真菌激发子对灵芝液体发酵生产多糖和三萜类物质的影响

采用酸解法以3种食用菌病原真菌(木素木霉、蘑菇轮枝孢和顶头孢)为激发子菌株分别制备相应激发子,以不同浓度和不同时间添加到灵芝发酵培养基中,考察对灵芝多糖和三萜类物质积累的影响。其中顶头孢激发子无论是对灵芝多糖还是对灵芝三萜类物质积累的诱导作用都是三者中最好的,使灵芝多糖和三萜类物质的积累与对照组相比分别提高了6.1倍和5.2倍,且最佳作用浓度均为120μg/ml,最佳加入时间分别为灵芝发酵培养的中期(3d)和初期(0d);木素木霉激发子对灵芝多糖和三萜类物质积累的诱导作用次之,其产量分别是对照组的2.7倍和4.0倍,最佳作用浓度均为80μg/ml,并且最佳加入时间均为灵芝发酵培养的后期(5d);而蘑菇轮枝孢激发子对灵芝这两种活性物质积累的诱导作用是这3种激发子作用效果最弱的。另外,3种真菌激发子对灵芝生物量的积累也都产生了积极的影响,特别是木素木霉激发子以80μg/ml的浓度在灵芝发酵培养初期加入,可以使生物量的积累比对照增加2.3倍。研究结果表明,真菌激发子对灵芝多糖和三萜类物质的积累因激发子种类、浓度以及添加时间的不同而产生了不同的影响。

根癌农杆菌介导的木霉菌遗传转化方法

利用根癌农杆菌介导转化系统，成功实现了丝状真菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的遗传转化，转化率约为60～190个转化子／10^6个孢子。PCR检测和Southern杂交分析表明，T-DNA已整合进木霉菌基因组中，而且大多都是以单拷贝的形式整合，转化子都能够稳定遗传。农杆菌介导的遗传转化具有转化率高、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点，因此有可能成为丝状真菌遗传转化和功能基因组研究的有力工具。

影响根癌农杆菌介导的木霉菌遗传转化因素分析

采用根癌农杆菌介导的转化方法,以木霉菌分生孢子为受体材料,对影响转化效率的主要因素进行了分析。结果表明,农杆菌菌株类型、初始菌液量、分生孢子浓度、共培养时间以及乙酰丁香酮的诱导等因素对转化效率都具有重要的影响。通过对这些因素的分析,基本得出了根癌农杆菌转化系统对木霉菌遗传转化的特点和规律,为将该转化系统用于其它丝状真菌的遗传转化提供了重要参考。

野生灵芝的分子鉴定及富硒特性研究

从烟台昆嵛山分离到一株野生灵芝Gl-01,根据rDNAITS序列的系统发育分析,将其鉴定为赤芝(Ganodermalucidum(Fr.)Karst)。通过对这株野生灵芝在液体培养基中的耐硒能力测定以及不同培养时间的富硒特性考察,表明该野生灵芝菌株具有较强的富硒能力,其菌丝硒含量达到5.14mg/g,富硒率达到4.05%,分别为对照菌株SK5的2.4倍和1.5倍。

不同脂肪酸对桑黄液体发酵的影响

考察不同种类及质量浓度的脂肪酸对桑黄液体发酵的影响。结果表明:脂肪酸对桑黄菌体生长以及多糖、三萜和黄酮类物质的合成的影响随脂肪酸种类以及质量浓度的不同而表现出不同的变化趋势。油酸有利于桑黄生物量的积累,在质量浓度为2.0g/L时,使桑黄生物量达到1.24g/L,比对照提高了33.33%;而硬脂酸则有利于桑黄胞外多糖的产生,在质量浓度2.0g/L时,使胞外多糖产量达到325.38mg/L,是对照的3.20倍。对胞内多糖而言,油酸和硬脂酸诱导效果较好,分别在质量浓度0.5g/L和1.0g/L时,使产量达到645.79mg/L和655.12mg/L,而亚油酸则在高质量浓度时才表现出较好的诱导效果。对于桑黄三萜的生产而言,油酸无论是对胞外三萜还是胞内三萜,都表现出较好的诱导效果,并分别在质量浓度1.5g/L和2.0g/L时,使胞外三萜和胞内三萜产量达到666.15mg/L和339.32mg/L,分别为对照的1.28倍和2.30倍。此外,亚油酸还对胞内三萜的生产表现出较好的诱导效果。对于黄酮类物质的合成,本实验所考察的这几种脂肪酸均未表现出明显的促进作用。

根癌农杆菌介导的球毛壳菌遗传转化及T-DNA插入突变体的获得

根癌农杆菌介导的遗传转化系统是植物基因工程常用方法 ,目前已将这一转化系统应用到酵母、丝状真菌以及人类细胞的转化。利用这一转化系统 ,成功地实现了丝状真菌球毛壳菌 (Chaetomiumglobosum)的遗传转化 ,转化率约为 6 0～ 180个转化子 10 7个孢子。通过对转化子的PCR检测和Southern杂交分析表明 ,T DNA已整合进毛壳菌基因组中 ,而且在所检测的转化子中都是以单拷贝的形式整合 ,转化子都能够稳定遗传。根癌农杆菌介导的遗传转化具有转化率高、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点 。

