谷胱甘肽的抗线粒体脂质过氧化作用

谷胱甘肽是细胞内重要的抗氧化损伤物质之一．以NADH诱导的牛心肌线粒体脂质过氧化体系为模型，研究了谷胱甘肽的抗氧化作用．结果表明，一定浓度的谷胱甘肽能够部分抑制该体系中线粒体的脂质过氧化．保护组的丙二醛含量为损伤组72．5％；线粒体的膨胀度较损伤组降低；细胞色素C氧化酶及ATP酶活力分别较损伤组提高了1．5及2．2倍．

抗氧化剂抗脂质过氧化机制的ESR研究

以ＮＡＤＨ诱导的心肌线粒体损伤体系为模型，在体外用ＥＳＲ研究了谷胱甘肽（ＧＳＨ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）的抗氧化机制．结果表明，低浓度的ＧＳＨ可部分抑制体系中自由基的生成；ＳＯＤ与ＨＲＰ以适当比例共同作用，可完全抑制体系中自由基的生成，较好地防止脂质过氧化的发生．

NADH诱导的牛心肌线粒体的脂质过氧化

在ＡＤＰ－Ｆｅ３＋存在下，ＮＡＤＨ可诱导牛心肌线粒体发生脂质过氧化作用．以丙二醛的生成量来衡量脂质过氧化水平，研究ＮＡＤＨ，ＡＤＰ。

2-位硒桥联β-环糊精的合成及催化性质

将β－环糊精（β－ＣＤ）２位羟基选择性磺酰化后，再用ＮａＨＳｅ处理使谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团－ＳｅＨ引入β－ＣＤ的２位上，经空气氧化得到了ＧＰＸ模拟物双硒桥联β－环糊精．利用元素分析、核磁共振、红外光谱对此模拟物进行了表征．Ｘ光电子能谱技术测定了模拟物中硒的价态和含量．测活结果表明模拟物的ＧＰＸ活性是ＰＺ５１的７．

N－羟甲基中卟啉诱导产生抗体的酶学性质研究

以Ｎ－羟甲基中卟啉为半抗原，通过动物免疫、细胞融合等技术筛选得到的细胞株１１Ｄ~１，该细胞株产生的抗体具有结合铁中卟啉的能力，且表现出过氧化物酶活力。进一步研究表明，该抗体对半抗原及铁中卟啉的亲和力分别为：１．１×１０^（－６）ｍｏｌ／Ｌ和２．１×１０^（－６）ｍｏｌ／Ｌ；抗体－铁中卟啉复合物催化反应时，对底物过氧化氢的Ｋ_ｍ＝１３．０ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｋ_（ｃａｔ）＝８６ｍｉｎ^（－１），与自然催化速度相比，活力提高１．８×１０~４（ｍｏｌ／Ｌ）^（－１）。

具有GPX活性的单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析

目的利用分泌具有GPX活性的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞3G5,克隆其mAb体的可变区基因。方法提取杂交瘤细胞的总RNA ,分离mRNA ,反转录合成cDNA。经PCR扩增VH 基因和VL 基因 ,将VH 基因和VL基因与载体 pGEM T连接后 ,进行酶切鉴定和序列分析。结果构建了2个分别含有VH 和VL 基因的重组质粒。序列分析表明 ,VH 和VL 分别属于mouscheavychainsubgroupIII和mouselightchainsubgroupV亚群 ,长度为372和324bp ,编码124和108个氨基酸 ,在高变区分别有4和2个丝氨酸。结论克隆的VH 和VL 基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征 ,为将来制备具有GPX活性的单链抗体提供了可靠的基因材料。

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒单链抗体酶制备

利用RT PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株 2F3中 ,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因 .经DNA测序后 ,用Linker(Gly4 Ser1) 3 构建成单链抗体 (scFv)表达载体pTMF scFv ,将重组质粒pTMF scFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) ,实现了单链抗体的高效表达 .表达的单链抗体占菌体总蛋白 2 5%～ 30 % .该重组蛋白以包涵体形式存在 ,分子量为 30kD .经过金属螯合亲和层析纯化、复性和凝胶过滤纯化 ,得到电泳均一的单链抗体 .再经化学诱变 ,得到含硒单链抗体酶 ,其谷胱甘肽过氧化物酶活性为 330 0U μmol.

