肺炎链球菌蛋白质疫苗研究进展

随着肺炎链球菌(SP)耐药菌株的不断出现使得疫苗研发备受关注,但目前使用的荚膜多糖及其结合疫苗有很大局限性。因此,针对SP主要毒力因子的蛋白质疫苗迅速发展,其中SP单一蛋白质疫苗包括溶血素、表面蛋白A、表面黏附素A、三组氨酸蛋白D、黏附毒力因子A,蛋白质联合疫苗包括多价重组蛋白质联合疫苗、多价蛋白质融合疫苗,已取得一定实验和临床效果,有望替代多糖疫苗。

肺炎链球菌SPD1587蛋白的表达纯化及晶体生长研究

SPD1587蛋白是肺炎链球菌D39菌株中的一种转录因子,其在鼻咽部定植和肺部感染过程中发挥着重要作用。生物信息学分析提示其具有与A群链球菌的转录因子Mga蛋白相似的结构,目前其三维结构尚未被解析。成功构建了SPD1587蛋白的全长表达载体PET28a-spd1587,利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行原核表达,获得了以可溶形式表达的目的蛋白。经Ni-NTA柱亲和层析及DEAE阴离子交换层析纯化后,获得了高纯度的目的蛋白。采用悬滴气相扩散法获得了SPD1587蛋白晶体。

淋球菌OmpA蛋白的克隆表达、保守性及抗原表位分析

目的了解OmpA蛋白在不同型别淋球菌间的保守性,分析OmpA蛋白的B细胞抗原表位,并通过大肠杆菌表达系统获取其重组蛋白。方法从Genebank数据库中获取不同型别淋球菌的OmpA蛋白氨基酸序列,利用Clustal X 2.1软件对序列保守性进行分析。利用DNASTAR软件预测分析OmpA蛋白B细胞抗原表位。构建pp SUMO-omp A重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达OmpA重组蛋白,以SDS-PAGE检测表达的重组蛋白。结果 OmpA蛋白在不同型别淋球菌菌株间保守性高达99.6%,OmpA蛋白抗原表位可能位于28-37、78-86、95-102、147-154、159-165、201-208、213-218等氨基酸区段。SDS-PAGE检测大肠杆菌中表达出OmpA蛋白,主要以包涵体形式存在。结论成功构建pp SUMO-omp A重组表达载体,获得包涵体形式的OmpA蛋白,且OmpA蛋白可能是一种保守性较好的淋球菌蛋白疫苗候选分子。

肺炎链球菌SPD1672蛋白EL4功能环的原核表达及多克隆抗血清制备

目的原核表达肺炎链球菌SPD1672蛋白膜外EL4功能环,制备并鉴定其多克隆抗血清。方法生物信息学分析SPD1672蛋白结构功能区,用p Cold TF质粒构建含EL4功能环的原核表达载体,IPTG诱导蛋白质表达后行镍柱纯化。经HRV 3C蛋白酶酶切、鉴定后,免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗血清,间接ELISA鉴定效价,western blot鉴定抗血清与肺炎链球菌D39菌株天然蛋白质的亲合力。结果 EL4环可能为SPD1672蛋白酶活性中心。成功构建p Cold TF-SPD1672EL4原核表达载体,诱导表达后获得纯度大于95%的重组融合目的蛋白质。该蛋白质免疫新西兰大白兔后获得效价达到5.12×106的多克隆抗血清,此抗血清与重组的SPD1672EL4蛋白及肺炎链球菌中天然SPD1672蛋白有较好的亲合力。结论成功获得高纯度的肺炎链球菌SPD1672EL4蛋白及其特异的多克隆抗血清,为进一步对SPD1672蛋白的结构与功能研究奠定了基础。

