奥氮平对乳腺癌相关巨噬细胞增殖与分化功能的影响

目的探讨奥氮平对乳腺癌细胞共培养体系中人急性髓系白血病细胞系THP-1细胞增殖和分化功能的影响。方法体外培养THP-1细胞、人乳腺癌MDA-MB-231细胞,建立THP-1与MDA-MB-231共培养组,用CCK-8法检测奥氮平处理后的THP-1单独组、共培养组中THP-1的活性变化;用qRT-PCR法检测奥氮平对佛波酯诱导的THP-1单独组、共培养组中THP-1表面分子CD68、CD80、CD163的表达,以及炎症因子IL-1β、IL-6、IL-12、TGF-α、TGF-β和IL-10的表达,同时进一步检测巨噬细胞极化相关miRNA分子miRNA9、miRNA155和miRNA34a的表达。结果奥氮平能抑制THP-1单独组和共培养组中THP-1的增殖活性(P<0.05);在佛波酯诱导THP-1向巨噬细胞分化的研究中,奥氮平能够显著提高THP-1单独组CD68分子的表达(P<0.05),而在共培养组中CD68、CD80、CD163的表达则均显著升高(P<0.05)。在THP-1单独组中,奥氮平仅能够促进IL-12的表达;在共培养组中,奥氮平使CCL2、CXCL10、IL-1β、IL-10、IL-6、IL-12、TNF-α表达水平显著升高(P<0.05)。在巨噬细胞分化相关miRNA的研究中,在奥氮平作用下,THP-1单独组中miR155和Let7c的表达显著升高(P<0.05),miR146、miR9和miR34a的表达变化无差异;在与MDA-MB-231共培养条件下,miR34a和Let7c显著升高(P<0.05)。结论在肿瘤细胞存在的情况下,奥氮平可参与肿瘤相关巨噬细胞表面分子、炎症因子以及巨噬细胞极化相关miRNA分子表达的调节,这为进一步利用奥氮平治疗乳腺癌提供了新思路。

两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的比较

背景:干细胞是再生医学研究的热点,影响干细胞生物学特性的因素很多,其中供体年龄是重要的影响因素之一。目的:观察两种月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞生物学特性的变化,筛选最佳种子细胞来源。方法:以4月龄和12月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞为研究对象,分别选取第3代细胞和第10代细胞,观察细胞形态,绘制细胞增殖曲线,检测细胞表面抗原、细胞周期、细胞凋亡情况,然后进行成骨诱导分化茜素红染色和成脂诱导分化油红O染色以及细胞衰老β-半乳糖苷酶染色等。结果与结论:①4月龄和12月龄细胞均呈漩涡状贴壁生长,表面标志物CD29、CD44和CD90表达均为阳性,CD8a、CD45和HLA-DR表达均为阴性;②4月龄和12月龄第3代细胞增殖能力均较强;第10代细胞,与4月龄相比,12月龄G0/G1期百分比增高(P<0.001),早期凋亡增加(P<0.001),而S期和G2/M期百分比显著下降(P<0.001);③4月龄和12月龄第3代细胞的体外诱导分化能力无显著性差异;12月龄第10代细胞的钙化结节率和脂滴率与4月龄相比显著降低(P<0.001);④4月龄和12月龄第3代细胞β-半乳糖苷酶几乎不表达;12月龄第10代细胞β-半乳糖苷酶阳性细胞与4月龄相比显著增加(P<0.001),且细胞形态变得更加扁平和肥大、折光性弱;⑤结果表明,4月龄近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞具有更强的增殖和分化能力,且细胞衰老活性更低,提示4月龄更适合用于自体移植的种子细胞。

