血清催乳激素与抗心磷脂抗体联合检测在子宫内膜异位症诊断中的应用

目的探讨联合检测催乳激素(PRL)和抗心磷脂抗体(ACA)在子宫内膜异位症(EMS)诊断中的应用价值。方法将90例EMS患者按美国生育学会(AFS)修正的分期法分为轻度组(Ⅰ/Ⅱ期)41例和重度组(Ⅲ/Ⅳ期)49例,以10例正常生育年龄妇女做为对照组。采用时间分辨荧光免疫法检测血清PRL,ELISA法检测血清ACA。结果(1)EMS轻度组和重度组血清PRL水平及ACA阳性率分别为(642.60±419.69)u/ml、(647.97±289.76)u/ml和63.4%、71.4%,差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于健康对照组(P<0.05)。(2)轻度组血清ACA阳性率34.1%,显著高于重度组和对照组(P<0.05)。结论联合检测血清PRL和ACA,有助于EMS的诊断和分期。

荧光定量PCR检测宫颈癌旁盆腔组织中HPV-DNA的临床意义

目的探讨FQ-PCR检测宫颈癌旁盆腔组织中HPV-DNA对预测早期宫颈癌微小转移的意义。方法采用FQ-PCR方法,检测31例Ia-IIb期宫颈癌患者的原发灶及其癌旁组织(阴道切缘、宫旁切缘、盆腔淋巴结)中的HPV亚型和DNA拷贝数,并与患者术后组织病理学结果比较。结果31例癌旁组织HPV-DNA总检出率为58.1%,其中病理检测发生癌旁转移的7例患者均检测到HPV-DNA。宫颈原发灶、组织病理学阳性和阴性的癌旁组织HPV-DNA拷贝数分别为106.75±0.72,105.70±0.87和103.70±1.22,且它们之间有非常显著性差异(P<0.01)。结论癌旁组织检出HPV早于组织病理学发现转移,检测癌旁组织中HPV对早期微小转移具有提示意义,有助于发现组织病理学不易发现的早期隐匿性转移。

近6年剖宫产率和剖宫产指征的变化趋势

目的分析近6年来剖宫产率和剖宫产指征构成比的变化趋势,以及对围产儿病死率的影响。方法回顾性分析2010—2015年剖宫产的相关病例资料。结果 2013—2015年剖宫产率为40.3%,显著低于2010—2012年的46.7%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01);前、后3年围产儿病死率分别为0.9%和0.7%,差异无统计学意义(P>0.05);前、后3年不同剖宫产指征的构成比发生变化,差异有统计学意义(P<0.01)。结论近年来,剖宫产率呈下降趋势。剖宫产指征构成比发生显著变化,围产儿病死率未见升高。

宫颈癌盆腔淋巴结微转移分子检测及其意义

目的:研究宫颈癌患者盆腔淋巴结人乳头状瘤病毒(HPV)和端粒酶活性的表达及其临床意义。方法:应用FQ-PCR和PCR-ELISA方法检测61例Ia^IIb期宫颈癌组织和盆腔淋巴结HPV载量和端粒酶活性表达,并与常规病理结果比较。同时取15例良性疾病患者的淋巴结作为阴性对照组;分析宫颈癌淋巴结转移与各种病理因素的关系。结果:宫颈癌淋巴结HPV16/18和端粒酶阳性率显著高于常规病理阳性率(P<0.01),对照组淋巴结HPV16/18和端粒酶均为阴性。常规病理阳性的淋巴结HPV16/18拷贝数和端粒酶活性高于病理阴性的淋巴结,但低于原发灶,差异有统计学意义。淋巴结HPV16/18和端粒酶表达呈显著正相关(r=0.60,P<0.01)。临床分期晚和癌灶浸润深的患者易发生淋巴结转移。结论:与常规病理相比,采用FQ-PCR和PCR-ELISA技术检测HPV和端粒酶活性表达能显著提高宫颈癌淋巴结微转移的检出率。

