穿山龙薯蓣皂苷通过调控自噬治疗胶原诱导性关节炎小鼠模型的机制

目的探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制。方法通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激。加强免疫后将胶原免疫的50只小鼠随机分组为CIA模型组、雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组,另有10只小鼠注射等量生理盐水作为对照组。在对小鼠进行连续14天灌胃治疗并观察各组小鼠足爪的炎症程度,取下各组小鼠脾、腹股沟淋巴结和踝关节、膝关节,对踝关节、膝关节进行HE染色,检测各组淋巴结、脾组织中mRNA和蛋白质水平的相关自噬指标。结果与CIA模型组相比,穿山龙薯蓣皂苷高剂量组关节炎指数(AI)评分降低(P<0.05);雷公藤组及穿山龙薯蓣皂苷组足爪厚度差值减小(P<0.01)。与对照组相比,CIA模型组体质量明显下降(P<0.01);小鼠膝关节滑膜和足爪踝关节HE染色结果显示CIA模型组对比对照组出现免疫细胞浸润、骨质侵蚀、软骨破坏和滑膜增生的症状;雷公藤组与穿山龙薯蓣皂苷中、高剂量组对CIA模型有不同程度的治疗作用,可以减轻和预防症状。与CIA模型组相比,雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷治疗组中LC3、Beclin-1的mRNA水平和蛋白水平的表达升高,p62的mRNA水平和蛋白水平的表达降低。结论穿山龙薯蓣皂苷可能通过抑制自噬对CIA模型小鼠起到治疗作用。

lncRNA-AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖和转移

目的研究AK093407对结直肠癌HCT-15细胞的影响及相关机制。方法Lv5慢病毒感染过表达AK093047,转染siRNA沉默AK093407;qRT-PCR鉴定AK093407的表达;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;划痕修复实验和Transwell检测细胞侵袭和迁移;qRT-PCR和蛋白印记检测EMT相关因子。结果Lv5慢病毒感染后,AK093407表达升高。过表达AK093407结直肠癌细胞增殖活性升高,促进细胞周期演进,凋亡降低,迁移和侵袭能力增强。qRT-PCR和蛋白印记结果显示,occludin和E-cadherin的转录和翻译水平降低(P<0.05);β-catenin、vimentin和fibronectin的转录和翻译水平升高(P<0.05)。AK093407沉默后,与上述结果相反。结论AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖、细胞周期、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。

穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364NF-κB p65活性、STAT3及VEGF mRNA表达的影响

目的观察穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α联合诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 NF-κB p65活性、STAT3表达及VEGF mRNA表达水平的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生的作用机制。方法制备穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)含药血清;取大鼠滑膜细胞株RSC-364经IL-17(10μg/L)和TNF-α(10μg/L)、穿山龙总皂苷含药血清、雷公藤多甙片含药血清单独或联合应用孵育,孵育24 h,提取各组细胞核蛋白用于TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测NF-κB p65的DNA结合活性;提取各组细胞总蛋白后应用Western blot方法观察STAT3蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA的表达情况。结果 IL-17+TNF-α诱导的细胞模型组中NF-κB p65的DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGFmRNA表达水平均显著高于空白对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05);与细胞模型组相比,雷公藤含药血清组、穿山龙总皂苷含药血清组的NF-κB p65 DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGF mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且2组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论本研究证实穿山龙总皂苷含药血清可以抑制NF-κB p65的DNA结合活性及STAT3蛋白的表达,考虑穿山龙总皂苷通过上述信号转导途径来调控血管新生关键因子VEGF的产生,进而抑制RA血管新生。

穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜组织NF-κB p65活性及STAT3表达的影响

目的通过观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织核转录因子κB(NF-κB)及信号转导子和转录激活因子3(STAT3)表达的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生可能的信号转导通路作用机制。方法将造模成功的60只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组,另设正常对照组,每组12只。造模成功后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35 d。应用TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测滑膜组织中NF-κB p65的DNA结合活性。应用免疫组织化学染色的方法观察滑膜组织中STAT3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜细胞核蛋白提取物中NF-κB p65的DNA结合活性和滑膜组织中STAT3蛋白的表达显著增高,有统计学意义(P<0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组的NF-κB p65的DNA结合活性和STAT3蛋白的表达均显著降低,有统计学意义(P<0.01);各治疗组之间两两比较均无统计学意义(P>0.05)。结论穿山龙总皂苷可能通过抑制NF-κB信号转导通路中NF-κB p65的活性和JAK-STAT信号转导通路中重要底物STAT3蛋白的表达,起到抑制类风湿性关节炎血管新生的作用。

