MicroRNA-124对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的观察miR-124对内皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-124在动脉粥样硬化中的作用。方法采用荧光定量PCR检测miR-124在40例冠心病患者及40例正常对照血浆中的表达水平,CCK-8和BrdU法检测miR-124对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,TUNNEL染色检测miR-124对HUVECs凋亡的影响,Western blotting检测miR-124对HUVECs促凋亡蛋白cleaved caspase 3及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。结果与对照组比较,miR-124在冠心病患者血浆中的表达明显降低。CCK-8和BrdU检测结果提示miR-124可明显促进HUVECs增殖;TUNNEL染色及Western blotting检测结果提示,miR-124可明显降低HUVECs凋亡细胞的比例及cleaved caspase 3表达,同时增加Bcl-2的表达。结论Mi R-124可促进HUVECs的增殖并抑制其凋亡,为深入认识动脉粥样硬化的发病机制提供了理论依据。

STEMI患者残余血小板聚集率与趋化因子CCL2的相关性

目的观察和分析急性ST抬高型心肌梗死(STEMI)患者服用氯吡格雷后4~6 h的残余血小板聚集率(RPA)和血浆中趋化因子CCL2表达之间的关系。方法入选STEMI患者107例。入院时均给予氯吡格雷600 mg,阿司匹林300 mg,在服用药物后4~6 h抽取静脉血,用光比浊法(TPA)检测ADP诱导的RPA,ELISA检测血浆中CCL2浓度。依据RPA检测结果分为2组:RPA≥59%为残余血小板高反应组(高反应组,n=51),RPA<59%为残余血小板正常反应组(正常反应组,n=56)。详细收集两组患者临床数据和血液生化检测资料。结果两组间在年龄、性别、吸烟史、高血压病、糖尿病、空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和脑钠尿肽(BNP)等方面均无明显的统计学差异。STEMI患者RPA与血浆CCL2浓度之间存在线性关系(r=0.427,P<0.01)。高反应组患者血浆CCL2浓度为(243±80)ng/L,正常反应组患者血浆CCL2浓度为(171±44)ng/L,两组间存在显著的统计学差异(P<0.01)。高反应组中肌钙蛋白T(TnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)显著高于正常组[(3.1±2.3)U/L vs.(2.3±1.4)U/L;(198±16)μg/L vs.(151±13)μg/L,均P<0.05]。结论 STEMI患者残余血小板聚集率与趋化因子CCL2有相关性。

趋化因子CCL2对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨CC类趋化因子配体2(C-C motif ligand 2,CCL2)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法:体外分离培养HUVECs细胞,将HUVECs铺至6孔板中,待细胞融合至80-90%时,将CCL2过表达载体[pc DNA3.1(+)-CCL2]及CCL2小分子干扰RNA(si-RNA)分别转染到HUVECs中,于转染后12 h、24 h和48 h收集细胞进行RNA及蛋白提取。荧光定量PCR方法检测HUVECs中CCL2及ICAM-1基因m RNA表达。Western blotting检测HUVECs中CCL2及ICAM-1蛋白表达。结果:(1)与pc DNA3.1(+)组相比较,pc DNA3.1(+)-CCL2组中CCL2基因m RNA和蛋白水平均显著升高;与si-Control组相比较,si-CCL2组中CCL2基因m RNA和蛋白表达均明显下降。(2)与对照组比较,pc DNA3.1(+)-CCL2组明显增加HUVECs中ICAM-1的m RNA及蛋白表达,而si-CCL2组显著抑制HUVECs中ICAM-1的m RNA及蛋白表达。结论:CCL2能增加HUVECs中ICAM-1基因m RNA和蛋白表达,为深入认识动脉粥样硬化的发病机制提供了理论依据。

STEMI患者血浆和血小板CCL2水平及其对血小板NF-κB信号通路的影响

目的:研究急性ST抬高型心肌梗死(STEMI)患者血浆和血小板中趋化因子CCL2的水平及其对血小板核因子κB(NF-κB)信号通路中P65和IκBα的影响。方法:选择2015年10月至2016年1月沈阳军区总医院CCU收治的STEMI患者50例及同期正常对照人群50例,采用ELISA检测其血浆中CCL2水平,western blot检测其血小板中CCL2和CCR2的表达;western blot检测经CCL2刺激后血小板中p P65和IκBα表达,进而应用CCR2拮抗剂RS201895及NF-κB信号通路抑制剂Bay11-7082预处理血小板,再应用CCL2刺激血小板,检测p P65和IκBα表达。结果:STEMI患者血浆CCL2浓度为222±98 pg/m L,正常对照组血浆CCL2浓度为162±24 pg/m L,较STEMI组显著降低,差异存在统计学意义(P<0.01)。STEMI患者血小板中CCL2和CCR2的表达较正常对照组明显增加(P<0.01)。经CCL2刺激后,血小板中p P65水平升高,IκBα水平降低(P<0.01);在CCL2刺激血小板之前,应用RS201895或Bay11-7082预处理血小板后,其p P65水平降低,IκBα水平升高(P<0.01)。结论:STEMI患者血浆及血小板中CCL2表达增高,CCL2/CCR2可能通过NF-κB信号通路影响血小板功能,参与血栓形成。

