口蹄疫病毒非结构蛋白3D原核表达、纯化和反应原性分析

采用RT-PCR技术扩增获得口蹄疫病毒(FMDV)细胞毒O/Akesu/58的非结构蛋白3D(NSP 3D)基因编码区,并定向克隆到pProexHTb原核表达载体上,再将重组pProex-3D转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达产物用亲和层析法纯化,经SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析抗原性;以纯化的表达蛋白免疫豚鼠制备其多克隆抗体,ELISA测定抗体效价,间接免疫荧光法检测制备的豚鼠抗NSP 3D多克隆抗体与细胞毒天然抗原的反应原性.结果表明:表达的目的蛋白大小为53ku左右;ELISA结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶1 024以上;Western-blot分析表明,纯化后的蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应;间接免疫荧光检测发现,豚鼠抗3D蛋白多克隆抗体可与细胞毒天然抗原反应,与阴性对照未见反应.

转基因克隆动物的发展及其应用

转基因克隆动物是在获得转基因细胞系的基础上进行克隆,生产具有特定性状、特别功能或者一定目的的克隆动物群,是转基因动物技术与克隆动物技术的有机结合。论文针对转基因克隆动物的发展,及其在异种器官移植、抗病育种和乳腺生物反应器方面的应用,存在的问题与安全性评价等方面做了较系统的阐述,并预测了转基因克隆动物应用的发展前景及其给社会带来的深远影响。

靶向FMDV受体猪源整联蛋白α_V亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA筛选

筛选靶向FMDV受体猪源整联蛋白αV亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA。根据猪源αV mRNA序列,设计并合成siRNA,Lipofectamine 2000转染siRNA于PK-15细胞,利用qRT-PCR检测RNAi组(iαV-480、iαV-1719和iαV-2077)、空白组(Mock)和阴性对照组(Control)中αVmRNA表达情况;在转染siRNA12h后通过接种100TCID50,收集病毒液,测定TCID50,确定其抗病性变化。结果显示,瞬间转染PK-15后,与阴性对照组和空白组相比,3个RNAi组均不同程度抑制αV亚基基因表达,在24hiαV-480组在mRNA水平抑制90.1%,作用最明显。TCID50测定表明iαV-480组有较低的病毒滴度,说明其抗病性增加。针对猪源整联蛋白αV亚基基因的最佳siRNA的筛选成功,为深入研究干扰FMDV受体抗FMDV转基因路线奠定了基础。

细胞核内RNA干扰途径研究进展

RNA干扰(RNAi)是双链RNA分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达的过程。RNAi的分子机制及功能仍然有待深入研究与阐明,但已经在基因组结构与功能研究中得到广泛运用。我们简要综述RNAi的作用机制,及已发现的细胞核内干扰途径——RNA指导的DNA甲基化、异染色质、DNA切除和减数分裂性沉默等相关研究进展。

甘肃裕固族人群21个非CODIS STR基因座遗传多态性

采用AGCU 21＋1 PCR扩增试剂盒,对180例甘肃省裕固族无关个体进行21个常染色STR基因座的遗传多态性调查,获取该人群在21个STR基因座的等位基因相关数据,为该地区的法医学应用提供基础数据。1材料与方法180例甘肃省肃南裕固族自治县境内裕固族健康无关个体抗凝血样,其中男性134例,女性46例。

甘肃裕固族人群21个STR基因座的遗传多态性

短串联重复序列（STR）在人类基因组中分布广泛、多态性高、可复合扩增,已被广泛应用于亲权鉴定、个人识别以及种族识别。由于同一STR遗传标记在不同人群中的多态性分布存在差异,因此,应用于法医学鉴定前,必须通过群体调查获得该群体的基本遗传学参数[1]。本研究对甘肃省肃南裕固族自治县裕固族无关个体的血样进行21个STR基因座的复合扩增,获得该群体21个STR基因座的遗传多态信息,

实时荧光定量PCR筛选牛源整联蛋白αv基因的siRNA片段

设计并合成三条针对牛口蹄疫病毒(FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因的特异性干扰小RNA(SiRNA)片段,将其转染至本身表达整联蛋白受体αv亚基基因的MDBK细胞。分别在转染后36 h和48 h收集细胞,提取细胞总RNA并反转录为cDNA。应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR的方法检测3个siRNA片段的干扰效果,筛选出对整联蛋白αv基因具有高效干扰效果的小RNA片段。为建立抗口蹄疫病毒牛新品种培育的RNA干扰转基因技术平台奠定了基础。

数据库比中多个疑父的亲权鉴定1例

2010年，在兰州市某地发现一具高度腐败的无名男尸，尸检时发现死者随身携带一串钥匙。初步调查该死者的一些情况符合失踪人员Z，其中死者随身携带的钥匙可以打开失踪人员Z家的门锁。办案单位要求通过亲权鉴定进行死者身份的认定。提取该死者肋软骨，采集失踪人员Z的配偶及儿子血样备检。

