BD-77雾化吸入给药对肺炎支原体感染小鼠的治疗作用

目的评价BD-77雾化吸入给药对肺炎支原体肺炎小鼠模型的治疗作用。方法Balb/c小鼠按照体质量随机分为正常对照组、模型对照组、阿奇霉素对照组(42 mg·kg^(-1)·d^(-1))、BD-77高剂量组(75 mg·mL^(-1),雾化15 min)、BD-77低剂量组(37.5 mg·mL^(-1),雾化15 min)。以肺炎支原体滴鼻感染建立小鼠支原体肺炎模型,雾化给药4 d后,通过小鼠体重及肺重计算肺指数和肺指数抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及血清中C反应蛋白(CRP)水平,苏木精-伊红(HE)染色评估小鼠肺组织病理学变化,全面评价BD-77对小鼠支原体肺炎的治疗作用。结果BD-772个剂量组雾化吸入给药15 min均可显著降低小鼠肺指数,减轻肺部炎症病变,降低肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α含量及血清CRP水平。结论BD-77雾化吸入可治疗支原体感染小鼠肺炎,本研究为BD-77开发作为防治肺炎支原体肺炎的药物提供了实验室数据支持。

姜虎汤对结缔组织病相关间质性肺病模型小鼠免疫炎性损伤的影响

[目的]探讨姜虎汤对博来霉素(BLM)诱导结缔组织病相关间质性肺病(CTD-ILD)模型小鼠肺间质病变的影响。[方法]采用SPF级雄性C57/BL6小鼠,经BLM(2 mg/kg)气管内滴注诱导间质性肺病模型,将造模成功的30只小鼠随机分为模型组6只、阳性药组6只、姜虎汤高、中、低剂量组各6只,另选6只未造模小鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组予蒸馏水10 mL/(kg·d),阳性药组予泼尼松7.5 mg/(kg·d),姜虎汤高、中、低剂量组分别予姜虎汤26.66、13.33、6.67 g/(kg·d)剂量灌胃给药,其中姜虎汤高剂量组每日分2次灌胃给药。干预4周后处死小鼠,采集肺组织标本。以苏木精-伊红染色法(HE)观察肺组织病理改变;蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、单磷酸腺苷(AMP)活化蛋白激酶α1(AMPKα1)、磷酸化AMPKα1(pAMPKα1)蛋白表达水平。[结果]模型组小鼠较正常对照组有明显病理改变(P<0.01),主要表现在肺组织炎症细胞浸润、间质纤维化;阳性药组肺组织炎症病变较模型组有改善(P<0.05);姜虎汤中、低组小鼠肺组织炎症细胞浸润较模型组有改善(P<0.05),姜虎汤高、中、低剂量组小鼠肺组织间质纤维化较模型组有改善(P<0.05)。Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.01),TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),AMPKα1、pAMPKα1蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,姜虎汤中、低剂量组小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05),姜虎汤高剂量组小鼠肺组织TGF-β1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),阳性药组小鼠肺组织中AMPKα1蛋白表达水平明显上调(P<0.05),姜虎汤高剂量组小鼠肺组织中pAMPKα1蛋白表达水平明显上调(P<0.05);与阳性药组比较,姜虎汤高剂量组小鼠肺组织中TGF-β1蛋白表达水平明显下调(P<0.05);姜虎汤各剂量组间比较,姜虎汤高剂量组TGF-β1蛋白表达水平与姜虎汤中剂量组差异明显(P<0.05)。[结论]姜虎汤中、低剂量组在改善小鼠肺组织炎症病理损伤,及抑制免疫炎性因子高表达的作用更具优势;姜虎汤高剂量组在改善小鼠肺组织间质纤维化、抑制纤维化生成因子高表达及上调免疫炎性抑制因子的作用更强。其分子机制可能与激活AMPK,从而抑制HMGB1/NF-κB/TGF-β1免疫炎性信号通路相关。