穿山龙总皂苷对大鼠滑膜细胞株VEGF与AP-1的影响

目的观察含穿山龙总皂苷血清对大鼠滑膜细胞株RSC-364血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响,探讨其抑制血管新生的作用机制。方法制备含穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)血清。将培养好的大鼠滑膜细胞株RSC-364分为空白对照组、模型对照组、含雷公藤多苷血清组和含穿山龙总皂苷血清组,培养1 h,除空白对照组外,其余各组加入IL-17和TNF-α(均为10μg·L-1)共同孵育24 h。采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA表达,凝胶电泳迁移率实验法(EMSA)检测各组细胞核蛋白提取物AP-1的DNA结合活性。结果与空白对照组比较,模型对照组VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性显著增高(P<0.05,P<0.01);与模型对照组比较,含雷公藤多苷血清组、含穿山龙总皂苷血清组VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性均降低(P<0.05),且两组间比较,差异无统计学意义。结论含穿山龙总皂苷血清可以抑制VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性,其机制可能是通过抑制转录因子AP-1来调控血管新生关键因子VEGF产生,进而抑制血管新生。

穿龙薯蓣皂苷元体外对CIA小鼠Treg细胞亚群及转录因子的影响

目的:探究穿龙薯蓣皂苷元体外对CIA小鼠Treg细胞及特异性转录因子的影响。方法:将DBA1/J小鼠用鸡Ⅱ型胶原乳剂进行免疫(0.1 ml/只),21 d等量再次刺激,建立CIA模型。选模型成功CIA鼠无菌取腹股沟淋巴结研磨成单细胞悬液,根据药物毒性确定药物处理浓度,且设为对照组、模型组、穿龙薯蓣皂苷元高、中、低剂量组。流式细胞术分析体外培养淋巴细胞中Treg细胞百分率,PCR、Western blot检测Treg特异性转录因子Foxp3 mRNA及蛋白状况。结果:选择CCK-8检测药物抑制率不低于70%为体外药物刺激高、中、低剂量,分别为25、12.5、6.25μmol/L。较对照组,模型组Treg细胞比率显著增高(P<0.05),Foxp3 mRNA水平提高(P<0.05),Foxp3蛋白表达下降(P<0.05)。较模型组,穿龙薯蓣皂苷元中剂量组Treg细胞增多,在统计学上有意义(P<0.05),高剂量组Foxp3 mRNA、蛋白表达均明显升高(P<0.05)。结论:体外实验中CIA小鼠Treg细胞的生长可被穿龙薯蓣皂苷元明显促进,这个作用许是通过调节Treg细胞特异性转录因子Foxp3而引起的。

薯蓣皂苷片含药血清对IL-17和TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364NF-κB p65、STAT3及VEGF影响的实验研究

目的观察薯蓣皂苷片含药血清对白细胞介素-17(interieukin-17,IL-17)联合肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导大鼠滑膜细胞株(rat synovial cell-364,RSC-364)核转录因子-κB(nuclear factor of kappaB,NF-κB)、信号转导子和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription3,STAT3)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨薯蓣皂苷片抑制类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管新生可能的作用机制。方法实验设空白对照组、细胞模型组、薯蓣皂苷片含药血清组、雷公藤多苷片(阳性对照)含药血清组。制备薯蓣皂苷片和雷公藤多苷片含药血清;用IL-17和TNF-α联合刺激RSC-364建立RA细胞模型,薯蓣皂苷片与雷公藤多苷片含药血清分别进行干预,应用TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测NF-κB p65的DNA结合活性,应用Western blot方法观察STAT3蛋白的表达及应用实时荧光定量PCR方法观察VEGF mRNA表达。结果与空白对照组比较,IL-17和TNF-α联合诱导的细胞模型组核蛋白提取物中NF-κB p65DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGF mRNA表达均显著增高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,薯蓣皂苷片含药血清组、雷公藤多苷片含药血清组NF-κB p65的DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGF mRNA表达均显著降低(P<0.01,P<0.05)。薯蓣皂苷片含药血清组与雷公藤多苷片含药血清组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论薯蓣皂苷片可能通过抑制NF-κB信号转导通路中NF-κB p65的活性和酪氨酸蛋白激酶家族Janus kinase(JAK)-信号转导子和转录激活因子信号转导通路中STAT3蛋白表达来抑制VEGF mRNA表达,从而起到抑制RA血管新生的作用。