不同前处理方法提取牙齿DNA的比较

目的对三种不同前处理方法提取的牙齿DNA浓度进行比较,建立一种操作简便、经济适用、浓度较高的牙齿DNA提取的前处理方法。方法选择源自7具尸体的共21颗磨牙,每具尸体的3颗磨牙随机按牙屑法、球磨法、液氮研磨法进行前处理,并分别称取50 mg,采用Auto Mate Express^(TM)法医DNA提取系统提取DNA,对三种方法提取的DNA浓度和STR分型结果进行比较。结果牙屑法、球磨法和液氮研磨法提取的DNA质量浓度分别为0.055 6~1.989 1、0.036 6~1.175 6和0.037 8~1.249 0 ng/μL,牙屑法提取的DNA质量浓度较高(P<0.05),且STR分型成功率高。结论牙屑法结合Auto Mate Express^(TM)法医DNA提取系统是提取牙齿DNA的一种切实可行的方法,可应用于法医学鉴定实践中。

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的建立提取接触性生物检材DNA的新方法。方法用PrepFiler Express^(TM)法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50μL,用IdentifilerPlus复合扩增,并对检验结果分析比较。结果对于接触性生物检材,采用PrepFilerExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用。结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验。

甘肃东乡族男性24个Y-STR基因座遗传多态性(英文)

目的检测24个Y-STR基因座单倍型的遗传多态性,探讨其法医物证学应用价值。方法应用AGCU Y24试剂盒和3130xl型遗传分析仪对154例甘肃东乡族男性无关个体的24个Y-STR基因座(DYS391、DYS389Ⅰ、DYS439、DYS389Ⅱ、DYS438、DYS643、DYS456、DYS458、DYS437、DYS635、DYS448、DYS527a/b、Y-GATA-H4、DYS447、DYS19、DYS392、DYS522、DYS393、DYS388、DYS390、DYS385a/b、DYS444)进行检测,获得其基因型分布情况。结果 154例样本中共检出153种单倍型,单倍型多样性为0.991 5和个体识别率为0.994 0。结论 24个Y-STR复合扩增体系具有较高单倍型遗传多态性和个体识别率。

基于27重SNP种族推断体系的东乡族群体遗传结构研究

目的对198名甘肃和69名新疆的东乡族个体进行基于27重SNP种族推断体系的多态性研究并分析东乡族的群体遗传结构。方法使用SNaPshot试剂盒分析东乡族27个SNP的基因型、等位基因频率等遗传学参数,再以Structure2.3.4软件对所涉个体及群体的祖先成分进行溯源,以所得结果作主成分分析并建立系统发生树。结果除4名甘肃东乡族个体的东亚成分不足50%外,其余263名个体均以东亚成分为主,其次是欧洲成分,非洲成分占比最少。系统发生树显示,东乡族和其他东亚人群确实共列为一支,虽其又独立成支;不同人群遗传关系的主成分分析也支持上述所得结论。结论将东乡族人群归类于东亚人群,与之前语言学、历史学、生物学方面的证据是相契合的,但少量个体欧洲成分占比较高的原因仍有待进一步分析。总之,使用27重SNP种族推断体系对东乡族人群进行祖先信息推断是可行和可靠的。

扼颈杀人案DNA检验1例

1案例1.1简要案情2019年某日,一名无业女性在某小旅馆房间内死亡。经法医尸体检验发现该女性颈部有扼痕,生活反应明显,初步判断为扼颈致机械性窒息死亡。在颈部两侧扼痕处擦拭提取生物检材以备DNA检验。

藏汉人群EPAS1、EGLN1基因特异SNP位点遗传多态性

目的对青海、甘肃境内518名藏族无关个体和平原地区134名汉族无关个体EPAS1和EGLN1基因的10个SNP位点做遗传多态性分析。方法使用SNa Pshot?多重分析试剂盒分析藏汉人群rs12907901、rs13419896、rs150877473、rs1562453、rs186996510、rs2491406、rs2491407、rs4953360、rs4953361、rs7589621共10个SNP位点的基因型、等位基因频率等遗传学参数。结果根据基因型频率分析,汉族群体上述位点所有基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡,藏族人群rs150877473、rs1562453、rs186996510、rs7589621共4个位点不符合Hardy-Weinberg平衡(p<0.05),同时两组人群rs13419896、rs1562453、rs186996510、rs7589621、rs4953360共5个位点存在显著差异;根据等位基因频率分析,藏汉人群在rs150877473、rs1562453、rs186996510、rs7589621共4个位点存在显著差异。结论本研究验证了EPAS1、EGLN1基因在藏汉群体间的差异性,为SNP分子遗传标记应用于刑事科学实践提供了理论支持。

