竹根七总皂苷的提取纯化工艺及抗炎活性研究

目的对提取与纯化竹根七中总皂苷的工艺条件进行优化与提升,初步探索验证其抗炎活性。方法以总皂苷含量为评价指标,采用正交实验设计,通过回流提取法考察提取温度、时间、溶剂浓度及料液比对总皂苷含量的影响,进行统计分析;利用大孔树脂的吸附纯化作用,探究吸附和解吸附过程中不同条件对总皂苷纯度的影响,分析得出最佳纯化工艺;以RAW264.7细胞上清IL-1β、IL-6、TNF-α水平为指标,通过CCK-8法筛选最佳给药浓度及ELISA试剂盒检测细胞上清炎症因子水平,考察竹根七总皂苷抗炎活性。结果最优回流提取工艺为乙醇浓度70%,料液比1∶40,温度80℃,提取时间30 min,竹根七总皂苷最终得率为9.74%;在最优提取方法下,探究竹根七皂苷纯化富集工艺,选用D101大孔树脂,当上样量为1 BV,吸附时间12 h,洗脱剂为50%乙醇-水,洗脱体积5 BV时,纯化后总皂苷纯度达到70%以上,由此得出其最佳纯化工艺;纯化后的总皂苷对RAW264.7细胞炎症具有抑制作用,其最低质量浓度为8μg·mL^(-1)。结论本实验所得工艺能较好的富集竹根七总皂苷,该方法简单易行稳定可靠;所得竹根七皂苷具有较好的抗炎活性。

葫芦七总黄酮超声辅助提取工艺优化

目的 优化葫芦七总黄酮超声辅助提取工艺。方法 在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、液料比、超声时间为影响因素,总黄酮含量为评价指标,Box-Behnken响应面法优化提取工艺。结果 最佳条件为乙醇体积分数76%,液料比265∶1,超声时间71 min,总黄酮含量为26.20 mg/g。结论 该方法合理可行,操作简便,可用于超声辅助提取葫芦七总黄酮。

肝细胞癌高表达基因片段P02的全长RACE扩增和序列分析

目的扩增肝细胞癌高表达基因基因P0 2的全长cDNA序列,并利用生物信息学知识对其进行分析,为进一步研究该基因在肝细胞癌发生、发展中的作用奠定基础。方法运用SMARTRACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)技术扩增P0 2的5’和3’末端cDNA ,对RACEPCR产物作TA克隆,碱裂解法抽提阳性克隆质粒,酶切和PCR验证目的片断的插入,Sanger双脱氧链中止法测序,利用BLAST、基因探索者等生物学软件对序列进行分析、拼接,获得全长cDNA ,利用在线预测软件预测该基因的生物学功能。结果获得865bp的全长cDNA序列,其开放读码框长172个氨基酸,与TPT1基因高度同源,是一个生理功能尚未完全明了、与生长相关的蛋白质,蛋白质结构和功能预测提示该基因产物可能是一个位于细胞膜的与生长相关的裂解酶。结论在肝细胞癌组织中成功克隆扩增了长865bp的P0 2全长cDNA序列,为进一步功能研究奠定基础。

醋制蓬莪术中总姜黄素回流提取工艺的优化

目的优化醋制蓬莪术中总姜黄素回流提取工艺。方法以双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素含有量为评价指标,乙醇体积分数、乙醇用量、提取次数、提取时间为影响因素,正交试验结合人工神经网络优化提取工艺。结果最佳条件为加入3倍量95%乙醇提取2次,每次2 h,人工神经网络优化后双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素含有量分别为1.12、19.83、30.00μg/mL,均高于正交试验优化后。结论该方法稳定可行,重复性好,可用于回流提取醋制蓬莪术中总姜黄素。