早孕外周血及蜕膜中NK细胞表型及T淋巴细胞亚群的变化

目的:检测孕妇外周血及蜕膜中T淋巴细胞亚群和NK细胞表型,探讨它们与母-胎界面免疫耐受的关系。方法:收集20例早孕同一患者的蜕膜组织及外周血,密度梯度离心法分离出淋巴细胞,流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、T细胞含量及其表面分子CD16、NKG2A、NKG2D表达水平。结果:蜕膜自然杀伤(dNK)细胞占蜕膜淋巴细胞(57.15±4.0)%,外周血自然杀伤(pNK)细胞占外周血淋巴细胞(11.46±1.58)%;dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞,二者分别(10.3±3.9)%与(95.6±2.6)%(P<0.05);dNK细胞表面NKG2A的表达明显高于pNK细胞,二者分别为(87.10±4.5)%与(27.5±4.2)%(P<0.01),dNK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近,分别为(88.70±4.1)%与(93.10±3.6)%(P<0.05);蜕膜中的CD4+T淋巴细胞的表达低于外周血中CD4+T淋巴细胞,二者分别为(13.70±1.0)%与(15.85±2.4)%(P<0.05),蜕膜中CD8+T淋巴细胞表达明显低于外周血中CD8+T淋巴细胞,二者分别为(15.23±1.5)%与(18.85±1.73)%(P<0.01)。结论:妊娠期蜕膜中的NK细胞及T淋巴细胞可能是同维持母-胎界面的免疫耐受的重要原因。

ICP患者外周血单个核细胞Th1及Th2细胞变化

目的研究妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者Th1和Th2型细胞免疫反应的变化,从免疫学角度探讨ICP发病机制。方法采用流式细胞术,分别检测了20例重度ICP患者与20例正常晚期妊娠妇女的外周血单个核细胞和T细胞中Th1和Th2细胞所占的比例。结果重度ICP组外周血单个核细胞中IFN-γ+细胞比例为17.82%±3.43%,明显高于正常晚期妊娠组12.66%±2.34%(P<0.01),而IL-4所占的比例为1.17%±0.26%,低于正常晚期妊娠组1.37%±0.30%,差异有显著性(P<0.05);重度ICP组PB-MC中细胞因子Th1/Th2比率为16.00±4.66,显著高于正常晚期妊娠组9.89±2.82(P<0.01);重度ICP组外周血中T细胞分泌的Th1细胞比例为14.37%±1.38%,明显高于正常晚期妊娠组10.66%±1.18%(P<0.01),而Th2细胞比例1.05%±0.19%,低于正常晚期妊娠组1.24%±0.29%,差异有显著性(P<0.01);重度ICP组T细胞Th1/Th2比率为13.99±2.46,显著高于正常晚期妊娠组8.94±1.84(P<0.01)。结论重度ICP患者与正常晚期妊娠妇女比较,其体内表现为Th1型免疫反应增强,而Th2型免疫反应减弱。体内Th1/Th2细胞平衡紊乱可能与妊娠期肝内胆汁淤积症发生相关。

人胎盘滋养层细胞的分离和鉴定

目的:体外分离足月妊娠胎盘滋养层细胞,观察其形态学特点,检测人类白细胞抗原-E(HLA-E)在滋养层细胞的表达情况。方法:采用0.25%胰酶和胶原酶I联合消化法及Percoll密度梯度分离法分离人足月妊娠胎盘组织中滋养层细胞,光学显微镜观察分离出的细胞形态,透射电镜观察分离出的细胞超微结构;RT-PCR技术检测分离出的滋养层细胞HLA-E的表达。结果:光学显微镜下初分离的细胞呈大圆形,以单个核为主;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富,胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴。在分离的细胞上检测到HLA-E的表达。结论:采用胰酶和胶原酶I联合消化及Percoll密度梯度分离法可获得高纯度的滋养细胞,在透射电镜下可见到超微结构,同时检测到滋养层细胞上表达HLA-E。

靶向Her2基因SiRNA对人卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂敏感性的影响

目的通过siRNA沉默Her2基因的表达探讨其对卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂(DDP)敏感性的影响。方法靶向Her2的siRNA通过阳离子脂质体介导转染到SKOV-3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2基因表达的SK-OV-3细胞株,通过RT-PCR方法检测各组SKOV-3细胞Her2基因的表达。应用四甲基偶氮唑蓝检测DDP对各组SKOV-3细胞增殖水平的影响,应用膜联蛋白V异-硫氰酸荧光素细胞凋亡试剂盒在流式细胞仪上检测DDP作用后各组SKOV-3细胞凋亡水平。结果建立了稳定抑制Her2基因表达的细胞株,SKOV3/siRNA-1组和SKOV3/siRNA-2组细胞Her2基因表达分别为对照组的53.8%和38.4%,而空载体组为92.3%。在DDP作用下SKOV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2的细胞存活率在4 d时分别为67.7%±4.4%和66.4%±3.3%,与未转染对照组81.7%±1.3%和空载体组81.3%±1.4%比较差异有显著性(P<0.05)。FCM分析显示SK-OV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2细胞的DDP诱导凋亡率分别为38.6%±1.1%和42.8%±1.4%,明显高于未转染组9.1%±0.8%和空载体组8.8%±0.7%,差异有显著性(P<0.05)。结论靶向Her2基因的siRNA可以增强卵巢癌细胞株SKOV-3对DDP的敏感性。