基于蛋白质芯片技术筛选与甲型流感病毒NS1蛋白互作的宿主因子及通路分析

目的筛选出与流感病毒Non-structural protein 1(NS1)蛋白结合的人类宿主蛋白并加以分析,确定这些结合蛋白富集的方向及关键蛋白,为抗流感病毒的新药研发提供思路。方法将NS1样本、Biotin样本分别与HuProt^(TM)人类蛋白质组芯片进行杂交孵育,以两重复均满足Z-Score≥3为筛选条件对与NS1蛋白有结合的宿主蛋白进行筛选得到特异性检出蛋白,实验组(NS1蛋白)与对照组(Biotin)比值I Mean_Ratio≥1.4为条件筛选出显著特异性检出蛋白。用检出的195个蛋白进行GO(Biological Process,Molecular Function,Cellular Component)和KEGG_PATHWAY分析,通过蛋白-蛋白相互作用(PPI)及MCODE分析得到关键蛋白。结果获得显著特异性检出蛋白195个,GO分析结果显示这些蛋白主要参与了mRNA加工、RNA结合、蛋白结合,KEGG分析主要富集到RNA降解、氨基酸的生物合成等通路。得到的4个关键蛋白DDX6、HSPD1、PKLR、MTHFD1中DDX6与RNA的合成、翻译等过程相关,而NS1蛋白可以通过调控流感病毒RNA和宿主RNA促进病毒的感染,推测DDX6可能在该过程发挥作用;其他3个蛋白目前虽然没有明确的研究指明其与流感病毒有关系,但是能在其他RNA病毒的感染过程中发挥作用。结论与NS1结合的人类蛋白主要富集到RNA合成、加工、转录等过程中,MCODE分析得到的关键蛋白有潜力成为抗流感病毒新的靶点,但作用机制需要后续实验进行进一步验证。

液质联用技术鉴定至宝三鞭丸化学成分

目的建立HPLC-LTQ-Orbitrap MS和HPLC-QQQ MS/MS法分析至宝三鞭丸化学成分。方法采用分段供试品制备的前处理方式、高分辨质谱数据依赖的采集模式、HPLC-MS/MS靶向成分采集等综合研究策略鉴定成分。分析采用Waters BEH HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI);正负离子扫描。结果共鉴定出82个化合物,包括有机酸类18个、黄酮类17个、萜类及皂苷类11个、色原酮类8个、苯乙醇苷类4个、生物碱类3个、香豆素类3个、木脂素类2个、蒽醌类2个,其中30个通过与对照品保留时间及碎片离子信息比对而确认。结论本研究初步鉴定了至宝三鞭丸化学成分,为该制剂质量控制、作用机制研究提供了有力的支撑。

颅痛宁颗粒对眶下神经缩窄环术诱导三叉神经痛大鼠的治疗作用研究

目的研究颅痛宁颗粒对三叉神经痛模型大鼠的治疗作用,为其临床应用提供参考资料。方法采用眶下神经缩窄环术(ION-CCI)制备大鼠三叉神经痛模型,大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、卡马西平阳性药组、颅痛宁高剂量组(2.70 g生药·kg^(-1)·d^(-1))、颅痛宁低剂量组(1.35 g生药·kg^(-1)·d^(-1))。Von Frey毛刷测定大鼠触须垫机械痛阈值,生化法检测血液血流变和凝血功能,HE染色观察眶下神经病理变化,Western blot技术检测三叉神经内P38和P-P38的蛋白水平。结果颅痛宁颗粒能提高模型大鼠的痛阈值(P<0.05,P<0.01)降低模型大鼠血浆黏度(P<0.05,P<0.01)和全血还原黏度(P<0.05,P<0.01),提高模型大鼠血流变能力;提高模型大鼠血液凝血酶原时间(prothrombintime,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplatin time,APTT)和凝血酶时间(thrombin time,TT)水平(P<0.05,P<0.01),降低模型大鼠纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)水平(P<0.01),改善凝血功能;改善模型大鼠眶下神经的病理改变;并降低模型大鼠三叉神经内P-P38的表达量(P<0.01)。结论颅痛宁颗粒具有改善三叉神经痛作用,可能与其活血化瘀功能有关。

葛根汤颗粒对甲型流感病毒感染小鼠TNFR1/NF-κB/JNK等炎症和免疫指标的影响

目的基于PR8感染所致病毒性肺炎小鼠模型,探寻葛根汤颗粒抗流感病毒性肺炎损伤的作用机制。方法32只雌性SPF级ICR小鼠随机分为空白组、模型组、奥司他韦组、葛根汤颗粒组,每组8只。滴鼻法建立PR8毒株感染所致病毒性肺炎小鼠模型,计算肺指数和肺指数抑制率,应用光镜观察各组肺组织病理变化,运用ELISA和Western blotting法检测各组肺组织炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM1)和炎性免疫蛋白人肿瘤坏死因子受体-1(TNFR1)、核转录因子-κB(NF-κB)、Jun氨基末端激酶(JNK1)表达情况。结果与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可降低小鼠肺指数(P<0.001),葛根汤颗粒组对肺指数抑制效果优于奥司他韦组。病理提示,与模型组比较,葛根汤颗粒组可显著减轻支气管炎症反应渗出,减轻肺泡、肺间质和红细胞渗出。ELISA结果显示,与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可显著降低IL-6、ICAM1、VCAM1的表达(P<0.001);与奥司他韦组相比,葛根汤颗粒组IL-6含量降低(P<0.01)。Western blotting结果显示,与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可降低TNFR1、JNK1蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),葛根汤颗粒可降低NF-κB蛋白的表达(P<0.05)。结论葛根汤颗粒可以降低甲型流感病毒感染小鼠肺组织中IL-6、ICAM1、VCAM1、TNFR1、NF-κB、JNK等炎性因子和炎性免疫蛋白的表达,调节炎症和免疫紊乱,为仲景经典处方临床应用提供基础理论依据。