骨盆骨折髂腹股沟入路避免神经血管损伤的临床解剖学

目的为髂腹股沟入路在骨盆骨折手术中避免神经血管损伤提供解剖学依据。方法在15具(男9具,女6具)30侧成尸标本上选择髂前上棘、耻骨结节和腹股沟韧带为标志观测股外侧皮神经(Lateral femoral cutaneous nerve,LFCN)、髂腹股沟神经(Ilioinguinal nerve,IN)、股神经耻骨肌支和闭孔动脉(Obturator artery,OA)的走形特点,所测数据统计学处理。结果①LFCN在髂前上棘内侧穿出腹股沟韧带占96.67%(29/30侧),距髂前上棘中心点(20.01±0.32)mm;被腹股沟韧带纵横纤维所包裹的占33.33%(10/30侧);在阔筋膜形成的筋膜鞘中走行占46.67%(14/30侧)。②IN穿出腹内斜肌部位距离髂前上棘中心点为(5.41±0.50)mm,穿出腹外斜肌腱膜部位距离耻骨结节中心点为(18.04±0.21)mm。结论在显露髂骨翼内侧面和骶髂关节时,应在LFCN走行的阔筋膜和腹股沟韧带部位进行显露和预防性松解,以免牵拉损伤;切开腹外斜肌腱膜时应从腹股沟韧带两端上方5 mm处开始,防止损伤深面的IN。在显露髂耻隆起时先寻找和结扎闭孔血管耻骨支,以免引起不可控制的出血。

中药薯蓣皂苷元对CIA大鼠滑膜组织VEGF及AP-Ⅰ表达的影响

目的:通过观察中药薯蓣皂苷元对牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎(Collagen-Induced Arthritis,CIA)大鼠膝关节滑膜激活蛋白-1(Activator Protein-1,AP-1),血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)的影响,探讨中药薯蓣皂苷元治疗类风湿关节炎的可能作用机制。方法:通过建立大鼠CIA模型,实验随机分空白对照组、CIA模型组、中药薯蓣皂苷元组和阳性药物对照组(雷公藤多苷组),采用原位杂交方法检测膝关节滑膜组织AP-1(c-fos和c-jun)的表达情况,应用Real-Time PCR方法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF m RNA的表达情况。结果:CIA模型组大鼠膝关节滑膜组织c-jun、c-fos和VEGF mRNA表达明显高于空白对照组;应用中药薯蓣皂苷元及雷公藤治疗后,c-jun、c-fos和VEGF m RNA表达明显降低。结论:薯蓣皂苷元可能通过对AP-1的两个亚单位c-jun和c-fos的调节来影响滑膜组织VEGF的表达,进而抑制滑膜血管新生,从而对类风湿关节炎发挥治疗作用。

17-AAG通过STAT3通路调控胃癌细胞VEGF基因及蛋白表达作用探讨

目的:观察17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-desmethoxy-geldanamycin,17-AAG)对人胃癌MKN-45细胞信号转导和转录活化蛋白3(signal transducer and activator of transcriptions 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)mRNA及蛋白表达水平的影响,并探寻STAT3通路所发挥的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-45细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间17-AAG进行作用,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力;RT-PCR法和Western Blotting法检测各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白的表达水平。结果:0.165～10 mg/L的17-AAG作用24、48 h后对MKN-45细胞有显著的抑制作用,且有明显的时间、剂量依赖性;1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L的17-AAG作用48 h后,各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白表达均下调,且具有浓度依赖性;3.0 mg/L 17-AAG作用12、24、48h后,各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白表达均下调,且具有时间依赖性。结论:17-AAG对人胃癌MKN-45细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能抑制STAT3和VEGF mRNA和蛋白的表达,17-AAG可能通过对STAT3通路的负性调控作用而抑制VEGF表达。

