TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管癌上皮间质转化中的作用

【目的】探讨TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管鳞癌上皮间质转化(EMT)中的作用及其机制。【方法】运用免疫组织化学方法检测50例哈萨克族食管鳞癌组织及远端对应癌旁组织中TGF-β1与Smad7蛋白的表达。进一步在细胞水平,针对食管鳞癌细胞系Ec9706,基于RNA干扰技术,使用Lipofectamine TM 2000试剂转染TGF-β1 si RNA。采用q RTPCR技术检测TGF-β1及Smad7 m RNA表达水平;Western blot技术检测转染后各组TGF-β1、Smad7以及EMT相关蛋白表达水平;MTT、划痕及流式细胞术等方法检测各组细胞转染后的增殖、迁移、凋亡及周期的变化。【结果】免疫组化检测结果显示,哈萨克族食管鳞癌组织中TGF-β1蛋白表达明显高于癌旁组织(P<0.05);Smad7蛋白在食管鳞癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05)。转染TGF-β1 si RNA后,Ec9706细胞中TGF-β1 m RNA和蛋白表达量均降低,Smad7 m RNA和蛋白表达量增加;上皮标志物E-cadherin表达量增加,间质标志物Vimentin表达量降低,同时Ec9706细胞增殖、迁移受到抑制,细胞凋亡增加,细胞周期发生G0/G1期阻滞。【结论】哈族食管鳞癌中存在TGF-β1/Smad7信号通路的激活,食管癌中TGF-β1高表达,抑制了Smad7的表达,从而促进了上皮间质转化过程,进一步促进了食管癌细胞的增殖和迁移,并抑制细胞凋亡,影响细胞周期中的G0/G1期。

PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca 109中的功能

目的:探讨PIK3CA在食管鳞癌细胞系Eca109中的作用.方法:用脂质体介导siRNA瞬时转染Ecal09细胞,转染细胞分为3组:空白对照组(正常培养的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列的siRNA)及实验组(转染PIK3CA-siRNA).运用Western blot技术检测PIK3CA基因干扰后蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和细胞划痕实验检测PIK3CA干扰后Eca109细胞增殖和迁移能力的改变;流式细胞仪检测PIK3CA干扰后细胞周期和凋亡率的变化.结果:干扰PIK3CA基因表达后,其蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组显著性降低(P<0.05).MTT实验和划痕实验显示干扰PIK3CA的表达后,Eca109细胞增殖受到显著性抑制(P<0.05),迁移能力显著性降低(P<0.05).流式细胞仪检测下调P I K3C A的表达后细胞周期阻滞在细胞分裂的S期(P<0.05),且使细胞凋亡率显著性增加(P<0.05).结论:PIK3CA基因能够促进Eca109细胞的增殖和迁移能力,并具有抗凋亡作用.PIK3CA基因有望成为食管鳞癌治疗的潜在靶点.

哈萨克族食管癌中高迁移率蛋白A2的表达及其与上皮间质转化的相关性．

目的探讨高迁移率蛋白A2（HMGA2）在哈萨克族食管癌中的表达并分析其对上皮间质转化（EMT）的调控作用。方法免疫组织化学SP法检测72例新疆地区哈萨克族食管癌患者癌组织及癌旁组织中HMGA2及EMT相关蛋白Snail、上皮钙黏素的表达，并分析三者与食管癌浸润、转移等临床病理参数的相关性。采用McNemar检验和卡方检验进行率的比较，Spearman法进行相关性分析。结果HMGA2及Snail在72例食管癌患者癌组织中的表达阳性率分别为83．3oA（60／72）、45．8％（33／72），明显高于二者在癌旁组织中的表达（52．8％，38／72，McNemar检验，P〈0．01；29．2％，21／72，McNemar检验，P〈O．05），同时HMGA2与Snail在癌组织中的表达呈正相关（r=0．262，P〈0．05）。上皮钙黏素在癌组织中的表达阳性率为40．3％（29／72），明显低于其在癌旁组织中的表达（72．2％，52／72，McNemar检验，P〈0．01）。Snail的表达与肿瘤浸润深度相关，肿瘤侵犯至食管外膜及周围组织的患者Snail表达率显著高于仅侵犯至黏膜层及肌层的患者（X2=5．308，P〈0．05），上皮钙黏素的表达与患者的年龄及肿瘤分化程度相关，年龄〈58岁（X2=3．952，P〈0．05）、分化程度较高（X2=8．080，P〈0．05）者上皮钙黏素的表达率较高。结论HMGA2、Snail在哈萨克族食管癌患者癌组织中显著高表达，上皮钙黏素呈低表达，提示EMT可能参与了哈萨克族患者食管癌的发生、发展。

p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究

目的探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在食管鳞癌细胞Ecal09中的可能作用。方法构建p38ct特异性的shRNA干扰载体，瞬时转染Ecal09细胞，运用qRT—PCR、免疫印迹分别检测p38ct干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果；运用MTr和流式细胞仪检测p38ct干扰后Ecal09细胞增殖，细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变。作为平行反向验证，转染含有p38c~全长cDNA的真核过表达质粒，运用免疫印迹检测p38ct过表达后在蛋白水平上的表达效果；运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖，细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38ct的变化后细胞迁移能力的改变。结果p38ct基因在受干扰后，测定其蛋白水平表达水平（22．970±2．857）较空质粒组（35．658±2．286）降低，差异具有统计学意义（t=-4．475，P〈0．01）。观察Ecal09细胞的增殖变化，发现干扰48h后吸光度值（0．951±0．086）大于对照组细胞（0．811±0．012）（t=3．20，P〈0．05），表明Ecal09细胞增殖加快。观察细胞周期和凋亡变化发现，干扰48h后凋亡率（17．400±5．495）较空质粒组（1．000±O．721）增加（t=40．06，P〈0．01）；干扰72h后细胞迁移速度（0．034±0．031）较空质粒组（0．278±0．021）加快（t=-5．79，P〈0．01），表明浸润能力增加。p38ct在过表达后，检测到其内源性p38α蛋白表达水平（41．1704-2．357）高于对照组（35．658±2．286）（t=4．41，P=0．005）；48h过表达组吸光值（0．472±0．089）与对照组细胞吸光值（0．81l±0．012）相比，细胞增殖受到抑制（t=-7．50，P〈0．01），细胞生长活动在Gl期受阻（t=4．80，P〈0．01），并且其细胞凋亡（32．233±1．457）高于空质粒组（1．000±0．721）（t=17．20，P〈0．01），细胞迁移[（0．770±0．054）mm]较空质粒组[（0．278±O．021）mm]减慢并且浸润受到抑制（t=11．00，P〈0．01）。结论p38αMARK抑制食管鳞癌细胞Eeal09的发生发展过程。