葛根素对大鼠局部脑缺血再灌注损伤皮层钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性的影响

目的 探讨葛根素在局灶性脑缺血 /再灌注过程中抗神经元凋亡的作用及机理。方法 采用大鼠局灶脑缺血模型 ,观察脑缺血 /再灌注后皮层钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性的变化。结果 脑缺血 /再灌注可以导致皮层钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性增加 ,葛根素可降低皮层钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性。

葛根素对局灶性脑缺血/再灌流大鼠神经细胞凋亡的作用

目的 研究葛根素在局灶性脑缺血 /再灌流过程中对神经细胞凋亡的作用。方法 测定葛根素干预后局灶性脑缺血鼠脑组织中神经细胞凋亡和突触体钙浓度。结果 葛根素有减少突触体钙超载和神经元阳性凋亡细胞出现率的作用。结论 葛根素有一定的抗神经细胞凋亡的作用 。

骨髓间质干细胞对血管性痴呆大鼠长时程增强的影响

目的采用神经电生理方法观察静脉注射骨髓间质干细胞(marrowstromalcell,MSC)对血管性痴呆(vasculardementia,VD)大鼠脑长时程增强(long-termpotentiation,LTP)的影响。方法体外分离培养、扩增成年大鼠MSC。利用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型,检测注射MSC后30,60d海马齿状回LTP变化。结果造模30和60d后,VD大鼠LTP诱导率(25%,38%)、群体电位(PS)平均振幅犤(0.91±0.13),(1.02±0.11)mV犦与正常对照组犤88%,(1.31±0.12),(1.36±0.14)mV犦相比差异有显著性意义(χ2=4.2～16.25,P<0.01)。静脉注射MSC后30和60d,VD大鼠LTP诱导率(50%,63%)、LTP振幅犤(1.21±0.11),(1.32±0.18)mV犦较模型组有显著改善(P<0.01)。高频刺激后60min时各组间产生LTP的PS潜伏期分别为:正常组(4.8±1.0)ms,模型组(5.2±1.3)ms,MSC组(4.9±1.8)ms。模型组的潜伏期较正常组显著延长(P<0.05),MSC组潜伏期较模型组缩短(P<0.05)。结论静脉注射MSC可显著易化VD大鼠海马齿状回LTP。

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:研究HD02在大鼠慢性前脑缺血过程中对神经细胞凋亡的作用。方法:16～18个月SD大鼠64只,雄性,体质量300～350g。利用末端标记法和流式细胞仪,测定HD02干预前后脑缺血大鼠脑组织神经细胞的凋亡情况,并检测Caspase-3免疫阳性细胞、Calcineurin和钙激活中性蛋白酶(Calpain)活性。结果:HD02有减少阳性凋亡细胞出现率犤(5.40±1.38)%与模型对照组(12.72±3.45)%比较,t=4.84,P<0.01犦及减少Caspase-3免疫阳性细胞表达(HD02组比模型对照组:缺血15d:7.10±1.90比12.55±3.30,t=3.86,P<0.01;缺血30d:4.60±1.15比9.50±4.20,t=4.67,P<0.01),降低CalcineurinD02组比模型对照组:大脑皮质每克蛋白中含犤(38.24±5.58)比(48.98±5.04)nmol/s,t=3.64,P<0.01犦;海马每克蛋白中含犤(37.87±3.38)比(52.58±4.92)nmol/s,t=3.75,P<0.01犦和Calpain活性犤大脑皮质每毫克蛋白中含(2.96±0.77)比(4.56±0.85)A/h,t=3.84,P<0.05犦;海马每毫克蛋白中含犤(2.90±0.28)比(4.91±0.94)A/h,t=3.97,P<0.01犦的作用。结论:HD02有一定的抗神经细胞凋亡的作用。

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的:观察HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的变化。方法:结扎双侧颈总动脉制备慢性前脑缺血大鼠模型,采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞。给予模型大鼠HD02水煎剂灌胃,分别于造模后15,30d观察神经干细胞增殖分化的变化。结果:与正常对照组相比,慢性前脑缺血大鼠大脑皮质、室周区、海马BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数于造模后15d明显增多(P<0.01),但造模后30dBrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数与正常对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);造模后30d,HD02组BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数较慢性前脑缺血组明显增多(P<0.01)。