近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外分泌肝细胞生长因子延缓慢性肾脏病纤维化进展

目的:分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-MSCs对CKD肾纤维化的修复作用及其可能机制。方法:采用密度梯度法分离培养BM-MSCs,并从细胞形态、表面抗原、分化能力等方面鉴定;采用左侧输尿管部分梗阻(left partial ureteral obstruction,LPUUO)方法制作CKD模型,并通过B超、单光子发射计算机断层成像术(single-photon emission computed tomography,SPECT)、病理染色等评估;体外实验分为肾组织与BM-MSCs共培养、肾组织单独培养、BM-MSCs单独培养3组,体外培养7 d,每天收集3组上清液,酶联免疫吸附法测定肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)累积分泌量。肾组织行HE染色,Masson染色。结果:分离培养的BM-MSCs表达抗原CD29,CD90而不表达CD45,成骨诱导茜素红染色阳性,成软骨诱导阿利新蓝染色阳性。LPUUO术后12周,B超示左肾皮质变薄、肾盂积液;SPECT示左肾充盈延迟、梗阻性肾功能受损。上清液HGF累积含量示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组第1,5,6,7天HGF累积分泌量明显高于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。HE染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组和CKD肾组织单独培养组中肾均出现不同程度的病变,并随时间延长加重,但CKD肾组织单独培养组病变更严重;Masson染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组术后第5,6,7天肾组织被染成蓝色的胶原纤维的累计光密度值明显低于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。结论:近交系五指山小型猪BM-MSCs体外分泌HGF,抑制或延缓CKD纤维化进展。

近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞分离培养及生物特性

目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)体外分离培养和鉴定方法,比较我国不同种系猪来源BM-MSCs的生物学特性,为下一步研究BM-MSC对ILMW单侧输尿管梗阻所致肾损伤的修复机制提供细胞来源。方法:选取4月龄及10月龄健康ILMW各4头,从距髂骨翼边缘1 cm处穿刺,抽出骨髓约5 m L;经密度梯度法分离单个核细胞,分别用含10%,12%和15%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的完全培养基于体外培养;并取第1代、第3代、第5代、第11代细胞分别行细胞形态学、表型、分化能力、生长曲线、细胞周期等检测。结果:分离培养的BM-MSCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞18 h出现贴壁,第6天进入对数增长期,约9 d后80%融合,传代后细胞状态未出现明显异常。细胞表面抗原检测显示CD29,CD44,CD90表达呈阳性;CD34和CD45表达呈阴性;且各代间差异无统计学意义(均P>0.05)。成骨诱导18 d后,茜素红染色阳性;成软骨诱导21 d后,阿利新蓝染色阳性。细胞周期检测显示G0/G1的细胞百分比约为81.45%。结论:ILMW的BM-MSCs贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后仍能保持稳定的生物学特性,是中国大陆地区猪来源BM-MSC的最佳选择之一。

近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性

目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adiposederived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法:选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1%I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验:测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果:体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为(17.00±0.54)μm和(2.58±0.24)×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显(均P>0.05);CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高(均P<0.05)。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降(均P<0.05)。结论:ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。

脂肪间充质干细胞的研究进展

过去,脂肪只被看作是一种能量储存的组织而未引起研究者们重视。直到20世纪80年代中期,确定其参与性激素的新陈代谢后,脂肪组织变成一个参与人体新陈代谢和免疫应答重要的内分泌器官[1]。2001年Zuk等[2]首次报道一种新成体干细胞的来源。

