基于免疫应激的补骨脂特异质肝毒性作用

目的探究补骨脂水提取物对脂多糖诱导SD大鼠免疫应激状态的肝毒性作用及其机制。方法将SD大鼠分为空白对照(CON)、LPS、WEFP、LPS+WEFP组。LPS组和LPS+WEFP组尾静脉注射4 mg·kg^(-1)LPS;2 h后WEFP组和LPS+WEFP组ig 1.1 g·kg^(-1)·d^(-1)WEFP,连续7 d。检测各组大鼠体质量、肝脏指数、胆汁流速、血清生化、组织病理学变化、炎症因子、蛋白及mRNA表达水平,阐明WEFP的肝脏毒性作用及机制。结果与CON组相比,LPS组大鼠体质量、肝脏系数、血清ALT、AST、ALP肝损伤指标无明显性变化;WEFP组大鼠肝脏出现轻度脂肪变性,但未引起明显肝脏损伤;LPS+WEFP组大鼠体质量、胆汁排出量明显降低,肝脏系数、血清ALT、AST、ALP、TBA水平明显增加,肝脏中IL-1、TNF-α分泌增加;同时肝脏出现炎性反应、胆汁淤积、脂肪变性等病理性改变,RhoA mRNA及蛋白表达增加,TLR4和ICAM-1促炎基因表达增加,导致急性肝损伤。结论非肝毒性剂量的LPS可引起同等剂量补骨脂表现出更为明显的肝毒性。补骨脂可激活免疫应激状态大鼠体内RhoA等促炎基因的表达,进一步加剧炎症因子释放,促使肝细胞及肝内胆管组织发生炎症反应,导致胆汁酸外排受阻,引起特异质肝损伤。

基于斑马鱼模型的补骨脂不同炮制品水提物急性毒性及肝毒性差异比较

目的根据历代医籍和本草记载的炮制方法,对比补骨脂Psoraleae Fructus不同炮制品水提物的急性毒性和肝毒性差异,为补骨脂的炮制方法使用提供参考。方法采用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱和标准曲线法对补骨脂生品和补骨脂不同炮制品水提物进行补骨脂素和异补骨脂素的含量测定,并以AB野生型斑马鱼、Tg(lfabp:EGFP)肝脏细胞绿色荧光标记转基因斑马鱼和Tg(lysc:DsRed2)中性粒细胞红色荧光标记转基因斑马鱼为实验动物模型,给予补骨脂生品和补骨脂不同炮制品的水提物通过观察补骨脂不同炮制品对斑马鱼的半数致死浓度(median lethal concentration,LC50)、最小致死浓度(minimum lethal concentration,LC1)、斑马鱼形态变化、畸形评分等的影响,比较补骨脂不同炮制品的急性毒性差异。通过观察不同给药组对斑马鱼肝脏荧光强度、肝脏面积和体积、肝脏病理切片情况、肝脏区域中性粒细胞数量的影响,以及检测炎症相关基因的m RNA水平变化情况,综合评价补骨脂不同炮制品的肝毒性差异。结果补骨脂不同炮制品水提物中补骨脂素和异补骨脂素含量存在差异,补骨脂生品中补骨脂素和异补骨脂素含量最高,雷公法制品中异补骨脂素含量最低,清炒法制品中补骨脂素含量最低。补骨脂不同炮制品水提物急性毒性存在差异,补骨脂生品水提物会导致斑马鱼出现严重的急性毒性,表现为出现心包水肿、脊柱弯曲、鱼鳔消失、卵黄囊吸收延滞,而不同炮制品中补骨脂雷公法制品的急性毒性减毒效果最优,补骨脂酒炙法制品、补骨脂盐炙法制品和补骨脂清炒法制品急性毒性的减毒效果依次减弱。补骨脂生品水提物会导致斑马鱼出现严重的肝脏毒性,包括肝脏结构缺失、肝脏荧光强度减弱、肝脏荧光面积和体积减少、肝脏细胞间出现空泡化,并导致肝脏区域的中性粒细胞聚集,上调炎症相关因子表达水平。基于斑马鱼模型不同炮制法中补骨脂雷公法的肝脏毒性减毒效果最优,补骨脂酒炙法和补骨脂清炒法肝毒性的减毒效果依次减弱,而补骨脂盐炙法则增强肝脏毒性毒效果。结论不同炮制法对补骨脂急性毒性均有减毒作用,这可能与补骨脂素和异补骨脂素含量的减少有关,对肝毒性的影响存在差异。基于斑马鱼模型雷公法炮制对急性毒性和肝毒性的减毒效果最佳,且通过减少肝脏区域炎症发生和中性粒细胞的聚集减轻了补骨脂的肝毒性,而盐炙法则增加肝脏区域炎症发生和中性粒细胞聚集加重肝毒性。