应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬（ＧＰＸ）活性的含硒单链抗体酶。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ方 法从杂交瘤细胞株２Ｆ３中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经ＤＮＡ序列测定后，构建成表达载体 ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ，经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变，得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ分别转 化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）和 ＢＬ２１（ｃｏｄｅｎ ｐｌｕｓ），表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的５％－１０％、１５％－ ２０％和 ２５％－３０％。该重组蛋白以包涵体形式存在，相对分子质量为３００００。其 ＧＰＸ活性为３４００Ｕ／μｍｏｌ，接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。

聚乙二醇修饰牛血清白蛋白

用三聚氯氰活化的聚乙二醇（PEG-1900和PEG-5000）修饰牛血清白蛋白（BSA）的游离氨基，经透析，冻干，得到PEG修饰的牛血清白蛋白．对PEG修饰的BSA进行了理化、生物学及部分药用指标测定．实验表明，用PEG-1900和PEG-5000修饰时，修饰率分别达到90％和50％左右时，便可消除BSA的过敏反应．

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的单克隆抗体的制备及鉴定

对自由基的研究表明，多种疾病的发生和发展，如缺血性心脏病、脑缺血、肿瘤、白内障、各种炎症及生理衰老等，都与自由基代谢紊乱有密切联系［１］。谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）是一种重要的抗氧化药物，它能阻断原发性自由基造成的损伤，或使已受自由基损伤的组织免遭...

异丙基肾上腺素损伤的大鼠心肌线粒体中细胞色素氧化酶的复活研究

大鼠在异丙基肾上腺素损伤后(每千克大鼠体重异丙基肾上腺素用量为0.1mg,每24h腹腔注射一次,连续8次),其心肌线粒体中细胞色素氧化酶活力下降61.2％。当损伤的心肌线粒体中加入心磷脂及卵磷脂后,细胞色素氧化酶的活力随添加磷脂含量的增加而提高,当磷脂浓度达到一定程度后,酶活力可恢复到正常大鼠的水平。

谷胱甘肽过氧化物抗体酶ScFv的基因构建

特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株５Ｃ９所分泌的ＭｃＡｂ经化学修饰后，其抗体酶活性比兔肝谷胱甘肽过氧化物酶活性高２．６倍。在所建成的杂交瘤细胞株基础上，通过提取该细胞总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，以及ＶＨ和ＶＬ基因的ＰＣＲ扩增、组装，成功地构建了谷胱甘肽过氧化物抗体酶ＳｃＦｖ基因。电泳分析证明，ＶＨ和ＶＬ基因长度分别为３４０ｂｐ和３２５ｂｐ；所构建的ＳｃＦｖ基因长度约为７５０ｂｐ，并带有ＳｆｉⅠ和ＮｏｔⅠ切点，可用于ＳｃＦｖ的基因重组及其表达。

镧暴露对仔鼠程序性坏死相关氧化应激指标的影响

通过对染镧仔鼠海马皮质组织细胞中活性氧簇(ROS)与丙二醛(MDA)含量的检测,探讨镧暴露对程序性坏死相关氧化应激指标的影响。将Wistar雌性大鼠随机分为对照、低、中和高剂量染镧组。孕鼠通过自由饮水的方式进行染镧,仔鼠断乳前通过吸吮母乳染镧,断乳后通过自由饮水染镧。自出生至生后49 d记录染镧仔鼠体质量,之后利用Morris水迷宫实验检测仔鼠学习记忆能力、HE染色观察仔鼠皮质中神经细胞的变化、免疫测定法测定皮质组织中MDA及ROS的含量。结果显示:与对照组相比,染镧仔鼠皮质系数逐渐增高,皮质细胞数量逐渐减少;染镧仔鼠穿越原隐藏平台位置的次数及第四象限持续时间均减少;染镧仔鼠皮质组织中MDA与ROS的含量增高。可见,染镧使仔鼠海马神经细胞氧化应激增强、海马皮质发育受损并影响仔鼠的学习记忆能力。