siRNA对白血病细胞株HEL中EDAG-1基因的干涉作用

目的探讨抑制胚胎发育相关基因-1(EDAG-1)的表达对白血病细胞株生长的影响及其机制。方法收集重组质粒转染包装病毒细胞的上清转染HEL细胞株,经嘌呤霉素筛选稳定抑制EDAG-1基因表达的细胞株,RT-PCR检测EDAG-1基因的抑制情况,运用MTT检测转染细胞的增殖能力,并将稳定转染的细胞株种植到裸鼠皮下检测成瘤情况。结果成功建立了抑制EDAG-1基因表达的HEL细胞株。与HEL/negative相比,HEL/siRNA细胞株增殖速度降低(P<0.05),接种裸鼠皮下的肿瘤生长明显减慢(P<0.05)。结论沉默EDAG-1基因的表达可以抑制白血病细胞株的增殖,提示EDAG-1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点。

针对EDAG-1基因的siRNA抑制白血病细胞的生长及IL-8分泌

目的:探讨抑制胚胎发育相关基因-1(embryonic develop-associated gene1,EDAG-1)表达对白血病细胞株生长的影响及其机制。方法:将靶向EDAG-1基因的特异序列连接到逆转录病毒载体中,将脂质体介导的重组质粒转染包装产病毒细胞株PT67;收集细胞上清液转染HEL细胞株,经嘌呤霉素筛选获得稳定抑制EDAG-1基因表达的细胞株;RT-PCR法检测EDAG-1基因的抑制情况,MTT法检测转染细胞的增殖能力,同时采用RT-PCR和ELISA法检测转染后细胞中IL-8的表达水平。结果:成功构建获得靶向EDAG-1基因的反转录病毒载体,筛选获得抑制EDAG-1基因表达的HEL细胞株。EDAG-1基因被抑制的细胞株增殖速度降低,IL-8的分泌水平同时相应减低。结论:沉默EDAG-1基因的表达可以抑制白血病细胞株的增殖和IL-8的分泌,提示EDAG-1基因可能是白血病治疗的一个有效靶点。

siRNA抑制SKOV-3细胞Her2/neu表达及细胞增殖的动物实验研究

目的:通过卵巢癌细胞株SKOV-3细胞增殖及动物荷瘤实验探讨siRNA沉默Her2/neu基因的表达效果。方法:靶向Her2/neu的siRNA经脂质体L ipofectAM INE2000介导转染到SKOV-3中,通过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2/neu基因表达的SKOV-3/siRNA细胞株,通过RT-PCR和免疫组化方法检测Her2/neu基因抑制效果,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖水平并将SKOV-3/siRNA细胞接种到裸鼠皮下检测荷瘤情况。结果:建立了稳定抑制Her2/neu基因表达的细胞株SKOV-3/siRNA,RT-PCR和免疫组化结果显示Her2/neu基因表达受到较强抑制,MTT检测结果显示SKOV-3/siRNA组细胞增殖较SKOV-3明显下调(P<0.05),其接种在裸鼠皮下形成的肿瘤生长速度明显减慢(P<0.05)。结论:靶向Her2/neu基因的siRNA可以抑制卵巢癌细胞株SKOV-3在体外和体内增殖,有望成为卵巢肿瘤治疗的新途径。

ICP患者蜕膜NK细胞表型及杀伤活性的研究

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者蜕膜自然杀伤(NK)细胞的数量、表型特征及杀伤活性,探讨其在ICP发病中的作用。方法选取确定ICP患者15例,正常晚期妊娠妇女15例,用流式细胞仪检测两组蜕膜组织中NK细胞数量及表型,用LDH法测定NK细胞杀伤活性。结果①正常晚期妊娠蜕膜组织中CD56+CD3-NK细胞占蜕膜单个核细胞(DMC)7.82%±3.3%,ICP患者蜕膜中CD56+CD3-NK细胞含量为38.15%±5.1%(P<0.05);②正常晚期妊娠蜕膜组织中CD56+CD16-、CD56+CD16+NK亚群含量明显低于ICP组,差异有显著性(P<0.05);③ICP组蜕膜组织中NK细胞杀伤活性高于正常晚期妊娠蜕膜组,差异有显著性(P<0.05)。结论NK细胞是妊娠晚期蜕膜组织中的主要淋巴细胞,其亚群失衡及功能异常可能是ICP发病的重要原因。