散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E和OC43感染致小鼠肺炎的作用机制研究

目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂量组,高剂量为11 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药52.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量为5.5 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药26.4 g·kg^(-1)·d^(-1))、低剂量为2.75 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药13.2 g·kg^(-1)·d^(-1))。使用人冠状病毒229E和OC43感染小鼠,建立肺炎模型。通过检测肺指数和肺部病理变化等指标评价散寒化湿颗粒对冠状病毒肺炎小鼠的药理作用。结果散寒化湿颗粒在高、中、低3个剂量组均能有效降低小鼠的肺指数,并减轻肺组织的病理损伤。结论散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43感染致小鼠肺炎均具有治疗作用。

金振口服液对流感病毒H1N1/FM1株和副流感病毒感染致小鼠肺炎的药理作用

目的考察金振口服液对流感病毒H1N1/FM1和副流感病毒感染所致的小鼠肺炎药理作用,为金振口服液的临床应用提供一定的参考。方法采用流感病毒H1N1/FM1和副流感病毒滴鼻感染小鼠造模,考察金振口服液高、中、低剂量组(生药8、4、2 g·kg^(-1)·d^(-1))对小鼠的肺指数、肺组织病理变化和死亡保护作用,并设西药磷酸奥司他韦颗粒、利巴韦林颗粒和中成药小儿热速清口服液作为阳性对照药。结果金振口服液3个剂量组均可不同程度的降低小鼠肺指数、减轻肺组织病理损伤,并对小鼠具有死亡保护作用。结论金振口服液对流感病毒H1N1/FM1和副流感病毒感染所致的肺炎小鼠具有治疗作用。

利用噬菌体随机肽库对神经胶质瘤母系SWO-38进行全细胞筛选

目的和方法 :用噬菌体随机 7肽库对神经胶质瘤母细胞 (SWO - 38)进行全细胞筛选 ,并通过竞争结合实验检验所筛选出的克隆的结合特异性。结果 :经过 3轮“吸附 -洗脱 -扩增” ,噬菌体高度富集 ,并得到两个特异性较强的克隆。结论 :利用噬菌体肽库可以简便。

LN,FN,bFGF及EGFR与肺癌转移

目的 探讨层粘连蛋白（laminin,LN）、纤维粘结蛋白（fibronectin,FN）、碱性成纤维生长因子（basic fibroblastgrowth factor,bFGF）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与转移的关系。方法 用免疫组化SP法检测62例NSCLC。结果 肺癌LN,FN,bFGF及EGFR的阳性表达率分别为58％（36/62）,84％（52/62）,66％（41/62）及73％（45/62）;I,Ⅱ级肺鳞癌的LN的表达强度明显不同于Ⅲ级者（P<0.05）,LN的表达强度在有无淋巴结转移的两组鳞癌间比较,差异有显著性（P<0.05）;不同分级的肺腺癌间FN的表达强度不同（P<0.05）,bFGF及EGFR的表达强度在有无淋巴结转移的两组肺癌间差异有显著性。结论LN,FN,bFGF及EGFR与非小细胞肺癌的分期、分级及转移密切相关。

噬菌体肽库应用的研究进展

Phage peptide libraries are collections of the specific length of short peptides,and they are based on phages as their carriers.They include mimotope libraries and peptide antibody libraries.Phage-displayed peptide libraries have been used to isolate specific ligands for numerous protein targets,and they have been proven useful in defining antigen momitopes,rapid determination of binding energetics at protein-protein interfaces,designing of vaccine and tumor research aspects.This review summarized the research progression of phage peptide library.