两种人包皮成纤维细胞分离培养方法的比较

目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要。本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF),以探讨两种方法的优缺点。方法:ITCM是将剪碎的皮肤组织置0.1%Ⅱ型胶原酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,对真皮组织采用0.25%胰酶于室温下再次消化15 min,待组织块贴壁于培养皿后进行培养。EDM是将剪碎的皮肤组织置0.25%胰酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,将真皮组织再次于4℃下用0.1%Ⅱ型胶原酶消化过夜,然后将组织块与酶的混合物一起过滤、挤压,用含有胎牛血清的培养基冲洗滤网,对得到的细胞悬液进行培养。ITCM与EDM均采用两种酶进行消化,但两种酶的使用顺序、消化时间及温度不同,最终接种于培养皿中进行后续培养的分别是组织块和细胞悬液。本研究利用ITCM和EDM分离、培养HFF,观察ITCM组和EDM组HFF的原代至第3代(Passage 0~Passage 3,P0~P3)的细胞形态;染色波形蛋白、CD68和角蛋白以鉴定细胞纯度;绘制P3生长曲线对比两组细胞的增殖能力。采取120 mJ/cm^(2)的中波紫外线(medium-wave ultraviolet,UVB)照射P3 ITCM组和EDM组HFF,建立光损伤模型。根据有无照射紫外线,实验分为UVB组和未照射对照组(Control)。采取二次离心法提取贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP),用含不同浓度(0,2.5%,5.0%及10.0%)PPP的完全培养基对ITCM组和EDM组的HFF进行分组培养,加入PPP 24 h后用CCK-8试剂盒检测损伤细胞的增殖情况。结果:ITCM组培养至第3天时可观察到大量HFF,受杂质影响小;EDM组HFF形态的观察受到较多杂质影响;第9天时,两组细胞均可传代;两种方法体外分离培养的HFF均呈长梭形、旋涡状生长。HFF培养至P2时ITCM组和EDM组波形蛋白的阳性率比较差异有统计学意义[(97.36±0.76)%vs(99.4±0.56)%,P<0.01],CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(70.8±0.46)%vs(78.37±0.75)%,P<0.01],pan-keratin的表达分别为阳性和阴性。HFF培养至P3时ITCM组与EDM组比较,波形蛋白和角蛋白染色结果差异无统计学意义(均P>0.05),CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(74.73±1.37)%vs(85.27±2.63)%,P<0.001]。EDM组P3 HFF的增殖能力显著高于ITCM组(P<0.05)。经UVB(120 mJ/cm^(2))照射后,两种方法获取的HFF出现光损伤改变;2.5%PPP组修复损伤细胞的能力显著高于其余浓度组(P<0.05或P<0.001)。结论:与ITCM法比较,EDM法获得的HFF具有纯化速度快、增殖能力强的优点;PPP对HFF的紫外线损伤具有修复作用。实验结果可为后续临床治疗研究提供理论依据。

肿瘤相关巨噬细胞的极化与原发性胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤复发的相关性分析

目的:检测肿瘤相关巨噬细胞(TAM)分子表面标志物CD68、CD206在胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤(PGI-DLBCL)初诊和首次复发的表达变化,分析其变化与临床相关参数的关系,探讨TAM的极化在PGI-DLBCL复发中的作用。方法:收集28例PGI-DLBCL患者初诊和首次复发后淋巴瘤标本,采用免疫组织化学法分别检测TAM的分子标志物CD68和CD206的表达变化。根据CD68和CD206初诊至首次复发后表达的变化,将28例患者分为"增强"、"稳定"和"减弱"3种情况,分析其变化与临床病理参数、疾病复发的相关性。结果:CD68和CD206不同程度表达的病例所占比例间存在显著差异(P<0.05),且CD68和CD206间存在一定相关性(P=0.008)。CD68和CD206表达变化与患者年龄、性别、分期、有无B症状、病理类型、ECOG评分和IPI评分无关,CD206的表达变化与原发部位有关(P<0.05)。CD68(P=0.23)和CD206 (P=0.818)变化与肿瘤复发时间无关。结论:M2-TAM的极化促进了PGI-DLBCL复发,可能成为预测PG-DLBCL复发的相关指标。