孕妇妊娠期糖尿病共病抑郁对孕期糖代谢功能及新生儿形态结局的影响

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)共病抑郁对孕期糖代谢功能及新生儿形态结局的影响。方法于2015年3月至2018年6月,在合肥市第一人民医院、安徽医科大学第一附属医院和安徽省妇幼保健院三家医院招募孕符合标准的18~28周孕妇,共纳入4380名研究对象,其中收集到3827名孕妇新生儿的出生结局信息。采用自制问卷《合肥市孕产妇健康问卷》和爱丁堡产后抑郁量表获得基本人口学特征及抑郁情绪状态。在孕24~28周行75 g糖耐量实验诊断GDM,产妇分娩后从医院病历收集分娩结局信息。采用协方差分析不同GDM和抑郁状态孕妇糖代谢指标及新生儿结局指标的差异。以不同GDM和抑郁状态分组(无GDM且无抑郁、单病抑郁、单病GDM及GDM共病抑郁者)为自变量,以是否为大于胎龄儿为因变量,采用多因素logistic回归模型分析两者之间的关联,并分析GDM和抑郁的交互作用。结果4380名孕妇年龄为(28.8±4.2)岁,孕18~28周和孕32~36周的抑郁检出率分别为12.1%(526/4380)和12.3%(536/4367);孕24~28周GDM的检出率为19.5%(852/4380)。GDM共病抑郁者服糖后1 h血糖水平和曲线下面积高于无GDM且无抑郁者(P<0.05)和单病GDM者(P<0.05)。调整孕妇分娩年龄、教育程度、家庭主要经济收入、孕前体重指数、产次、体力活动次数、孕期增重等因素后,与无GDM且无抑郁者相比,单病抑郁、单病GDM和GDM共病抑郁者发生LGA的RR(95%CI)分别为1.31(0.89~1.91)、1.51(1.14~2.00)和2.43(1.29~4.57);进一步分析发现,抑郁状态的GDM孕妇与新生儿LGA的关联[RR(95%CI):2.12(1.01~4.49)]比无抑郁状态GDM孕妇与新生儿LGA的关联[RR(95%CI):1.50(1.12~1.99)]的更强(P交互<0.05)。结论孕妇GDM共病抑郁会损伤糖代谢功能,增加新生儿LGA发生风险。

孕期睡眠时点与小于胎龄儿发生风险的关系

目的探讨孕期睡眠时点与小于胎龄儿(small for gestation age,SGA)的关系,并分析糖脂代谢在其中的作用。方法选择2015年3月至2019年4月在合肥市第一人民医院、安徽省妇幼保健院和安徽医科大学第一附属医院产科门诊产检的6821例孕中期孕妇,通过面对面问卷调查收集一般人口特征、饮食和生活行为等指标。通过孕妇自评获得其近1个月就寝时点、晨起时点、睡眠时长等睡眠信息,并于孕晚期再次调查,分娩时收集母婴妊娠结局,最终获得5488对母婴健康资料。采用限制性立方样条回归模型探索睡眠时点与SGA风险的非线性关系,采用基于Bootstrap法的中介模型探索糖脂代谢在睡眠时点与SGA关联中的作用。结果SGA发生率为8.4%(459/5488)。多因素logistic回归模型结果显示,与21∶00前就寝相比,23∶00后就寝孕妇的SGA发生风险显著增加(OR=1.54,95%CI:1.01~2.34);与8∶00前晨起相比,8∶00后晨起孕妇的SGA发生风险显著增加(OR=1.31,95%CI:1.05~1.62)。睡眠时长与SGA的关联无统计学意义(P>0.05)。限制性立方样条回归结果显示,睡眠中点从凌晨02∶45开始,SGA风险逐渐增加(P<0.05)。进一步的中介模型结果显示,孕中期睡眠中点迟(即晚睡晚起的睡眠模式)对SGA的负性影响可能部分通过糖脂代谢通路实现(均P<0.05)。结论孕中期可能是影响SGA的关键期,睡眠中点迟可能是SGA风险增加的潜在危险因素,且可能通过改变糖脂代谢水平,进而影响SGA的发生。