血管性痴呆患者血小板活化机制的研究

为探讨血管性痴呆(VD)血小板活化机制 ,分别测定 32例VD患者、38例急性脑梗死(ACI)患者及 2 8名健康对照者血小板MLCK ,Ca2 + Mg2 + ATP酶活性和血小板 [Ca2 + ]i浓度。结果发现 ,与健康对照组相比 ,VD组和ACI组MLCK活性明显增加 (P <0 0 1) ,Ca2 + Mg2 + ATP酶活性明显降低 (P<0 0 5 ,P <0 0 1) ;VD组和ACI组血小板静息 [Ca2 + ]i均高于健康对照组并与MLCK活性呈显著正相关 (P <0 0 1) ,与Ca2 + Mg2 + ATP酶活性呈负相关 (P <0 0 5 )。提示 ,血小板MLCK和Ca2 + Mg2 + ATP酶活性以及血小板 [Ca2 + ]i浓度与血管性痴呆的发生有密切关系。

血管性痴呆患者脑脊液神经肽含量变化及临床意义

目的 探讨血管性痴呆 (VD)患者脑病理改变与认知功能、脑脊液 (CSF)中神经肽含量变化之间的关系。方法 采用放射免疫分析法检测 48例VD患者CSF中神经肽Y(NPY)、生长抑素 (SS)、降钙素基因相关肽 (CGRP)和 β 内啡肽 (β EP)含量变化 ;观察简易精神状态量表 (MMSE)、长谷川痴呆量表 (HDS)评分和 2次以上的颅脑影像改变。同时观察 5 1例急性脑梗死 (ACI)患者和3 6例无神经系统器质性疾病的老年人 (Control)相应指标的变化。结果 与Control组和ACI组相比较 ,VD患者脑梗死容积增加、脑萎缩发展速度较快 ,白质疏松 (LA)分级较高。ACI组和VD组NPY含量显著升高 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,ACI组CGRP显著降低 (P <0 0 5 ) ,但CGRP和NPY与认知功能改变无显著相关 (P >0 0 5 )。VD和ACI组中 β EP和SS含量显著下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,并与HDS评分呈显著正相关 (r=0 5 2 ,P <0 0 5 ;r =0 5 9,P <0 0 1)。VD患者病灶容积变化与认知功能和 β EP、SS含量无显著相关 (P>0 0 5 )。LA分级与β EP、SS含量以及HDS评分呈显著负相关 (P <0 0 1)。 结论 VD患者存在神经肽分泌异常 ,其中SS、β EP可能参与了VD的病生过程。动态检测LA分级和CSF中SS、β EP含量变化可能作为VD病情严重程度的重要指标。

左旋单钠谷氨酸致肾阴虚模型大鼠神经细胞凋亡的变化

目的 :研究左旋单钠谷氨酸大鼠神经细胞凋亡的变化。方法 :利用末端标记法和流式细胞仪 ,测定左旋单钠谷氨酸造模前后和左归丸干预前后大鼠脑组织神经细胞的凋亡情况。结果 :造模后 30天 ,左旋单钠谷氨酸大鼠大脑皮层、海马、下丘脑神经细胞凋亡数增多 ,以海马和下丘脑更明显 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 ) ,左归丸可减少左旋单钠谷氨酸大鼠大脑皮层、海马、下丘脑神经细胞凋亡 (P <0 0 1 )。结论 :左旋单钠谷氨酸可导致大鼠神经细胞凋亡 ,左归丸可减少左旋单钠谷氨酸大鼠神经细胞凋亡。

HD02对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化和细胞周期的影响

目的:观察HD02对新生大鼠体外培养神经干细胞(neuralstemcell,NSC)增殖、分化和凋亡的影响。方法:分离、培养新生大鼠海马NSC,采用免疫荧光双标技术检测NSC增殖分化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化。结果:HD02的中低剂量组BrdU阳性细胞数、BrdU+Nestin,BrdU+NeuroD,BrdU+NF200,BrdU+GFAP,BrdU+Oli阳性细胞数和S期细胞比率明显高于空白对照组和EGB761组(P<0.01),G0/G1期比率(51.12±3.66)%明显低于正常对照组(68.23±3.30)%;细胞凋亡率(5.18±0.80)%与EGB761(4.98±0.40)%相比差异无显著性意义(P>0.05),但却明显低于正常对照组(6.43±0.55)%(P<0.01)。结论:HD02能显著促进NSC增殖分化。其机制可能与缩短G0/G1期、减少凋亡、促进S期比率有关。