莪术-三棱药对醋制前后指纹图谱的建立及多指标成分含量变化

目的:建立莪术-三棱药对醋制前后HPLC指纹图谱,对5种指标性成分进行定量分析,探索莪术-三棱药对醋制前后的质量差异。方法:采用HPLC法建立莪术-三棱药对醋制前后指纹图谱,通过化学计量学方法对莪术-三棱药对醋制前后指纹图谱进行分析;并采用HPLC法测定莪术-三棱药对醋制前后对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、香兰素、姜黄素、莪术醇的含量。结果:结果表明20批样品可以明显的分为2类,莪术-三棱生品与醋品在整体化学成分上具有一定的差异。含量测定结果表明,莪术-三棱药对经过醋制后,指标成分含量均有不同程度的增加,其中对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、香兰素、姜黄素、莪术醇的平均含量增加了11.11%、36.31%、30.18%、11.68%、53.43%。结论:所建立的指纹图谱及多指标含量测定方法稳定可靠,从定性与定量评价了莪术-三棱药对醋制前后的质量差异,为莪术-三棱药对炮制研究提供一定的科学依据。

肝细胞癌高表达基因TPT1真核报告表达载体的构建及鉴定

目的构建TPT1真核报告表达载体pEGFPN3TPT1,为进一步研究其功能奠定基础。方法通过PCR和酶切的方法获取具有黏性末端的TPT1基因的全长开放读码框,将其定向连入真核表达载体pEGFPN3绿色荧光报告基因的氨基侧,构成pEGFPN3TPT1的真核报告表达载体,通过酶切和测序鉴定TPT1的正确插入。结果酶切和测序均证实TPT1正确插入了真核报告表达载体pEGFPN3TPT1中。结论成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFPN3TPT1。

化疗联合放射性^(125)Ⅰ粒子植入治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的观察放射性粒子125Ⅰ植入联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效和安全性。方法 68例ⅢB~Ⅳ期NSCLC患者分为粒子植入联合化疗组(实验组)32例和化疗组(对照组)36例,化疗方案为吉西他滨联合顺铂,观察有效率和无进展生存期以及毒副作用,有效率和毒副反应率采用χ2检验,Kaplan-Meier生存曲线分析无进展生存时间,无进展生存率比较采用Log-rank检验。结果试验组和对照组的总体反应率分别为75%和44.44%。2组间有显著的统计学差异(P<0.05),中位无进展生存期分别为6.5个月和4.5个月,统计学差异显著(P<0.05),实验组显著长于对照组。所有的副作用/并发症可控,实验组有较高的血痰和胸痛发生率,两组在气胸、发热、骨髓抑制方面无差异,未观察到粒子游走。结论放射性粒子125Ⅰ植入联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌有较好的临床疗效和可以控制的毒副作用,是晚期非小细胞肺癌安全、有效的治疗手段。

β-榄香烯和NDV共修饰对脂质体瘤苗的免疫增强作用

目的通过脂溶性的抗肿瘤药物β-榄香烯和新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)对H22肝癌细胞可溶性抗原(NDV-H22抗原)脂质体瘤苗的共同修饰,来增强瘤苗的抗肝癌效应,为临床抗肝癌的免疫治疗提供实验依据。方法用NDV的弱毒株losota株感染H22肝癌细胞。用KCl法提取可溶性抗原。用改进的机械分散法制备多复层脂质体(MLV)。将60只BalB/c鼠腹腔接种H22肝癌细胞后随机数字法分为3组,每组再分为两部分,24小时后,分别腹腔接种:脂质体包裹NDV修饰的H22抗原(LVAg组)、脂质体共包裹β-榄香烯与H22抗原的制剂(LEAg组)、脂质体共包裹NDV-H22抗原与β-榄香烯的制剂(LEVAg)。1周后进行第二次免疫接种。记录小鼠的生存期,MTT法测定淋巴细胞毒活性。结果 LEVAg组的抗肿瘤效应最强,其生存期为(45.8±3.8)d,脾淋巴细胞毒活性为(46.4±1.9),均高于LVAg分别为[(35.2±5.5)d和(30±2.8)]和LEAg组分别为[(37.8±3.7)d和(29.0±1.5)](P<0.001);LVAg和LEAg组小鼠的生存期及脾淋巴细胞毒活性无显著性(P>0.05)。结论将NDV-H22抗原和β-榄香烯共包入脂质体中,其抗肝癌免疫效应明显增强,二者有协同增效作用。