兰州汉族等26个群体Y-STR基因座遗传的关系

目的探讨兰州汉族等26个人群Y-STR基因座遗传关系。方法研究得到500名无关兰州汉族个体的Y-STR基因座基因频率,同时收集其他25个人群相同Y-STR基因座基因频率,应用亲缘系数比较分析这26个人群间的遗传距离并绘制系统树。结果汉族人群中以北京汉族、山西汉族、内蒙古汉族和与兰州汉族的遗传关系最接近;少数民族人群中以内蒙古蒙古族与兰州汉族的遗传关系最接近;马来西亚马来人和马来西亚印度人与其他人群遗传关系最远而单独列支。结论利用Y-STR基因座的等位基因频率研究不同人群之间的遗传距离,结果与其他分子人类学结论接近或吻合,表明不同人群之间的遗传关系与地域、起源和进化的关系密切。

人骨骼及牙齿DNA提取方法的比较和优化

目的人骨骼和牙齿DNA提取方法的比较和优化。方法收集18份不同个体的长骨、30颗磨牙和同一个体2根股骨、8颗磨牙。利用TissueLyser-Ⅱ组织破碎仪和PreFiler Express BTA?法医DNA提取试剂盒(BTA法),应用Automate Express?自动化法医DNA提取系统提取DNA,进行STR分型,与脱钙法进行比较,并进行实验条件优化。结果用TissueLyser-Ⅱ结合BTA法,约2.5h即可完成骨骼和牙齿的DNA提取,分型成功率分别为94.4%和96.7%。与脱钙法比较,两种方法获得DNA质量浓度和检出率比较接近(P<0.05),但BTA法在操作过程方面更具优势。最佳样本量为100mg,消化时间为2h。结论采用TissueLyser-Ⅱ组织破碎仪结合BTA法对骨骼和牙齿进行DNA提取和分型检验,能满足实际检案的要求,可在法医学实践中选择使用。

瓜子壳上人体脱落细胞DNA检验

1案例资料1.1简要案情2012年12月13日,某镇一村民家被盗,经调查和现场勘验确认遗留在现场的大板瓜子壳为嫌疑人所留,提取该检材要求进行DNA检验。1.2 DNA检验送检瓜子壳多呈两瓣前端张开状态,分析应为进食者以手卡住大板瓜子用门牙所嗑。挑选状态基本一致的瓜子壳数个,剪取尖端,加入5%Chelex-100 120μL及蛋白酶K（20mg/m L）10μL;振荡后56℃孵育1h,

基于EMPOP数据库线粒体全序列视角下的遗传特征点分析

目的在线粒体全序列视角下,统计梳理包括中国汉族在内的不同人群遗传特征点(以下简称特征点)的分布规律,以支撑线粒体全序列测序的法医学应用。方法收集EMPOP数据库中已公开发表的线粒体全序列数据,对4个国家的不同人群(n=1 665)和2个地区的中国汉族人群(n=301)所含有的特征点和点异质性进行统计分析,并比较不同个体之间的数据差异。结果在4个国家的不同人群(n=1 665)中,线粒体全序列特征点数量为非编码控制区(non-coding control region,CR)特征点数量的3.58倍,线粒体全序列点异质性在人群中的发生率为19.88%;在2个地区的中国汉族人群(n=301)中,线粒体全序列特征点数量为CR特征点数量的3.72倍,线粒体全序列点异质性在人群中的发生率为17.28%,不同个体间线粒体全序列的特征点差异平均值为38.16±10.58,CR的特征点差异平均值为11.70±3.63。结论线粒体全序列测序能显著增加特征点和点异质性的检测数量,提供更加丰富的基因信息。本文的研究结果可为基于二代测序(next generation sequencing,NGS)的法庭科学线粒体DNA全序列鉴定标准或办案方法的制定、母系家族排查的实战应用等提供参考。

骨松质的DNA提取方法应用

骨骼的STR检验作为尸骸个体识别的有效手段,在法庭科学中应用广泛。在工作中,经常遇到案件中只剩残肢的尸骸,无法辨认,给案件的定性带来很大难度。尸源的快速个体识别对案件定性至关重要,目前此类案件检验一般进行骨密质的DNA检验,但具有相对检验难度大、操作复杂等特点。

血样Identifiler~ Plus Kit直接扩增法在DNA数据库建设中的研究与应用

目的探讨Identifiler Plus Kit直接扩增血样的方法,并应用于DNA数据库建设。方法 60份血样分别打孔于8连管中,用56℃ddH2O分别孵育0min、5min、10min、15min,离心弃上清,相应加入Identifiler Plus Kit与Identifiler Direct Kit PCR反应液,电泳并比较检测结果;同一血样按上述方法重复3次,比较检测结果的可重复性;对10000余份血样直接扩增并统计分析其成功率。结果 0min与5min ddH2O孵育的血样Identifiler Plus Kit与Identifiler Direct Kit扩增想比较,分析峰值均衡性及RFU其效果相当;同一份血样检测结果表明具有良好的重复性;对10000余份血样检测完整的遗传图谱成功率98.5%。结论 Identifiler Plus Kit可用于大规模的DNA数据库建设。