实现对If的调控。

硝苯啶对高血压大鼠组织中血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素含量的影响

给12周龄的自发性高血压大鼠（SHR）口服硝苯啶0.5～0.6mg／d10周。22周龄时,血压明显低于未服药组，同时下丘脑、延脑、主动脉和左心室中的血管紧张素Ⅱ（AⅡ）、去甲肾上腺素（NE）的含量亦明显减少（P＜0.01）。提示硝苯啶的降压作用，除了直接扩张血管外，亦降低中枢和外周组织中AⅡ和NE的含量，这可能是销苯啶降压机制中的一个组成部分。

自然呼吸条件下α-受体阻断剂对猪缺血性心律失常的影响

目的 研究在自然呼吸条件下α -肾上腺素受体阻断剂对猪的心肌缺血性心律失常的作用。方法 把猪开胸暴露心脏 ,但不损伤胸膜腔 ,仍维持自然呼吸。结果 α-受体阻断剂育亨宾 (yohimbin)可显著增加室性早搏的次数 (P <0 .0 1) ,但对室性纤颤出现的百分率无影响。然而非特异性α -受体阻断剂酚妥拉明显著地减少室性早搏的次数 (P <0 .0 1) ,但它不影响室性纤颤与室性心动过速出现的频率。结论 α-肾上腺素能机制对猪的心肌缺血性心律失常的发生不起重要作用。

纳洛酮对大鼠伏核注入加压素增强电针镇痛作用的影响

以辐射热甩尾法的甩尾潜伏期作为痛阈，观察纳洛酮（ＮＡＬ）对伏核注入精氨酸加压素（ＡＶＰ）能提高痛阈及增强电针镇痛作用的影响。结果：伏核内微量注入ＡＶＰ（０．０１５Ｕ），大鼠痛阈提高，针刺镇痛效应明显增强。伏核预先注入ＮＡＬ（０．８μｇ），明显削弱ＡＶＰ的镇痛和增强电针镇痛作用。１、２、３Ｖ电针的平均针效与对照组比较减弱了３７％（Ｐ＜０．０１），电针后效由４０ｍｉｎ缩短为２０ｍｉｎ。结果表明，ＡＶＰ参与痛觉调节过程，并在电针镇痛过程中发挥一定的作用。这种作用部分是由内源性阿片肽系统中介的。

侧脑室内注射维拉帕米对家兔心血管活动的影响

采用侧脑室内注射药物方法，观察阻断中枢钙通道后，对正常心血管活动及对几种神经肽的中枢性升压作用的影响。结果：兔侧脑室内注射钙通道阻断剂维拉帕米（１００μｇ）引起平均动脉血压（ＭＡＰ）降低（０．９３±０．０３）ｋＰａ。侧脑室内分别注射血管紧张素Ⅱ（ＡＧＴ－Ⅱ，７．５μｇ）、促甲状腺素释放激素（ＴＲＨ，５μｇ）和蛙皮素（ＢＢＳ，５μｇ）引起ＭＡＰ升高（１．８５～２．０３ｋＰａ）。预先侧脑室内注射不引起血压变化剂量的维拉帕米（７５μｇ）可抑制ＡＧＴ－Ⅱ、ＴＲＨ和ＢＢＳ的升压效应。结果提示，家兔动脉血压的正常调节活动以及ＡＧＴ－Ⅱ、ＴＲＨ和ＢＢＳ的中枢升压作用均与脑内Ｃａ（２＋）的跨膜内流有关。

钠钙交换在心脏发育早期自主膜电活动发生中的作用(英文)

钠钙交换是小鼠心脏发育中最早有功能性表达的通道基因。它的功能主要是通过泵出1个钙,泵入3个钠位置细胞内的钙稳态,此外可能参与兴奋收缩偶联。但是,至今钠钙交换在心脏发育过程中的功能性表达及其在细胞早期兴奋形成中的作用还不是很清楚。采用胚胎干细胞分化的心肌细胞为研究对象,发现在发育极早期,电压钳制在35mV的条件下,10mmol/L咖啡因诱导的内向电流的80%能被灌流液中Na+被等浓度的Li+取代(n=8)。此为钠钙交换电流。所有钳制的细胞单细胞RT-PCR都检测到了NCX1亚型的mRNA表达。进一步研究了钠钙交换的功能,发现等浓度Li+取代灌流液中Na+及应用高浓度Ni2+阻断了膜电位震荡及与震荡相间的动作电位(早期膜兴奋形式)。因此认为钠钙交换(NCX1亚型)在心脏发育极早期的心肌细胞中已有大量功能性表达,它对于早期自主性兴奋活动的发生起着关键性的作用。