肺炎链球菌SP2108蛋白的原核表达及免疫原性分析

目的制备纯化的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)SP2108蛋白,分析其在常见S.pn菌株中的保守性,并评价其作为S.pn候选疫苗的可行性。方法利用PCR法扩增全长SP2108基因,将其克隆至原核表达载体p Cold TF中,转化E.coli BL21(DE3)后IPTG诱导蛋白表达,经Ni-NTA树脂纯化获得高纯度的目的蛋白;将纯化蛋白免疫C57BL/6小鼠制备多克隆抗体,并用间接ELISA检测效价,Western blot鉴定该蛋白在6种常见S.pn菌株的保守性。从Genebank中找出不同S.pn菌株的SP2108蛋白质氨基酸序列,并用Clustal X 2.1软件分析其序列保守性。结果获得了可溶性形式的SP2108蛋白,该重组蛋白免疫小鼠后可获得高滴度的多克隆抗体;Western blot验证了SP2108蛋白在6株常见S.pn菌株中均有表达;SP2108蛋白在不同型别S.pn中氨基酸序列保守性为100%。结论原核表达并纯化了SP2108蛋白,该蛋白保守性高,免疫小鼠后可获得高滴度的多克隆抗体,可能是一种较好的S.pn候选蛋白疫苗。

新时代背景下临床生化检验实习带教方法的探讨

在2012年医学检验专业全面改制、国内实验室认证大力推行、检测新技术不断涌现、更严格行业标准大量出台以及自动化程度逐渐提高的新时代背景下,作为在医学检验技术中占有十分重要地位的临床生物化学检验技术,其本科阶段的教育体系和培养目标已发生巨大的变化,而临床生化检验的实习教学方法没有相应改变,不能适应新的形势。遵义医学院附属医院附属医院检验科临床生化检验室依托高素质的师资队伍和先进的实验设备,分析现有临床生化检验实习教学的存在的问题,紧密围绕临床生化检验技术相关知识,结合实习教学大纲和新时代背景下临床生化检验实习教学的要求,探索了一套临床生化检验实习教学新方法。

肺炎链球菌TCSs中WalR的克隆表达、保守性及抗原表位分析

通过构建PET28a-WalR表达载体并在大肠杆菌BL21中表达WalR重组蛋白,以评价其对C57小鼠的免疫原性;并分析其在不同血清型肺炎链球菌中的保守性和B细胞的抗原表位。以肺炎链球菌D39血清型WalR基因为模板,构建重组质粒PET28a-WalR并转入BL21诱导表达目的蛋白质。采用Clustal X 2.1软件对WalR蛋白在不同血清型S.pn中的保守性进行分析;利用DNASTAR软件对其B细胞抗原表位进行分析。结果显示,成功构建PET28a-Wal R重组表达载体,经IPTG诱导后有大量高纯度的目的蛋白质,但其主要以包涵体形式存在;Wal R蛋白在不同血清型肺炎链球菌中高达99.4%,其B细胞抗原表位可能位于9-16、35-42、95-111、113-135、150-161、200-218等氨基酸序列位点。成功获得大量以包涵体形式表达的肺炎链球菌Wal R重组蛋白,并对其保守性和抗原表位进行了系统分析。

改制后医学检验本科生考研现状及对策分析

从2012年开始,医学检验专业由临床医学二级学科转变成医学技术一级学科,学制从5年制改为4年制,并且从以往的医学学位改为了理学学位,培养目标从“医学高级专门人才”改为“应用型医学检验专门人才”,医学检验的课程设置也发生了相应的调整。所以,医学检验本科阶段的教育体系已发生巨大的变化,但是其硕士考核方式并没有发生明显改变。这导致改制后的4年制医学检验毕业生在准备考研时面临许多实际困难亟待解决。因此,从实际出发,分析考研原因,并思考改制后的医学检验技术专业学生备考中存在的问题,为教学、招生主管部门及广大医学检验专业毕业生提供参考。