根癌农杆菌介导的CryⅠA(b)基因在毛壳菌中的转化

利用根癌农杆菌介导的遗传转化方法,将CryⅠA(b)基因转入生物防治真菌毛壳菌中,转化率约为40～180个转化子·10-7个孢子。通过对转化子的RT-PCR检测和Southern杂交分析表明,CryⅠA(b)基因已整合进毛壳菌基因组中,而且在转录水平上得到表达,转化子都能够稳定遗传。根癌农杆菌介导的遗传转化具有高转化率、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点,因此有可能成为丝状真菌遗传转化和功能基因组研究的有力工具。

PEG-CaCl_2介导苏云金杆菌CryⅠA(b)基因转化哈茨木霉

为构建兼具杀虫防病双重功效的工程菌株，通过PEG-CaCl2介导的原生质体法将来自苏云金芽孢杆菌的CryIA（b）基因导入生防真菌哈茨木霉中．转化频率约为2～3个转化子／雌质粒DNA.Southern blot和RT-PCR检测结果表明，CryIA（b）基因已经整合到哈茨木霉基因组DNA中，并且在转录水平上得到了表达．各转化子都能够稳定遗传．对转化子的抑菌活性和杀虫活性检测结果表明，转化子不但保持了野生菌株的抑菌活性，而且表现出了一定的杀虫效果．转化子Tp1和Tp2对玉米螟幼虫的矫正死亡率分别为75．00％和72．75％．杀虫防病哈茨木霉工程菌株的构建为研究和开发新型微生物农药探索了新的诛径．

茶薪菇同时生产多糖和三萜类物质的发酵工艺

研究了茶薪菇同时高效生产多糖和三萜类物质的发酵工艺。在摇瓶中考察了培养基种类、初始接种量、初始pH值及不同装液量对茶薪菇菌体生长及多糖和三萜类物质生产的影响。结果表明,以第Ⅰ种培养基,在初始pH值为6.5,初始接种量为400mg/L,装液量为200mL时,可同时高效生产茶薪菇多糖和三萜类物质,并且产量分别达到2.10g/L和842.51 mg/L。

基于ERIC-PCR技术的部分灵芝栽培菌种亲缘关系分析

采用基于肠杆菌基因间重复性一致序列(ERIC-PCR)的技术对灵芝9个栽培菌株和1个野生菌株进行了亲缘关系分析。结果表明,ERIC-PCR技术能够有效地对供试灵芝菌株进行亲缘关系分析,各菌株间表现出较为丰富的遗传多样性。聚类分析表明野生菌株Gl01与各栽培菌株间亲缘关系最远,其次为菌株212,接下来为菌株919和717,而菌株Sk5和616相似水平达超过95%,表明这2个菌株可能为同株异名菌株。

T-DNA在丝状真菌中的插入突变及其应用前景

利用根癌农杆菌介导的转化系统已经在酵母菌和多个属种的丝状真菌成功建立起相应的T-DNA 插入突变体系,使之有可能成为真菌生理学、生物化学以及发育生物学相关理论研究的潜在工具.综述了丝状真菌质粒DNA转化和T-DNA转化的差别、T-DNA插入突变的主要特点和优点、T-DNA转化丝状真菌的方法以及T-DNA已转化的丝状真菌种类,并对T-DNA插入突变在丝状真菌中的应用前景进行了分析.

部分稀土元素对灵芝多糖和三萜类物质液体发酵的影响

研究5种稀土元素(镧(La)、铈(Ce)、钕(Nd)、镨(Pr)、铒(Er))对灵芝液体发酵生产灵芝多糖产量和灵芝三萜类物质的影响。结果表明:不同的稀土元素在适宜浓度时对灵芝多糖和灵芝三萜的产量均具有一定程度的促进作用。其中稀土元素镨对灵芝胞内多糖、胞外多糖和胞内三萜的生产促进作用最明显,分别在浓度为0.01、0.001mmol/L和0.1mmol/L时,使三者产量分别达到最高的772.56、452.76mg/L和398.49mg/L,分别是对照的4.67、3.05和1.91倍;而对于胞外三萜,0.001mmol/L的镧诱导效果最好,其产量达到610.08mg/L,是对照的2.03倍。可见适宜的稀土元素及浓度可显著提高灵芝多糖和灵芝三萜的生产。

