西藏株小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

【背景】小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病,严重威胁我国养羊业的发展。【目的】原核表达PPRVH蛋白,并制备其多克隆抗体。【方法】根据GenBank中PPRV西藏株h基因序列,对其进行密码子大肠杆菌偏爱性优化,采用两步PCR法全化学合成全长h基因。将测序验证正确的h基因克隆至原核表达载体pET-28a、pET-30a、pET-32a,转化E. coli BL21(DE3)并利用IPTG诱导H蛋白表达。以经SDS-PAGE割胶纯化的重组H蛋白免疫新西兰大白兔制备抗PPRV H蛋白多克隆抗体。【结果】重组E. coli [pET-28a(-30a,-32a)-H]表达的重组H蛋白相对分子质量分别约为70、68和86 kD;诱导7 h时PRRV H蛋白表达量最高,而且主要以包涵体形式表达;重组E.coli(pET-30a-H)表达的H蛋白经SDS-PAGE割胶纯化后免疫新西兰大白兔制备的多抗血清能与表达的重组H蛋白发生特异性反应;ELISA法检测抗体效价在1:6400-1:25600之间。【结论】原核表达了PPRVH蛋白,并制备了高效价的抗H蛋白多克隆抗体,为进一步研究PPRV H蛋白的功能及H蛋白的线性B细胞表位作图奠定了基础。

小反刍兽疫(PPR)疫苗研究进展

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一类急性、烈性、接触性山/绵羊传染病。目前,PPR的防控措施包括疫区的隔离、消毒和弱毒疫苗免疫接种。本文综述了PPR疫苗的研究进展,主要包括弱毒疫苗、重组标记疫苗以及RNA干涉技术等。弱毒疫苗的热不稳定性是其在热带和亚热带地区应用面临的主要问题。将来,人们会更加重视标记疫苗及其配套血清学检测方法的研究,以区分自然感染动物和疫苗免疫动物,并最终在全球范围内根除PPR。