以教学竞赛提升医学检验技术专业教师教学能力的探索与实践

为适应医学检验技术专业"以技术为主线"新版教材的改革,笔者所在院系结合自身实际,通过连续举办教学竞赛,并在实习基地同质化建设、评委构成的科学设置、教师教学能力帮扶等方面不断探索,逐步形成具有自身特色的讲课竞赛机制,搭建了以赛促改、以赛促教、教学相长的交流平台。该平台充分发挥了教学示范效应,并促进我院教师教学能力持续提升。

肺炎链球菌感染的相关因素及防治策略

肺炎链球菌是致命性细菌感染病原体之一,能够引起人类多种疾病,特别是儿童和老年人等免疫力低下人群。肺炎链球菌流行范围广、危险因素众多,已经给全球公共卫生造成巨大负担。肺炎链球菌的感染与宿主年龄、基础性疾病及其与病毒的协同作用等因素密切相关。针对肺炎链球菌感染的防治主要依赖于抗生素治疗和疫苗预防。当前,多种肺炎链球菌新型蛋白质联合疫苗已进入Ⅱ期临床试验,肺炎链球菌全菌体细胞抗原灭活疫苗已正式投入使用。通过了解肺炎链球菌的相关现状可为肺炎链球菌感染的防治提供新策略。

MALDI-TOF MS对临床常见真菌鉴定准确性的Meta分析

目的评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)鉴定临床常见真菌的准确性,为临床真菌感染的诊断及治疗提供依据。方法计算机检索各据库,查找MALDI-TOFMS检测真菌准确性的文献,对纳入的文献进行质量评价和数据提取,采用QUADAS-2工具对纳入文献的偏倚风险进行评价,运用Meta-Disc1.4软件进行Meta分析,比较不同菌株来源、菌种、参考方法、使用仪器各亚组的诊断效能。结果共纳入文献26篇,9708株真菌,基本涵盖了临床常见酵母菌属及丝状真菌属。Meta分析结果显示,MALDI-TOFMS鉴定真菌合并灵敏度[95%置信区间(95%CI)]为0.97(0.97~0.97),合并特异度(95%CI)为0.85(0.81~0.88),合并阳性似然比(95%CI)为5.60(4.55~6.90),合并阴性似然比(95%CI)为0.02(0.01~0.04),诊断比值比(95%CI)为282.40(149.50~533.46),汇总受试者工作特征曲线下面积为0.9078。亚组分析结果显示,MALDI-TOFMS技术对临床酵母菌属及丝状真菌属的鉴定,不受菌株来源、仪器品牌等因素影响,均具有很好的鉴定效果。结论MALDI-TOFMS对临床常见真菌鉴定的准确性高,适合在临床广泛推广应用。

全自动生化分析仪在临床生物化学检验实验教学中的应用探讨

随着本科医学检验专业的“改制”和临床生物化学检验技术的迅速发展,传统的教学模式已不能满足当今高级医学检验技术人才培养的需要。探索新的教学模式在临床生物化学检验实验教学中的应用显得十分重要。针对传统临床生物化学检验实验教学中的不足,文章基于全自动生化分析仪在临床生物化学检验实验教学中的应用,提出了对临床生物化学检验实验课程中的教学方式、教学内容以及实验室管理方面的改革策略,以期达到医学检验技术专业的培养目标。

肺炎链球菌双组分系统WalK蛋白的截短表达及激酶活性分析

目的对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)双组分系统WalK蛋白进行截短表达及激酶活性分析。方法构建重组表达菌株,通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,利用Kinase-Glo~化学发光试剂盒检测蛋白活性,并用ELISA和Western blot方法鉴定其抗原性和抗体特异性。结果成功获得高浓度、高纯度、有活性的截短WalK重组蛋白。ELISA与Western Blot检测结果均表明目的蛋白具有良好免疫原性及抗体特异性。结论成功获得高表达的S.pn WalK截短蛋白,且该蛋白具有较高的激酶活性、免疫原性及抗体特异性,本研究为后续以该蛋白为靶点的疫苗研发及抗菌药物筛选提供实验基础。