秀珍菇菌株的亲缘关系分析

采用ERIC-PCR技术对12株秀珍菇菌株的亲缘关系进行分析,并与拮抗实验和酯酶同工酶实验进行对比。结果表明:在12株秀珍菇菌株中,ERIC-PCR扩增出的条带清晰,重复性好,多态性高。PCR产物大致在150～3500bp范围内,各菌株扩增条带数在9～16条之间。聚类分析表明,在79%的分类水平上,12个菌株聚成4组。MY灰和MY白菌株亲缘关系较近,聚为第1组;HZ845为第2组;HZ3、HZ5和HZ夏亲缘关系很近,聚为第3组;LD1、GY16、GY18、GY163、SM、XY秀1亲缘关系很近,聚为第4组。ERIC-PCR聚类分析结果与拮抗实验和酯酶同工酶分析结果基本一致,验证了ERIC-PCR技术的可靠性。

白灵菇不同菌株生物学特性的研究

本实验选用白灵菇的三个不同菌株白灵pL03-7、白灵PN-1和白灵PN-9为实验材料,比较了三者菌丝生长速度、菌丝体生物量及多糖含量,并进行了菌株间的拮抗性测定。结果表明,三个菌株间存在明显的遗传差异。白灵pL03-7的菌丝生长速度最快,日均长速为7.35mm;白灵pL03-7的菌丝体生物量最高,为1.0612g/150ml。白灵pL03-7、白灵PN-1和白灵PN-9的菌丝体多糖含量分别为63.80、73.93和72.29μg/mg。

外生菌根在森林生态系统中的重要性(Ⅰ)──外生菌根对宿主树木的影响

文章根据国内外的菌根文献资料，综述了外生菌根形成对宿主树木的影响。外生菌根对宿主树木的主要作用包括：外生菌粮能扩大树木根系的吸收面积和吸收范围、增强宿主树木对营养元素的吸收和利用．菌根菌还能通过合成植物激素来调节共生双方。菌根还能提高宿主树木的抗病性和抗逆性。

中国金顶侧耳菌株遗传多态性的ISSR分析

金顶侧耳是重要的食药用真菌。本实验收集全国各地18种金顶侧耳菌株,通过ISSR分子标记技术分析金顶侧耳菌株种内遗传多态性,11种引物扩增出102个条带,其中78个条带具有多态性,多态率为76.4%。结果表明,金顶侧耳菌株内具有丰富的遗传多样性,遗传相似系数在0.50～0.96。采用平均分类法UPGMA分析表明,在遗传相似系数为0.62时,18种菌株分为两大类。当遗传相似系数增大到0.75时,它们分为7类。16号菌株具有独立的遗传体系。

不同脂肪酸对灵芝液体发酵的影响

研究硬脂酸、亚油酸和棕榈酸对灵芝液体发酵的影响。结果表明,3种供试脂肪酸都能促进灵芝菌丝体生物量的积累;硬脂酸有利于灵芝胞外多糖的产生,在添加浓度为1.0g/L时,胞外多糖量达到(1 066.74±11.27)mg/L,是对照的3.37倍;亚油酸利于胞内多糖的合成,在浓度为1.5g/L时,胞内多糖量达到(620.90±7.11)mg/L,是对照的2.56倍;另外,亚油酸还对灵芝胞内三萜和胞外三萜量表现出较强的促进作用,在浓度为2.0 g/L时,胞内及胞外三萜量分别达到(394.23±10.32)mg/L和(551.32±6.22)mg/L,分别比对照提高了1.13和1.12倍;而硬脂酸和棕榈酸的添加则降低胞内和胞外三萜的量。

植物细胞培养中天然植物成分生产在工业上的应用

对工业上利用植物细胞培养技术生产天然的植物成分即植物次生代谢产物进行了介绍 ,包括植物细胞培养生产植物次生代谢物质的特点、研究方法、研究历史、研究现状以及基因工程在该领域的应用和大规模工厂化生产的前景。

灵芝漆酶高产菌株的筛选及产酶诱导

通过对灵芝1个野生菌株和9个栽培菌株进行平板初筛和液体发酵复筛,得到一株漆酶高产菌株。以该菌株为研究对象,分别考察了不同浓度Cu2+和真菌诱导子对其产漆酶的影响。结果表明:在一定浓度范围内,Cu2+能够促进该灵芝菌株漆酶的生产,当Cu2+浓度为1.0 mmol/L时,灵芝漆酶的活性达到最高;真菌诱导子同样能够显著促进灵芝漆酶的生产,随着真菌诱导子浓度的升高,灵芝漆酶的活性也逐渐升高,当真菌诱导子浓度达到120μg/mL时,灵芝漆酶活性达到最高。

低温对青萍生长及保护酶活性影响的研究

研究了在相对低温(10～12℃)的条件下,青萍生长和保护酶活性的变化。测定了叶状体数目相对增长率、鲜重相对增长率、根长、叶绿素含量、可溶性蛋白含量以及抗氧化酶系统的几种酶活性和含量的变化(包括过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量)。研究结果显示:在10～12℃的情况下,青萍生物量的增加基本为零,叶绿素和可溶性蛋白的含量均降低,细胞内保护酶的调节功能发生了紊乱。在10～12℃的低温下,青萍已经不具有修复富营养化水体的能力。