2019—2021年华东地区6株禽源H3亚型流感病毒的遗传进化分析

H3亚型流感病毒在自然界广泛存在,可感染人、猪、马、犬、禽等众多宿主并能发生跨种间传播,危害不容忽视。本研究于2019—2021年在华东地区活禽市场采集表观健康的家禽喉头与泄殖腔棉拭,通过血清学试验鉴定、筛选出6株代表性水禽源H3亚型流感病毒,并经RT-PCR试验确定5株为H3N2亚型、1株为H3N1亚型。进一步对6株分离株进行全基因组测序、同源性比对和遗传进化分析,结果显示:HA蛋白裂解位点处均为PEKQTR/GLF,不存在连续碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒的分子特征;受体结合位点处均为禽源特征性的226Q和228S,提示其跨种传播至哺乳动物的潜能较低;内部基因片段来源多样化,与H3N8、H4N6、H5N8、H6N1、H7N7、H0N3等众多亚型禽流感病毒的亲缘关系密切;除JS1018/19和JS1094/19的NS基因属于北美谱系以外,其余均属于欧亚谱系的禽源分支,与犬、马、猪、人等哺乳动物源毒株的亲缘关系较远,提示虽然可能存在不同进化谱系间的基因重组但并未发生从禽到哺乳动物宿主的基因交换。该研究结果丰富了H3亚型禽流感病毒的流行病学数据,为进一步了解我国低致病性禽流感病毒的分布特征提供了参考依据。

三株H9亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析

2012年初从东台地区分离到3株H9亚型禽流感病毒,通过RT-PCR扩增出其HA基因,并对其进行测序及遗传进化分析。结果显示3株病毒的HA基因开放阅读框全长1683bp,共编码560个氨基酸,其核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.8%～97.8%、97.7%～98.9%,与A/chicken/F/98的同源性分别为90.9%～91.4%、93.2%～93.9%;其裂解位点均为PSRSSR↓GLF,符合低致病力禽流感毒株的特征,推导的氨基酸序列含8个相同的潜在糖基化位点,A/chicken/DT/1/2012比其他2株H9亚型AIV多了一个267NCT的糖基化位点;受体结合位点的226位为L,具有α-2,6受体结合的特征。遗传进化分析显示3株分离株属欧亚种系,与A/Duck/Hong Kong/Y280/97代表株的亲源关系较近。

Clade2.3.2.1c H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建

近年来clade2.3.2.1c中的H5N1亚型禽流感病毒的抗原性发生了很大变化,Re-6疫苗并不能对其提供有效保护。为对该分支毒株进行有效防控,研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1,PR8)毒株为内部基因供体,以clade2.3.2.1c的H5N1亚型毒株A/chicken/Jiangsu/YB7/2015(YB7)的HA和NA基因作外部供体,并删除YB7株HA中裂解位点处的多个碱性氨基酸,通过反向遗传方法成功拯救出1株重组病毒r YB7。r YB7株病毒在鸡胚和MDCK细胞上均有较好的繁殖性能,对SPF鸡胚和鸡均无致病性。本实验室在对毒株抗原性研究的基础上研发的疫苗候选株为防控变异的clade2.3.2.1c的禽流感病毒提供了良好的疫苗备选。

Clade2.3.4.4 H5N2亚型禽流感疫苗候选株的构建

2015年秋季以来,clade2.3.4.4的H5N2亚型禽流感病毒(AIV)分离率逐渐增加,成为我国华东地区流行的优势毒株。经遗传进化分析发现,与抗原性相关的血凝素(HA)氨基酸呈现出一定规律的进化趋势,导致抗原性发生变化。研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1,PR8)AIV为内部基因供体,以clade2.3.4.4中的H5N2亚型毒株A/chicken/Yangzhou/YZ1111/2015(YZ1111)的表面抗原HA和神经氨酸酶(NA)为外部基因供体,并删除YZ1111株HA基因中编码多碱性氨基酸的序列,通过反向遗传操作,成功拯救出1株重组病毒r YZ1111。r YZ1111在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖性能,对SPF鸡胚和鸡均无致病性。表明在分析H5N2亚型AIV抗原变异的基础上研发出疫苗候选株,为防控变异的clade2.3.4.4 H5N2亚型禽流感提供了备选疫苗。

新型重组H10N3亚型禽流感病毒对公共卫生安全的威胁

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在历史上发生过多次跨种间感染人的事件,对公共卫生安全造成严重威胁。2021年6月1日我国通报了全球首例人感染H10N3事件,引发广泛关注。此次引发人感染的H10N3为新型重组病毒,HA和NA基因分别来自于H10N8和H7N3,内部基因全部来源于S基因型H9N2。在我国活禽市场同样分离到多株和人源毒株高度同源的禽源H10N3病毒,表明在发生人感染事件之前H10N3已在我国家禽中流行。新型重组H10N3病毒对鸡为低致病性,通过泄殖腔排毒,仅可通过直接接触方式在鸡群中有限传播;具备双受体结合特性,可通过气溶胶途径在豚鼠中高效传播,引发小鼠致死性感染。新型重组H10N3病毒的生物学特性表明其对公共卫生安全造成较大威胁,需重点关注。

禽流感病毒感染鸽的流行病学与致病机理研究进展

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)不仅严重危害禽类,而且对人类生命健康造成严重威胁。鸽作为留鸟,具有作为AIV从野生鸟类传播至人类中间宿主的潜能。鸽对AIV的易感性以及在病毒传播中的作用却存在争议。通过分析AIV自然感染、人工感染鸽的流行病学以及实验研究数据,同时回顾了禽流感病毒感染鸽的机制,发现随着病毒的进化和时间的推移,鸽群AIV的感染率也在递增;尤其随着近年具有双受体结合特性的高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)clade2.3.4.4分支H5Nx毒株的出现,其感染鸽后排毒量上升以及鸽体间直接接触传播能力增强。为了有效防控AIV的跨种间传播,有必要加强对鸽感染AIV的流行病学监测和传播特性的研究,特别需要密切关注具双受体结合特性的H5Nx和H7N9 HPAIV对鸽易感性的发展趋势。