119例肾病患者血清胱抑素C结果正常的回顾性分析

目的分析探讨肾病患者血清胱抑素C结果正常的原因。方法选取血清胱抑素C结果正常的肾病患者119例,对其进行回顾性分析。结果119例肾病患者胱抑素C结果均在参考范围内。在16例慢性肾脏病患者和51例肾结石/积水患者中,血清尿素、肌酐、尿酸水平皆显著高于对照组(P<0.05);相对于对照组,27例肾病综合征组患者在糖皮质激素治疗后,血清胱抑素C、肌酐、尿酸浓度没有差异(P>0.05);17例轻型免疫相关性疾病患者血清各项肾功能指标与对照组间差异均没有统计学意义(P>0.05)。结论在肾功能严重受损时或在应用某些药物进行治疗后,胱抑素C不能作为反映肾疾病的指标,临床医生应结合相应的检查及病史,充分考虑可能对胱抑素C结果产生影响的因素,才能对疾病作出合理的判断。

肺炎链球菌SP0306蛋白的表达纯化及结晶研究

SP0306蛋白是肺炎链球菌TIGR4菌株中的一种假想的转录因子,但其蛋白三维结构及生物学功能尚未明了,生物信息学分析提示其可能调控碳水化合物代谢相关基因的表达。成功构建了SP0306蛋白的全长表达载体PET28a-sp0306,利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行原核表达,获得了以可溶形式表达的目的蛋白。经Ni-NTA柱亲和层析及DEAE阴性离子交换层析纯化后,获得了高纯度的目的蛋白。采用悬滴气相扩散法获得了质量较好的SP0306蛋白晶体,并初步进行了晶体X射线衍射,为其最终的三维结构解析及生物学功能研究奠定了基础。

淋菌孔蛋白PorB原核表达与抗原表位及保守性分析

目的构建淋菌PorB原核表达载体以制备PorB重组蛋白,并分析其B淋巴细胞抗原表位及在不同血清型淋菌菌株中的保守性,以评价其作为淋菌候选蛋白疫苗的可行性。方法以淋菌标准菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增出PorB基因,并构建原核表达载体ppSUMO-PorB,酶切鉴定成功后转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,经IPTG诱导后行SDS-PAGE,检测蛋白表达情况;从Genebank中找出不同淋菌血清型的PorB蛋白质氨基酸序列,并用ClustalX 2.1软件分析其序列保守性,DNASTAR软件预测其B淋巴细胞抗原表位。结果大肠埃希菌BL21（DE3）有PorB蛋白表达,并以包涵体表达形式存在;PorB蛋白在不同血清型淋菌菌株间具有较高的保守性（达95.7%）,PorB蛋白的B淋巴细胞抗原表位主要位于152～157、166～179、201～216、246～253、260～267、295～303、311～318等氨基酸区段。结论成功构建ppSUMO-PorB原核表达载体,并在原核系统中得到了包涵体形式的PorB蛋白,且该蛋白保守性高,可以作为淋菌蛋白疫苗候选靶点。

一株致多器官功能衰竭非O1/O139群霍乱弧菌的鉴定

目的对1例不洁饮食致多器官衰竭患者血液中霍乱弧菌进行鉴定。方法取患者静脉血进行细菌的分离培养,观察细菌的形态特征,并进行生化试验、质谱鉴定、血清学检测、16SrRNA分析、毒力基因检测。结果分离菌初步鉴定为非O1/O139群霍乱弧菌。MALDI-TOF MS鉴定该菌为霍乱弧菌,置信度99.9%。16SrRNA扩增产物测序后经blast分析,与数据库中霍乱弧菌相似性为99%。该菌无毒力基因ctx、Tcp,毒力基因lolB、toxR、rtxC、hlyA、Hap、PrtV、ompU均阳性。结论该致病菌为非O1/O139群霍乱弧菌,患者发生急骤性多器官功能衰竭死亡可能与该菌携带lolB、toxR、rtxC、hlyA、Hap、PrtV、ompU等毒力基因密切相关。