清开灵和生脉注射液联合用药对油酸型急性肺损伤家兔的治疗作用

目的:观察静脉注射清开灵、生脉注射液(生脉)及其联合用药对油酸型急性肺损伤(ALI)家兔的影响。方法:家兔随机分为11组:对照组,油酸组,治疗组分别包括清开灵和生脉以及清开灵+生脉小、中、大剂量组。iv油酸(0.05mL·kg-1)复制家兔ALI模型后,立即iv上述药液,观察给予油酸前及以后30,60,120min时的呼吸频率和幅度,于各时间点测定动脉血气含量;实验后处死家兔取肺组织,测定肺组织LDH,CAT,MDA的含量及观察病理变化。结果:与油酸组比较,清开灵、生脉及清开灵+生脉的小、大剂量组的呼吸幅度均显著升高;清开灵+生脉小剂量组PaO2显著升高(P<0.05),清开灵、生脉及清开灵+生脉小剂量组的PaCO2均显著降低(P<0.05);清开灵、生脉各剂量组的MDA均显著降低,清开灵+生脉小剂量组的MDA显著降低、CAT显著增加;清开灵、生脉及清开灵+生脉小剂量组可以减轻油酸引起的病理改变。结论:清开灵+生脉小剂量对油酸型肺损伤家兔的疗效优于同剂量下的单独用药。

清开灵和甲基强的松龙注射液联合用药对油酸型急性肺损伤家兔的治疗作用

目的:观察静脉注射清开灵、甲基强的松龙(MP)注射液及其联合用药对油酸型急性肺损伤(ALI)家兔的影响。方法:家兔随机分为11组:对照组,油酸组,治疗组分别包括清开灵和MP注射液以及清开灵+MP注射液小、中、大剂量组。iv油酸(0.05mL·kg-1)复制家兔ALI模型后,立即iv上述药液,观察给予油酸前及以后30,60,120min时的呼吸频率和幅度,于各时间点测定动脉血气含量;实验后处死家兔取肺组织,测定肺组织LDH,CAT和MDA的含量,及观察病理变化。结果:与油酸组比较,清开灵和MP注射液小、中、大剂量组的呼吸幅度显著升高、呼吸频率显著降低(P<0.05);治疗30min时,清开灵+MP注射液小、大剂量组的PaO2显著升高(P<0.05),120min时,清开灵、MP及清开灵+MP注射液小、中和大剂量组的PaCO2显著降低(P<0.05);清开灵、MP注射液中、大剂量组的LDH显著升高、CAT和MDA显著降低(P<0.05);清开灵+MP小、中剂量组可以减轻由油酸引起的病理改变。结论:清开灵+MP小剂量对油酸型肺损伤家兔的疗效优于同剂量下的单独用药;而清开灵或MP大剂量单独给药的疗效优于同剂量下的联合用药。

栀子对大鼠肝肾毒性的病理学观察

目的:观察栀子不同提取物所致的大鼠肝、肾病理学变化。方法:灌胃给药3 d后,解剖大鼠,肝、肾组织称重,福尔马林固定,HE染色,光镜下病理学观察。结果:栀子水提物、醇提物、京尼平苷大剂量组肝重量增加,指数增大,与空白组相比(P<0.001),肾脏重量轻度增加;光镜下可见各给药大剂量组肝细胞明显肿胀变性,部分肝细胞坏死,汇管区有大量的毛细胆管增生;肾曲管不同程度肿胀。结论:大剂量的栀子水提物、醇提物及京尼平苷导致明显的肝、肾病理学改变,具有肝、肾毒性。

广防己致大鼠慢性肾小管-间质损伤的实验研究Ⅰ

目的: 观察广防己醇提取物(RAFE)急性以及不同剂量的RAFE对肾脏慢性毒性。方法:采用常规的急性毒性实验方法和用不同剂量的RAFE(2 5 . 0 ,12 .0 0 ,2 0 0. 0mg·kg-1·d-1)以及马兜铃总酸(10. 0mg·kg-1·d-1)给大鼠间断灌胃13周,分别于给药第4 ,8,13周留取血、尿和肾组织标本,检测相关肾功能和组织学变化。结果:RAFE的LD50 为36. 8g·kg-1,LD50 95 %可信限为38 .8～2 .8 .9g·kg-1;不同剂量的RAFE作用早期,大鼠肾功能改变为氮质血症、大量蛋白尿以及尿NAG酶升高。肾脏组织形态学:中、大剂量和总酸组给药早期主要表现以皮髓质交界为主的急性肾小管坏死,而后可见部分动物肾间质纤维化。结论:NAG可作为大鼠早期肾功能损伤的观测指标之一;RAFE中、大剂量间断灌胃13周均可导致大鼠肾小管功能损害。

