结核分枝杆菌新型抗原Rv3117联合DDA/MPL佐剂作为亚单位疫苗在小鼠体内的免疫评估

目的用结核分枝杆菌(M.tuberculosis)特异性抗原Rv3117联合双十八烷基二甲基溴化铵(DDA)/单磷酰脂质体A(MPL)佐剂构建结核亚单位疫苗(Rv3117/DDA/MPL),并在C57BL/6小鼠体内评估其加强卡介苗(BCG)首次免疫后的免疫效应。方法采用分子克隆方法构建重组质粒p ET32a-Rv3117,转入感受态大肠埃希菌BL21(DE3)PLys S,诱导表达并纯化目的蛋白,用Triton X-114相分离法去除目的蛋白中的内毒素,然后与DDA/MPL佐剂充分乳化构建亚单位疫苗。C57BL/6小鼠随机分为对照组(未予任何处理)、PBS组(免疫PBS)、BCG组(单纯首次免疫BCG)、BCG+DDA/MPL组(首次免疫BCG,2周后用佐剂DDA/MPL加强免疫2次)和BCG+Rv3117/DDA/MPL组(首次免疫BCG后用亚单位疫苗Rv3117加强免疫2次),每组5只。分别采用酶联免疫斑点检测(ELISPOT)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫进行评估。结果成功克隆表达并纯化结核特异性抗原Rv3117。ELISPOT和ELISA结果显示:受10.0μg/m L结核菌素纯化衍生蛋白(PPD)刺激后,与对照组、PBS组、BCG组和BCG+DDA/MPL组比较,BCG+Rv3117/DDA/MPL组小鼠T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的水平明显升高(P<0.05);BCG+DDA/MPL组培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素12(IL-12p70)细胞因子水平均显著高于对照组和PBS组(P<0.05),总抗体Ig G和Ig G1亚型水平亦较高;而BCG+Rv3117/DDA/MPL组上述指标水平均显著优于BCG+DDA/MPL组(P<0.05)。结论亚单位疫苗Rv3117/DDA/MPL在C57BL/6小鼠体内可增强BCG的细胞免疫和体液免疫效应。结核分枝杆菌特异性抗原Rv3117有望成为新的结核疫苗设计及结核诊断的候选抗原。

血塞通注射液对大鼠体内CYP2D1的影响

目的:研究血塞通注射液连续多次给药后对大鼠CYP2D1酶的影响。方法:12只大鼠采用自身对照的实验方法,先后单用探针药物(氢溴酸右美沙芬10mg.kg-1)以及合用血塞通注射液(180mg.kg-1)7d,采用HPLC法测定血浆中右美沙芬的浓度,观察血塞通注射液对大鼠CYP2D1酶的影响。结果:右美沙芬单用以及与血塞通注射液合用的主要药动学参数分别为t1/2β(153.1±25.4)min,(179.5±48.6)min(P<0.05);AUC0→t(85.6±9.9)mg.L-1.min,(105.2±21.2)mg.L-1.min(P<0.01),CL(0.098±0.012)mL.kg-1.min-1,(0.080±0.016)mL.kg-1.min-1(P<0.01)。结论:血塞通注射液对大鼠CYP2D1酶有明显抑制作用。

利用不同电泳技术对东亚蝎毒素ITX蛋白组分分离的研究

目的:初步建立蝎毒素ITX(Immunotoxin)蛋白组分的电泳分离方法和蛋白质组表达谱。方法:阴极电泳(T=18%,C=6%)对蝎毒进行分离,Bio-Rad Quantity-one电泳软件分析条带;双向电泳技术:第一向为固相pH梯度等电聚焦,第二向电泳为垂直平板SDS-PAGE(T=18%)。在以上过程中分别对上样方式、等电聚焦程序等条件进行优化控制,利用PDQ7.1软件分析获得二维凝胶图像。结果:阴极电泳图谱显示蝎毒素ITX由7个蛋白组分组成;二维凝胶图谱显示蝎毒素ITX包含相对分子质量相同(约为5.8×103)而等电点不同9种蛋白组分,其中酸性蛋白质4种,碱性蛋白质5种。结论:通过各种条件的优化,初步建立了ITX的阴极电泳和双向电泳方法,获得了分辨率和重复性较好的阴极电泳图谱和二维凝胶图谱。