HD02对前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化蛋白的作用

目的观察神经干细胞(neuralstemcell,NSC)增殖分化相关蛋白Notch1、hes5、Mash1、NeuroD在HD02促进慢性前脑缺血大鼠NSC增殖分化中的作用。方法雄性SD大鼠30只,分为正常对照组(6只)、模型对照组(12只)、HD02组(12只),后两组又分成缺血后15,30d小组,每组各6只,制作SD大鼠前脑缺血模型,利用Westernblot方法检测NSC增殖分化相关蛋白变化。结果与正常对照组比较,造模后15,30d、慢性前脑缺血大鼠NSC增殖分化相关蛋白表达水平显著升高(t=7.42～38.16,P<0.01);与模型对照组比较,HD02可明显表达明显增加Notch1,hes5,Mash1,NeuroD表达水平(t=3.17～36.55,P<0.05或P<0.01)。结论HD02能增加慢性前脑缺血大鼠NSC增殖分化相关蛋白表达,这可能与HD02促进NSC增殖分化有关。

Akt信号通路在HD02抗慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡中的作用

目的:观察Akt信号通路在HD02抗大鼠慢性前脑缺血过程中神经细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞仪和Westernblot方法检测细胞凋亡率和Akt信号通路犤总Akt,磷酸化Akt(Ser473),Akt(Thr308),FKHR(Ser256),GSK-3β(Ser9)和PTEN犦变化。结果:与正常对照组犤(1.40±0.21)%犦比较,造模后15和30d慢性前脑缺血大鼠细胞凋亡率犤(15.30±0.74),(12.72±3.45)%犦显著增加(t=7.56,7.02,P<0.01);磷酸化Akt(Ser473)和Akt(Thr308)表达水平显著降低(t=3.51,3.76,P<0.01);FKHR(Ser256)、GSK-3β(Ser9)和PTEN表达明显增加。HD02可明显降低慢性前脑缺血大鼠细胞凋亡率犤HD0215d:(11.40±0.75)%,HD0230d:(5.40±1.38)%犦。与模型组比较,给药后15和30d,HD02可显著上调磷酸化Akt(Ser473)和Akt(Thr308)表达水平(t=3.94,4.18,P<0.01);明显抑制FKHR(Ser256),GSK-3β(Ser9)和PTEN表达。结论:HD02能抑制慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡,这一作用与Akt信号通路有关。

骨髓间质干细胞对血管性痴呆大鼠BDNF和NGF的影响

目的:观察静脉注射骨髓间质干细胞(marrowstromalcell,MSC)对血管性痴呆(vasculardementia,VD)大鼠脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:体外分离培养、扩增成年大鼠MSC。利用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型,利用穿梭箱、水迷宫试验、ELISA方法检测注射MSC后30,60dVD大鼠认知功能以及脑组织BDNF和NGF含量变化。结果:与正常对照组相比,VD大鼠主动回避反应、游泳时间、错误次数和盲端时间,在造模后30和60d差异有显著性意义(P<0.01)。静脉注射MSC后30和60d,VD大鼠认知功能显著改善。造模后30,60d大鼠脑BDNF含量犤(96±27),(108±26)ng/g犦,NGF含量犤(73±22),(89±24)ng/g犦较对照组显著增高犤(51±13)ng/g,(36±11)ng/g犦,P<0.01;注射MSC后30,60d大鼠脑BDNF含量犤(180±46),(185±5)ng/g犦,NGF含量犤(115±29),(108±34)ng/g犦较模型组显著升高。结论:静脉注射MSC可显著改善VD大鼠认知功能,增加VD大鼠脑组织BDNF和NGF含量。

神经干细胞增殖分化相关蛋白在左旋单钠谷氨酸大鼠中的变化

目的 观察神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)增殖分化相关蛋白在左旋单钠谷氨酸 (monosodiumglutamate ,MSG)大鼠NSC增殖分化中的作用。方法 提取前脑组织蛋白、利用Westernblot方法检测NSC增殖分化相关蛋白变化。结果 与正常对照组比较 ,造模后 3 0、60d、MSG大鼠NSC增殖分化相关蛋白Notch1、hes5、Mash1、NeuroD表达水平显著降低 ,尤以Notch1和hes5更显著 (P <0 0 1) ;与实验组比较 ,左归丸可明显增加Notch1、hes5、Mash1、NeuroD表达水平 (P <0 0 1)。结论 MSG显著抑制NSC增殖分化相关蛋白表达水平 ,左归丸能部份拮抗MSG对NSC增殖分化相关蛋白表达的抑制。