低强度脉冲场超声促进人脂肪间充质干细胞的增殖和黏附

背景:间充质干细胞是目前组织工程和再生医学研究的热点之一,然而如何在体外进行干细胞的有效扩增以满足临床需求仍是研究者们面临的难题。目的:探讨低强度脉冲场超声对人脂肪间充质干细胞增殖和黏附的影响。方法:取第3代人脂肪间充质干细胞,在人脂肪间充质干细胞培养24,48,72 h时以0,10,30,50 mW/cm~2低强度脉冲场超声强度进行第1,2,3次刺激,每次刺激时间为5 min,刺激结束后将细胞置于培养箱继续培养24 h,然后采用CCK-8实验筛选最佳刺激条件。选用30 mW/cm~2强度刺激2次后的细胞为实验组进行后续实验,0 mW/cm~2刺激为对照组。流式细胞仪术检测细胞表面标志物;免疫组化染色观察细胞增殖相关抗原Ki-67和黏着斑激酶FAK的表达;RT-PCR检测细胞增殖通路相关基因Cyclin D1和c-myc的表达;转录组测序检测转录水平基因的变化。结果与结论:①30 mW/cm~2强度连续刺激2次是促进人脂肪间充质干细胞增殖的最佳条件;②与对照组相比,30 mW/cm~2低强度脉冲场超声刺激后细胞表面标志物未改变,增殖相关基因CyclinD1、c-myc和黏着斑激酶FAK表达上调;③转录组测序结果显示有27个基因出现显著性差异,其中15个基因上调,12个基因下调;④结果表明,低强度脉冲场超声通过上调CyclinD1、c-myc基因和FAK的表达,伴随转录组多个基因的调控,在细胞未分化的状态下,促进人脂肪间充质干细胞增殖。

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞增殖及抗癌活性的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL)增殖和抗肿瘤效应的影响。方法采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;将LIUPS强度0设为对照组,10 mW/cm^2组、20 mW/cm^2组、30 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组为刺激组刺激HPBL增殖,每天一次,每次刺激10 min,连续刺激2 d。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测抗肿瘤因子[γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]表达情况;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌95D细胞检测其抗肿瘤活性。结果 LIPUS刺激HPBL2 d共2次后,30 mW/cm^2组的细胞增殖能力增强,与对照组和其他强度刺激组比较,细胞数量和细胞团块数量均增多。CCK-8检测结果显示,30 mW/cm^2组光密度值与对照组、20 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组比较差异均有统计学意义(P=0.032、0.027、0.027、0.001)。抗肿瘤因子检测显示,30 mW/cm^2组INF-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF分别为(39.66±8.30)ng/L、(619.84±125.94)ρg/ml、(461.29±14.08)ng/L、(108.11±2.07)ng/L,均高于对照组[(24.40±6.84)ng/L、(279.56±128.18)ρg/ml、(417.17±21.44)ng/L和(96.53±1.56)ng/L]和50 mW/cm^2组[(16.52±0.87)ng/L、(141.00±93.71)ρg/ml、(171.96±9.46)ng/L、(72.56±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01)。共培养实验显示,30 mW/cm^2组人肺巨细胞癌95D细胞杀伤率为51.11%±5.21%,显著高于对照组(42.86%±0.55%)和50 mW/cm^2组(42.00%±3.67%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LIPUS刺激可提高HPBL的增殖活性和杀伤率。

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法。方法通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测。结果刺激组50 mW/cm^2和60 mW/cm^2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm^2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求。结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法。

海南省居民疟疾防治知识认知情况调查

目的了解海南省居民和学生对疟疾防治知识的认知情况。方法采用典型抽样方法确定调查对象,现场问卷调查疟疾高发区和非疟疾高发居民疟疾防治知识的知晓率及对疟疾防治的需求。结果对于疟疾是传染病、疟疾的典型症状、疟疾的预防及使用蚊帐防疟方面的认识,学生高于居民(P<0.01);疟疾高发区学生对于疟疾传播途径、疟疾的典型症状和疟疾预防方面的认知情况明显高于非高发区学生,而对于疟疾是传染病、确诊疟疾免费治疗以及药浸蚊帐好处方面疟疾高发区学生明显低于非高发区学生(P<0.01);疟疾高发区居民"家庭拥有药浸蚊帐"以及"没钱购买蚊帐"的情况明显高于非高发区居民,对于疟疾传播途径和使用蚊帐防疟方面的认识疟疾高发区居民明显低于非高发区居民(P<0.05);我省免费治疗疟疾的政策的知晓率和浸蚊帐的拥有率均仅约20%。结论海南省居民疟疾防治认知水平仍需进一步提高。