脂质体瘤苗抗小鼠H_(22)腹水型肝癌作用研究

目的观察脂质体瘤苗的抗癌作用,寻找有效的抗肿瘤疫苗。方法制备H22肝癌细胞的脂质体瘤苗,将该瘤苗通过腹腔接种,免疫荷瘤的BalB/c小鼠(LAg组),同时设单用抗原免疫组(Ag组)和DHanks组作为对照,比较各组小鼠的生存期,并用MTT法检测外周血和脾淋巴细胞对H22肝癌细胞的体外杀伤作用。结果LAg免疫的BalB/c鼠的平均生存期及脾和外周血淋巴细胞毒活性均高于Ag组及DHanks组(P<0.05),Ag组及DHanks组两者之间差异无显著性(P>0.05)。结论单用H22抗原不能诱导有效的抗肝癌免疫反应,用脂质体包裹后,其抗肝癌作用可明显增强,脂质体瘤苗有潜在的临床应用前景。

蓬莪术醋制前后总姜黄素的大鼠肠吸收动力学差异比较

目的比较蓬莪术醋制前后总姜黄素的大鼠肠吸收动力学差异。方法建立大鼠在体循环肠灌流模型,设置蓬莪术生品总姜黄素组、醋品总姜黄素组、生品总姜黄素配伍生品挥发油组及醋品总姜黄素配伍醋品挥发油组共4个组别,分别计算总姜黄素中指标性成分双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的吸收速率常数(K_(a))、吸收半衰期(t_(1/2))、单位时间吸收率(P)。结果蓬莪术醋制后总姜黄素中3个指标性成分的吸收速度和吸收程度均增加,且在小肠的主要吸收部位发生了后移。醋制前后分别配伍挥发油后,总姜黄素3个指标性成分吸收速度降低,但吸收程度无较明显改变。结论蓬莪术醋制后,增加了总姜黄素中指标性成分的吸收,增强了破血消癥药效的发挥,可为进一步阐释蓬莪术醋制科学内涵奠定基础。

TPT1基因转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响

目的:观察TPT 1转染对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:用Q IAGEN超纯质粒抽提试剂盒抽提TPT 1的真核表达质粒pEGFP-N 3TPT 1和pEGFP-N 3,通过lipofectAM INE,在24 h内连续3次转染肝癌细胞系SMM C-7721,通过荧光显微镜、RT-PCR观察转染、表达效率,通过M TT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期分析,研究TPT 1转染对肝癌细胞系SMM C-7721生物学行为的影响。结果:用此重构体转染后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率约在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N 3 TPT 1转染的细胞,TPT 1 mRNA水平升高0.78倍(P<0.05)。与对照组相比,pEGFP-N 3TPT 1转染可明显增强肝癌细胞系的增殖能力和软琼脂克隆形成能力(P值均<0.05),使G 2+S/M期细胞数增多。结论:pEGFP-N 3 TPT 1可在肝系细胞内高效表达,TPT 1可增强肝癌细胞系SMM C-7721的恶性表型。

β-榄香烯对脂质体瘤苗抗小鼠H_(22)肝癌的免疫增强作用

目的:制备榄香烯脂质体瘤苗,观察对抗小鼠H22肝癌作用,寻找有效的抗肝癌生物疗法。方法:用改进的机械分散法制备β-榄香烯修饰脂质体瘤苗,使磷脂酰胆碱∶胆固醇∶十八烷氨∶β-榄香烯摩尔比为4∶4∶1∶1.5,并通过腹腔接种将脂质体包裹的H22抗原(LA g组)及脂质体共包裹β-榄香烯与H22抗原的制剂(LEA g组)分别免疫荷瘤小鼠,观察小鼠的生存期,M TT法测定淋巴细胞对H22肝癌细胞的杀伤作用。结果:LEA g组的生存期和淋巴细胞毒活性均优于LA g组(P<0.05)。结论:β-榄香烯可增强脂质体瘤苗的抗肝癌免疫效应。

附子理中丸研究现状及“毒-效”关系探析

附子理中丸为温阳散寒之经方,因其具有传统中药丸剂的经典制备理论与精湛制剂方法作为理论指导与技术支撑,使得该制剂疗效确切,是千百年来治疗脾胃虚寒,呕吐泄泻的居家常备中成药之一。本研究对附子理中丸近年的基础研究报道进行归纳研究,从制剂"毒"与"效"的关系出发,总结其特点与优势,为附子理中丸的基础研究与现代化开发提供参考。