Akt信号通路在左归丸对体外培养新生大鼠海马神经干细胞凋亡中的作用

目的观察 Akt 信号通路在左旋单钠谷氨酸(MSG)和左归丸(ZGW)对新生大鼠体外培养海马神经干细胞(NSC)和子细胞凋亡中的作用。方法分离、培养新生大鼠海马 NSC,选第二代克隆球做诱导分化实验。每个培养孔(3ml 培养体积)加入终浓度为10μmol//L 的 MSC 或10μmol/L MSG 加左归丸10μg 与NSC 孵育30min,培养7天后收集细胞进行检测。采用流式细胞仪和 Western blot 方法分别检测细胞凋亡率和 Akt 信号通路变化。结果 MSG 可增加细胞凋亡率,抑制总 Akt 表达,显著降低 Akt(Ser473)和 Akt(Thr308)水平;明显增加 FKHR(Ser256)、GSK-3β(Ser9)和 PTEN 表达。ZGW 可抑制 MSG 的部分效应。分别给予 PI3K选择性抑制剂 LY294002和激动剂,可显著反转和增强 ZGW 效应。结论左归丸能抑制 NSC 及其子细胞凋亡,这一作用与 Akt 信号通路有关。

皮质酮大鼠神经干细胞增殖分化的变化

目的 观察皮质酮 (corticosterone ,CORT)大鼠神经干细胞增殖分化的变化 ,探讨肾阳虚证与CORT大鼠神经干细胞增殖分化的联系。方法 成年雄性SD大鼠连续 14d皮下注射CORT ( 10mg·kg- 1 ·d- 1 ) ,采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞。给予CORT大鼠右归饮水煎剂灌胃 ,观察CORT大鼠神经干细胞增殖分化的变化。结果 与正常对照组相比 ,CORT大鼠大脑皮层、海马及下丘脑区BrdU阳性细胞数明显减少 ,BrdU +NF2 0 0 ,BrdU+NeuroD ,BrdU +GFAP免疫荧光双标细胞数也显著减少 (P <0 .0 1)。给予右归饮后CORT大鼠BrdU阳性细胞以及免疫荧光双标细胞数明显增加 (P <0 .0 1)。结论 CORT大鼠神经干细胞增殖分化能力显著下降 。

老智灵口服液用于血管性痴呆临床疗效的评价

目的 :探讨老智灵口服液治疗血管性痴呆(VD)的临床疗效。方法 :采用老智灵口服液治疗血管性痴呆患者 39例 ,并用金纳多针剂 (32例 ,静脉滴注 )作对照 ,观察治疗前后简易精神状态量表(MMSE)、长谷川痴呆量表 (HDS)、日常生活活动量表(ADL) ,事件相关电位P30 0 ,脑脊液AngII和AVP含量的变化。结果 :老智灵组总有效率为 61 .54% ,对照组总有效率为 59.38% ,两组比较无统计学意义(P >0 .0 5)。两组治疗后MMSE、HDS积分和AVP含量均较治疗前显著增加 (P <0 .0 1 ) ,而ADL评分和AngII含量显著降低 (P <0 .0 1 )。结论 :老智灵口服液治疗VD有效 。

神经干细胞增殖分化相关蛋白在皮质酮大鼠中的变化

目的观察神经干细胞(NSC)增殖分化相关蛋白在皮质酮(CORT)大鼠NSC增殖分化中的作用。方法利用Westernblot方法检测NSC增殖分化相关蛋白变化。结果造模后30d和60d、CORT大鼠NSC增殖分化相关蛋白Notch1、hes5、Mash1、NeuroD表达水平显著低于正常对照组,尤以Mash1、NeuroD更显著(P<001);右归饮可明显增加Notch1、hes5、Mash1、NeuroD表达水平(P<001)。结论CORT显著抑制NSC增殖分化相关蛋白表达水平,右归饮能部份拮抗CORT对NSC增殖分化相关蛋白表达的抑制。Notch和bHLH家族可能与右归饮促进NSC增殖分化作用有关。