山西太原部分地区女性生殖道感染情况调查

目的:探讨女性盆腔解剖及妇女生殖生理、年龄、职业、宫腔操作与生殖道感染的关系。方法:对所有的调查对象填写统一的普查表,均行盆腔 B 超检查、妇科检查、阴道分泌物化验、阴道 pH 值测定、宫颈刮片巴氏染色法查异常细胞。对其结果进行统计分析。结果: 9 973人中,检出生殖道感染4 907例(49 2%),其中慢性宫颈炎3 253例(32. 6%),阴道炎1 050例(10. 5%),盆腔炎 594 例(5. 9%)。农村妇女及处于生殖、性活动高峰年龄妇女,有3次以上宫腔手术史的妇女生殖道感染的患病率明显增高,组间统计学处理均有显著差异。结论:生殖道感染已成为影响妇女健康的常见疾病,应加强卫生健康宣教,并采取相应的防治措施。

IL-29调节的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体表达分析

目的:检测白细胞介素(interleukin,IL)-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体(protease activated recep-tor,PAR)-1,2,3,4表达。方法:肥大细胞P815培养后以不同浓度的IL-29激发肥大细胞,在不同时间点收集细胞,给予透膜和非透膜处理后用流式细胞术检测肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29激发肥大细胞2、6和16 h后肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达与相应对照相比差异有统计学意义,而IL-29调节的膜表面PAR-1表达与胞浆内PAR-1表达相比,差异无统计学意义。IL-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达与相应对照相比,差异无统计学意义;而IL-29激发2 h肥大细胞膜表面PAR-2表达与胞浆内PAR-2表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发6 h肥大细胞膜表面PAR-3表达与胞浆内PAR-3表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发2、6和16h后肥大细胞膜表面PAR-4表达与胞浆内PAR-4表达相比,差异有统计学意义。结论:IL-29可以下调P815肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达,且IL-29引起的膜表面和胞浆内PAR-1表达无差异;尽管检测到PAR-2,3,4在膜表面和胞浆内的表达情况不同,但IL-29对膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达的调节作用不明显;流式细胞术检测的膜表面和胞浆内PARs表达结果均可反应IL-29调节的P815肥大细胞PARs表达情况。

双标细胞因子诱导的杀伤性细胞系构建

目的构建表达荧光素酶(Luc)及绿色荧光蛋白(GFP)双标细胞因子诱导的杀伤性(CIK)细胞系。方法体外原代培养C57BL/6小鼠CIK细胞,使用构建好的表达Luc及GFP的慢病毒载体包装重组慢病毒,感染培养第14天的CIK细胞,嘌呤霉素筛选2 w后,采用荧光倒置显微镜观察GFP表达情况,PCR、基因测序及体外活体成像系统对感染后的CIK细胞表达Luc进行验证。结果Luc-GFP-CIK双标细胞系构建成功,能够稳定表达Luc及GFP。荧光倒置显微镜观察显示转染后CIK细胞形态正常且表达GFP;PCR和测序结果显示转染后CIK细胞获得Luc基因;体外活体成像系统检测显示转染后CIK细胞表达Luc。结论初步构建了简便、安全的双标CIK细胞系,该方法便于普及,可为CIK细胞在体内的进一步研究提供前期基础和实验工具。

Klotho基因G-395A位点多态性与糖尿病肾病的关系

目的探讨Klotho基因G-395A位点多态性与糖尿病肾病的关系。方法选取单纯2型糖尿病患者147例(单纯糖尿病组)、糖尿病肾病患者98例(糖尿病肾病组)、健康志愿者100例(健康组),采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测各组Klotho基因G-395A位点多态性,采用多因素Logistic回归分析法分析糖尿病肾病发病的危险因素。结果经实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测,Klotho基因G-395A位点出现了AA、GA、GG三种基因型。健康组与单纯糖尿病组AA基因型分布明显低于糖尿病肾病组,GA基因型+GG基因型分布明显高于糖尿病肾病组(P均<0. 05);健康组与单纯糖尿病组AA基因型、GA基因型+GG基因型分布比较P均>0. 05。健康组与单纯糖尿病组A等位基因频数明显低于糖尿病肾病组,G等位基因频数明显高于糖尿病肾病组(P均<0. 05);健康组与单纯糖尿病组组A、G等位基因频数比较P均>0. 05。多因素Logistic回归分析显示,Klotho基因G-395A位点AA基因型分布增加是糖尿病肾病发病的危险因素(OR=2. 026,95%CI:0. 902~4. 552,P=0. 087)。结论 Klotho基因G-395A位点多态性与糖尿病肾病发病有关,该位点AA基因型分布增加可能是糖尿病肾病发病的独立危险因素。