CC类趋化因子配体5与冠状动脉粥样硬化的相关性研究

目的:探讨CC类趋化因子配体5(CC chemokine ligand-5,CCL5)的表达水平与冠状动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)严重程度之间的相关性。方法:将颈动脉粥样硬化狭窄(>70%)行颈动脉内膜切除术的5例手术标本作为AS组,尸检无动脉粥样硬化的正常颈动脉3例作为对照组。应用免疫组织化学、Western blot检测AS组和对照组中CCL5的表达。收集110例冠状动脉造影术患者,根据Gensini评分分为对照组(Gensini评分=0分,n=27),轻微病变组(0<Gensini评分≤20,n=32)和严重病变组(Gensini评分>20,n=51)。收集各组的临床基线资料(包括年龄、性别、血压、血脂、血糖等),ELISA方法检测各组血浆中CCL5表达水平,并分析各危险因素、CCL5表达水平与Gensini评分之间的相关性。结果:颈AS组AS组织中CCL5蛋白的表达明显高于正常颈动脉组(P<0.05),冠心病患者血浆CCL5水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组、轻微病变组和严重病变组在性别、吸烟史、收缩压、舒张压、血糖及血浆CCL5的表达上存在显著的差别。相关性分析显示舒张压、血糖及血浆CCL5表达水平与Gensini评分间呈显著正相关(r=0.276、0.418、0.519,P<0.05)。以Gensini评分为因变量,性别、年龄、吸烟史、收缩压、舒张压、LDL-C、HDL-C、血糖、血浆CCL5为自变量建立多元逐步线性回归模型,结果提示血浆CCL5为Gensini评分的独立预测因子(B值为8.775;P值为0.000)。结论:血浆CCL5水平与冠状动脉粥样硬化病变程度呈正相关,可能作为AS程度的独立预测因子。

S100A12在预测慢性心力衰竭患者不良临床终点事件中的意义

目的:探讨S100A12在预测慢性心力衰竭(CHF)患者不良临床终点事件中的意义。方法:前瞻性收集2019年1月—2020年1月上海市静安区市北医院诊疗的CHF患者200例,通过18个月的随访发现,出现不良心脑血管事件(MACCE)的患者有63例,设为MACCE发生组;未出现MACCE事件的患者有137例,设为MACCE未发生组。比较两组患者的临床相关资料,分析S100A12水平与临床特征的相关性,并对S100A12高表达和低表达、BNP高表达和低表达的CHF患者进行生存分析,同时分析CHF患者发生MACCE的影响因素。结果:MACCE发生组与MACCE未发生组中性别构成比、BMI、LVEDD、LVESD、EF、LVMI、SBP、DBP、TG、TC、LDL-C、HDL-C及NT-proBNP水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);MACCE发生组患者的BNP和S100A12水平明显高于MACCE未发生组,eGFR值明显低于MACCE未发生组,差异均有统计学意义(P<0.05);S100A12与年龄(r=0.217,P=0.005)和BNP(r=0.317,P<0.001)呈正相关性,与eGFR(r=-0.214,P=0.013)呈负相关性;S100A12高表达组的生存期明显短于S100A12低表达组(x~2=8.537,P<0.001);BNP高表达组的生存期明显短于BNP低表达组(χ^(2)=5.194,P=0.005)。年龄、BNP和S100A12是预测CHF患者MACCE的独立危险因素(P<0.05),而eGFR是预测MACCE的保护因素(P<0.05)。结论:S100A12和BNP一样是预测MACCE的独立危险因素,并且随着S100A12的升高,CHF死亡率明显增加,说明S100A12对于预后判断可能具有明显价值。

血塞通(三七皂苷)对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤的抑制作用

目的研究三七皂苷(血塞通)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法将H9c2心肌细胞随机分成5组:对照组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂组。对照组细胞正常培养不做任何处理;模型组调整培养基,再进行缺氧/复氧处理;低剂量实验组、高剂量实验组和Nrf2抑制剂组:用0.30,0.60 mg·mL^(-1)血塞通溶液和0.60 mg·mL^(-1)血塞通溶液+2μmol·L^(-1)Nrf2抑制剂ML385预处理后,再进行缺氧/复氧处理。检测各组细胞存活率;用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞凋亡;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞凋亡相关蛋白及Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。结果对照组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和Nrf2抑制剂组的细胞存活率分别为(100.00±1.23)%,(47.93±6.69)%,(63.11±5.90)%,(75.56±4.20)%和(48.27±4.63)%,凋亡率分别为(3.66±0.69)%,(69.10±4.26)%,(49.98±5.79)%,(26.44±5.78)%和(67.62±5.72)%;细胞上清LDH水平分别为(154.22±6.45),(255.47±9.37),(216.87±11.27),(185.98±14.18),(246.74±8.61)U·L^(-1);SOD活性分别为(34.80±3.81),(15.43±2.12),(20.83±1.11),(33.11±2.51),(21.65±2.44)U·mg^(-1);MDA含量分别为(1.29±0.20),(3.57±0.41),(3.19±0.22),(1.53±0.30),(3.32±0.18)nmol·mg^(-1);ROS相对荧光强度分别为1.07±0.17,3.88±0.61,3.16±0.31,1.65±0.26,3.19±0.28;模型组与对照组比较,高、低剂量实验组间,高、低剂量实验组与模型组比较,Nrf2抑制剂组与高剂量实验组、对照组、模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。蛋白质印迹结果显示,缺氧复氧处理显著提升了H9c2细胞中cleaved-caspase 3和Bax表达水平,降低了Bcl-2表达(P<0.05)。随着血塞通处理浓度的上调,cleaved-caspase 3和Bax的高表达被抑制,Bcl-2,Nrf2和HO-1的表达上调(P<0.05)。加入Nrf2抑制剂后,血塞通对cleaved-caspase 3和Bax的表达抑制,Bcl-2和HO-1的表达增强功能均消失(P<0.05)。结论血塞通可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤,发挥对心肌细胞损伤的保护作用。