穿龙薯蓣皂苷元对CIA小鼠脾脏Treg细胞的影响

目的:在胶原性关节炎小鼠模型中初步探讨穿龙薯蓣皂苷元对其脾脏Treg细胞的影响。方法:通过将鸡Ⅱ型胶原乳剂与弗氏完全佐剂混合后免疫DBA1/J小鼠,建立胶原性关节炎(CIA)模型。通过免疫磁珠分离法(MACS)分选CIA小鼠脾脏中的CD4+CD25+Treg细胞。流式细胞术检测Treg细胞的纯度,并体外培养。穿龙薯蓣皂苷元作用48h后,流式细胞术检测Treg细胞比例,实时荧光定量PCR法检测其转录因子Foxp3的表达,ELISA法检测相关细胞因子IL-10的水平。结果:成功建立CIA模型小鼠。MACS法分选CIA小鼠脾脏Treg细胞纯度达90%以上。穿龙薯蓣皂苷元作用48h后,与对照组相比,给药组Treg细胞比例显著升高(P<0.05),Foxp3 mRNA表达显著升高(P<0.05),细胞上清中IL-10的水平显著升高(P<0.05)。结论:穿龙薯蓣皂苷元能显著提高CIA小鼠脾脏中Treg细胞的比例、转录因子Foxp3和相关细胞因子IL-10的水平。

脊髓损伤后5-HT2A受体的变化与鼠尾痉挛关系的分析

目的通过损伤大鼠脊髓腰1节段来探讨损伤下段5-HT2A受体免疫反应变化与鼠尾痉挛状态的关系,为治疗患者脊髓损伤后肢体痉挛提供理论依据。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、打击组和横断组(n=20),用免疫组化法研究5-HT2A受体免疫反应的变化,并分析与鼠尾痉挛状态的关系。所得数据统计学处理。结果(1)打击组和横断组5-HT2A受体免疫反应的密度比空白组增高,横断组增高更显著,差异有统计学意义。(2)脊髓损伤后鼠尾痉挛状态与5-HT2A受体的密度和脊髓损伤的程度呈正相关。结论脊髓损伤后鼠尾痉挛状态与5-HT2A受体密度的变化呈正相关,应用5-HT2A受体阻滞剂治疗患者的肢体痉挛提供了理论依据。

腰椎前路手术中保护生殖股神经的临床解剖学

目的为腰椎前路手术中避免生殖股神经（Genitofemoral nerve，GFN）损伤提供解剖学依据。方法在15具成年尸体标本上选择易于触及的椎间盘中点为标志，观察GFN在腰大肌中走行、分支的形态特点及穿出点位置，测量并进行统计学处理。结果GFN穿出腰大肌的位置主要集中在L3-4节段；GFN自腰大肌内穿出前未分支者占83．33％（25侧），穿出前已分支者占16．67％（5侧）；根据GFN的走行分3型：Ⅰ型，在腰大肌内远离腰椎体走行；Ⅱ型，紧贴腰椎体走行；Ⅲ型，生殖支和股支分别穿出腰大肌，且两支在腰大肌内隔有肌纤维组织。结论在显露L2-4椎体前外侧时容易损伤GFN。Ⅰ型剥离腰大肌时紧贴椎体并向外侧牵开肌肉；Ⅱ型及Ⅲ型采用经腰大肌入路劈开肌纤维束，可避免损伤GFN。

穿山龙水溶性总皂苷对RSC-364细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响

目的:观察穿山龙水溶性总皂苷对大鼠滑膜成纤维细胞系RSC-364细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的影响。方法:应用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素17(IL-17)刺激RSC-364细胞建立类风湿性关节炎细胞模型,并以不同剂量穿山龙水溶性总皂苷进行干预,ELISA法检测细胞培养液上清MMP-2和MMP-9的水平。结果:穿山龙水溶性总皂苷各剂量组(10、20、30mg/L)在不同时间点(24、48、72h)均可明显降低TNF-α和IL-17刺激的RSC-364细胞分泌MMP-2、MMP-9水平的升高,并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:穿山龙水溶性总皂苷可能通过抑制RSC-364细胞分泌MMP-2和MMP-9发挥抗类风湿性关节炎的作用。