GSK-3β、Snail和E-cadherin在三阴乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨GSK-3β、Snail和E-cadherin在三阴乳腺癌(TNBC)中表达及意义。方法选择2006年9月至2013年9月收治的48例TNBC患者作为观察对象即TNBC组,并随机选出60例非TNBC患者作为对照即NTNBC组,应用免疫组织化学SP法检测GSK-3β、Snail和E-cadherin的表达情况,并进行统计分析。结果 TNBC组GSK-3β、Snail的阳性表达率显著高于NTNBC组(P<0.05),E-cadherin的阳性表达率显著低于NTNBC组(P<0.05)。GSK-3β与Snail表达呈正相关(P<0.05),与E-cadherin表达呈负相关(P<0.05)。结论 Snail、GSK-3β、E-cadherin可能共同参与乳腺癌上皮间质转化过程,可成为综合评价TNBC的重要标志物。

利用激光扫描共聚焦显微镜的肿瘤血管在体成像研究

传统的观察血管的方法需将组织制成切片,然后通过光学显微镜进行观察。显示的只是血管的某一片段,而无法观察到血管的全貌。应用激光扫描共聚焦显微镜,可对活体动物血管进行断层成像,从而再现血管的结构。本方法为对肿瘤等病变组织血管进行研究提供了一种新的检测手段。

乳腺癌MCF-7细胞的增殖及周期与CDK2-AP1基因的表达的相关性研究

目的探讨乳腺癌MCF-7细胞的增殖及周期与CDK2-AP1基因的表达的相关性研究,为临床乳腺癌的分子治疗提供基础。方法取我院研究所保存的人乳腺癌细胞MCF-7进行培养,并构建CDK2-AP1基因编码的病毒表达载体,应用实时定量PCR验证CDK2-AP1基因mRNA和蛋白的表达率。利用流式细胞仪检测MCF-7细胞周期的改变。结果过表达CDK2-AP1基因的慢病毒感染MCF-7细胞可上调其mRNA表达6.87倍。MCF-7细胞过表达CDK2-AP1基因后,增殖能力显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测证实MCF-7细胞过表达CDK2-AP1能够使细胞周期出现G1期阻滞。结论 CDK2-AP1基因具有抑癌基因的功能,在乳腺癌MCF-7细胞过表达该基因能够抑制细胞的生长和克隆形成能力,并且使细胞阻滞于G1期。

艾康片减轻环磷酰胺心脏毒性研究

目的:评价艾康片对环磷酰胺引起的心脏毒性的保护作用。方法:将40只BALB/c-nu小鼠随机分为正常组、模型组及艾康片高、中、低剂量组,每组8只。除正常组外,其余各组腹腔注射环磷酰胺0.3 g/kg制备环磷酰胺心脏毒性模型,每周1次,连续2周。模型制备当天,艾康片高、中、低剂量组按20 mL/(kg·d)的剂量分别灌胃浓度为0.046 g/mL、0.023 g/mL、0.012 g/mL的艾康片溶液,每天1次,连续给药2周;正常组、模型组在相同条件下灌胃等体积蒸馏水。检测各组小鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)含量;计算心脏指数;HE染色观察心脏病理学改变。结果:与正常组比较,模型组小鼠心脏指数及血清LDH、HBDH均升高(P<0.05),心肌细胞肥大、心肌细胞变性、炎症细胞浸润Rank值及个体评分均增加(P<0.01)。与模型组比较,艾康片高、中、低剂量组心脏指数、血清LDH、HBDH均降低(P<0.01);艾康片高剂量组心肌细胞肥大Rank值及个体评分降低(P<0.05);艾康片中剂量组心肌细胞肥大、心肌细胞变性、炎症细胞浸润Rank值及个体评分均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:艾康片对环磷酰胺引起的心脏毒性有保护作用。

雾化吸入给药BD-77对呼吸道合胞病毒感染及LPS致小鼠肺炎的治疗作用

评价BD‐77雾化吸入给药对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)及脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)致小鼠肺炎的治疗作用,为BD‐77的进一步开发提供实验依据。建立RSV及LPS滴鼻感染致小鼠肺炎模型,采用肺指数、肺指数抑制率、病毒载量、肺组织炎症因子等指标评价BD‐77的药理作用。BD‐77雾化吸入给药75 mg·mL^(‐1)、37.5 mg·mL^(‐1)两个剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺指数、病毒载量和炎症因子释放。BD‐77静脉注射150 mg/(kg·d)、75 mg/(kg·d)两个剂量组对LPS引起的小鼠肺炎具有保护作用。BD‐77对RSV及LPS致小鼠肺炎均具有显著的保护作用。