TPT1真核表达载体的构建及在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

目的:构建TPT1真核表达载体,并转染肝癌细胞系SMMC-7721,为进一步研究奠定基础。方法:通过PCR的方法在TPT1 ORF(open read ing fram e,开放读码框)两侧添加EcoR I和BamH I的识别序列,将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转染肝癌细胞系SMMC-7721,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达效率。结果:成功扩增了带有特异性核酸内切酶识别位点的TPT1 ORF片段,双酶切后连入pEGFP-N3,测序结果证明TPT1正确插入pEGFP-N3中,转导SMMC-7721后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1mRNA水平较对照高0.78倍(P<0.05)。结论:成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在SMMC-7721细胞内高效表达。

化疗联合放射性125I粒子植入治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的观察放射性粒子125I植入联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效和安全性。方法 68例ⅢB～Ⅳ期NSCLC患者分为粒子植入联合化疗组(实验组)32例和化疗组(对照组)36例,化疗方案为吉西他滨联合顺铂,观察有效率和无进展生存期以及毒不良反应。结果试验组和对照组的总体反应率分别为75%和44.44%.两组间有显著的统计学差异(P=0.011),中位无进展生存期分别为6.5个月和4.5个月,统计学差异显著(P=0.0121),实验组显著长于对照组。所有的不良反应/并发症可控,实验组有较高的血痰和胸痛发生率,两组在气胸、发热、骨髓抑制方面无差异,未观察到粒子游走。结论放射性粒子125I植入联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌有较好的临床疗效和可以控制的毒不良反应,是晚期非小细胞肺癌安全、有效的治疗手段。

浅议OTC解表中成药的用法用量

目的:分析OTC解表中成药的说明书中用法用量存在的问题,为完善OTC解表类中成药的说明书提供参考。方法:调查学校周边药店、淄博市张店区药店、学生自备药品及网上药店中的OTC解表类中成药说明书(共286份),对比古方的用法用量,查阅国家有关规定并梳理近期的相关文献,统计其异同。结果:对比古方发现,OTC解表类中成药说明书中近80%的服用方法都标识为口服,不到40%的药品服药量仅标识了用药的大概范围,而出汗标准、辅助措施的标识率均为0。结论:OTC解表类中成药说明书存在着语言表述过于简略、缺少服药的辅助措施、欠缺体现因人而异的问题,建议国家药品监督管理部门当加强对中成药非处方药说明书的监管,规范药品生产企业对说明书撰写。

TPT1表达载体的构建及在肝细胞系L-02中的表达

目的构建肝细胞癌高表达基因TPT1真核表达载体,并转导肝细胞系L-02,为进一步研究其在肝细胞癌发生、发展过程中的作用奠定基础。方法通过PCR方法在TPT1 ORF两侧添加EcoRⅠ和BamHⅠ的识别序列而将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转导肝细胞系L-02,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达情况。结果将TPT1成功插入pEGFP-N3中,转导L-02后,在荧光显微镜下,可见明亮的绿色荧光。pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1 mRNA水平较对照高1.59倍(P<0.05)。结论成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在L-02细胞内高效表达。

消癌平注射液联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的:观察消癌平注射液联合化疗与单纯化疗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效和安全性。方法:采用随机对照试验,治疗组27例,对照组29例。对照组仅给予TP方案化疗,而治疗组在TP方案化疗的同时,给予消癌平注射液80ml/d,共7天。21天为1周期,连续用2个周期。结果:治疗组有效率为63.0%(17/27),对照组为51.7%(15/29);治疗后KPS评分治疗组为86.20±9.65,对照组为80.11±8.91。对照组治疗后NK细胞降低,治疗前后对比有显著性差异,而治疗组治疗前后无显著性差异。治疗组和对照组均未见有严重的毒副反应发生。结论:消癌平注射液联合化疗治疗NSCLC的疗效优于单纯化疗,能明显改善NSCLC患者的生活质量及NK细胞的免疫功能,且临床应用安全。