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶在系统性红斑狼疮患者肾组织中的表达及临床意义

目的探讨活化诱导的胞嘧啶核苷脱氨酶(AICDA)在系统性红斑狼疮(SLE)患者肾组织中的表达及临床意义。方法收集2013年3月至2017年6月于中南大学湘雅医学院附属海口医院就诊的73例SLE患者和36例原发性膜性肾病(Ⅱ期)患者(对照组)肾穿刺活组织检查的肾组织,利用免疫组织化学染色方法检测肾组织中AICDA的表达水平。分析AICDA的表达与SLE患者临床病理参数(病理分型、系统受累情况、疾病活动度评分、治疗转归)的关系。结果 SLE患者肾组织中AICDA的表达水平高于原发性膜性肾病患者,差异有统计学意义(6.12±2.47 vs 3.33±1.91,P<0.05)。Ⅲ型(5.25±4.06)、Ⅳ型(6.88±2.20)、Ⅴ型(6.10±1.66)、Ⅲ+Ⅴ型(5.75±2.34)、Ⅳ+Ⅴ型(5.72±2.37)狼疮性肾炎患者间AICDA的表达水平差异无统计学意义(P均>0.05)。有口腔溃疡、间质性肺炎、神经系统损害、关节炎、血液系统损害和浆膜炎SLE患者肾组织中AICDA的表达水平分别高于无上述系统损害者(7.02±2.14 vs 4.17±1.97,7.86±2.39 vs 4.98±1.76,9.83±1.34 vs 5.39±1.92,6.88±2.04 vs 2.93±1.21,7.51±1.81 vs 3.70±1.23,7.29±2.33 vs 5.34±2.29;P均<0.01)。SLE疾病活动度评分越高,AICDA的表达越强,组间差异有统计学意义(P<0.01)。SLE完全缓解患者肾组织中AICDA表达低于未完全缓解患者,但差异无统计学意义(5.84±2.39 vs 6.80±2.56,P>0.05)。结论 AICDA与SLE的发生和发展有关,有望为SLE的治疗带来新的靶点。

DDX46基因慢病毒载体的构建及其在人膀胱癌细胞中的表达

目的构建DDX46基因低表达慢病毒载体,并检测其在人膀胱癌细胞中的表达效果,为DDX46基因在人膀胱癌细胞中的研究奠定基础。方法应用实时荧光定量检测5637细胞和T24细胞中DDX46 m RNA表达水平,以寻找合适的细胞系进行实验。分别以DDX46基因序列和普适型阴性序列为模板,设计合成靶点序列,并合成寡核苷酸双链,定向克隆到慢病毒质粒GV115,合成重组质粒sh DDX46和sh RNA,分别称之为实验组和对照组。将不同重组质粒与pHelper 1.0和pHelper 2.0分别转染293T细胞以包装成慢病毒颗粒后感染5637细胞和T24细胞。应用实时荧光PCR定量检测重组慢病毒感染5637细胞和T24细胞后DDX46 m RNA表达水平,判断其干扰效率。结果 5637细胞和T24细胞均高丰度表达DDX46m RNA,其结果(用ΔCt值表示)分别为(6.53±0.08)和(8.48±0.11);重组慢病毒感染膀胱癌细胞后,在5637细胞中,实验组DDX46 m RNA的表达水平(用ΔCt值表示)为(0.32±0.01),低于对照组(1.00±0.10),差异有统计学意义(P<0.05),其敲减效率为67.70%;在T24细胞中,实验组DDX46 m RNA的表达水平(用ΔCt值表示)为(0.11±0.01),低于对照组(1.00±0.03),差异有统计学意义(P<0.05),其敲减效率为89.00%。结论成功构建DDX46基因低表达慢病毒载体,为研究DDX46基因在膀胱癌细胞中的作用奠定了基础。