无症状继发孔型ASD封堵术前后右心形态功能的评估

介入封堵术巳成为治疗继发孔型房间隔缺损（atrial septal defect，ASD）的首选方法，但植入封堵器对心脏结构的长期机械影响尚未完全清楚。超声心动图对评估心脏的形态、功能具有重要的临床价值吲。本研究应用超声心动图对继发孔型ASD封堵术术前、术后右心的形态和功能进行评价，以期为继发孔型ASD封堵术时间的选择提供参考。

穿龙薯蓣皂苷元对CIA小鼠CD4^(+)CD25^(-)T分化为Treg细胞的诱导作用

目的:探讨穿龙薯蓣皂苷元诱导胶原性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠CD4^(+)CD25^(-)T细胞向调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)转化的影响。方法:采用免疫磁性细胞分离法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离CIA小鼠的CD4^(+)CD25^(-)T细胞。通过不同浓度(25、12.5、6.25μmol·L^(-1))的穿龙薯蓣皂苷元诱导CD4^(+)CD25^(-)T细胞向Treg细胞分化,用FCM检测Treg细胞比率,Real-Time PCR法检测Foxp3 mRNA的水平,ELISA法检测培养上清白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)的含量。结果:免疫磁性细胞分离法分选出的CD4^(+)CD25^(-)T细胞纯度达93.89%。与对照组相比,穿龙薯蓣皂苷元给药组Treg细胞比率明显上调(P<0.05),Foxp3 mRNA的表达水平和培养上清中IL-10的水平均明显增加(P<0.05)。结论:穿龙薯蓣皂苷元可以诱导CIA小鼠CD4^(+)CD25^(-)T细胞向Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。

黄芩苷镁对LPS/D-GalN致急性肝损伤大鼠氧化应激的影响

探讨黄芩苷镁对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤大鼠体内反应氧化应激的指标SOD、MDA的影响。方法:大鼠随机分为异甘草酸镁组,正常组,黄芩苷镁高、中、低剂量组,模型组。尾静脉注射预防给药7天后,除正常组外均以20μg/kg LPS联合400 mg/kg D-GalN 腹腔注射制备急性肝损伤模型。通过血清ALT、AST含量等判断模型制备效果,检测血清中氧化应激指标MDA、SOD的含量。结果:模型组组血清中ALT、AST的含量较正常组增加(P<0.05)。与正常组比,模型组血清中MDA含量上升(P<0.05),SOD含量下降(P<0.05);与模型组比较,黄芩苷镁高剂量组、异甘草酸镁组血清中MDA含量均降低(P<0.05),SOD含量均升高(P<0.05)。结论:黄芩苷镁可能通过降低MDA的含量,提高SOD的含量来对抗氧化应激,进而发挥保肝作用。

长白落叶松人工林的经济成熟龄

采用国际通用的分析方法,选择适于长白落叶松生长的3个指数级产出模型,以投入产出资料作为分析依据,确定经济成熟龄。

培养科研创新思维能力在免疫学教学过程中实践与探讨

医学免疫学是一门重要的医学基础性、支柱性和前沿性课程,自20世纪以来,其发展迅速,目前已渗透到生命科学和医学领域的各个学科[1]。医学免疫学在高等医学院校不仅是本、专科学生的基础医学课程,同时也是临床、麻醉、影像、检验等医学本科专业学生的必修课[2]。医学免疫学具有很强的逻辑性和系统性。

ELAVL1在肿瘤中的研究进展

随着现代社会的快速发展,肿瘤的发病率逐年攀升。科学研究表明,各类肿瘤的生成转移与胚胎致死异常视觉蛋白1(ELAVL1)的表达有着不可或缺的作用。ELAVL1作为一种RNA结合蛋白,有着稳定靶mRNA和促进靶mRNA翻译的重要作用,进一步影响细胞的增殖、分化及凋亡等重要过程。本文研究的是ELAVL1在多种肿瘤的发生发展中所起到的作用,进而推断ELAVL1对胃癌的作用关系,目的在于为胃癌的临床靶向治疗开辟新思路,寻找新途径。