野山杏果肉总有机酸的分离纯化及其清除自由基能力的研究

目的:研究新疆野山杏总有机酸的分离纯化工艺及其清除自由基的能力。方法:以总有机酸的含量作为考察指标,筛选分离纯化野山杏果实总有机酸最佳大孔吸附树脂;以Vc作为阳性对照,考察其清除羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_2~ˉ·)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的能力。结果:对野山杏有机酸的吸附率与解析性能较好的是AB-8型大孔树脂,其最佳纯化工艺为上样速度为0.034 BV/min,最大上样量为475 mL,以50%乙醇为洗脱剂,最佳洗脱条件为0.067 BV/min,洗脱剂用量为120 mL,提取纯化得到的总有机酸含量为53.23%;野山杏总有机酸对羟基自由基有一定的清除能力,但弱于Vc,质量浓度达到4 mg/mL时总有机酸清除超氧阴离子自由基的清除率为56%,与Vc组相当,有机酸质量浓度8 mg/mL时清除率达到97%,其清除DPPH·能力略强于Vc。结论:AB-8型大孔树脂适合于分离纯化野山杏果肉中总有机酸,野山杏总有机酸具有清除自由基能力。

补骨脂生品及不同炮制品水提物小鼠急性毒性试验

目的比较补骨脂生品及不同炮制品水提物的急性毒性特点及差异。方法将昆明小鼠分为补骨脂生品组、清炒组、盐炙组、雷公组及酒浸组等不同浓度组和对照组共36组,各组小鼠以0.04 mL·g^(-1)单次灌胃给药并观察14 d,检测小鼠体质量、血清生化、死亡率,计算LD_(50)值等,研究补骨脂生品及不同炮制品的毒性差异。结果不同方法给药前小鼠体质量无统计学差异,给药组第1天部分小鼠体质量有一定的下降;生品组、清炒组、盐炙组、雷公组、酒浸组LD_(50)值分别为含生药63.20,56.92,51.95,88.61,59.02 g·kg^(-1)。与对照组相比,雄性小鼠生品组血清ALT、TBA水平显著增加;清炒组血清ALT、AST、TBA显著增加,ALP水平无统计学差异;盐炙组、雷公组和酒浸组血清ALP、ALT、AST、TBA水平显著升高。与对照组相比,雌性小鼠生品组、盐炙组、雷公组和酒浸组血清ALP、ALT、AST、TBA水平显著增加;清炒组血清ALT、AST及TBA水平显著升高;所有组TP水平显著降低。病理学结果显示,对照组小鼠肝脏均未见异常;生品组、清炒组、盐炙组、雷公组及酒浸组小鼠肝脏出现肝细胞空泡样变,伴有肝细胞糖原变性、肝细胞胞浆疏松,部分出现小叶中央型肝细胞肥大等病理性改变;生品组与其他炮制组相比致小鼠肝脏损伤程度:生品组>酒浸组>清炒组>盐炙组>雷公组,其中酒浸法致肝脏病变程度最大,而雷公法最小。结论补骨脂通过不同方法炮制后其毒性有所不同,以LD_(50)判断,雷公法炮制品毒性明显降低。