化学法提高细胞通讯对原代肿瘤细胞抑制作用的体外观察

目的 通过增加肿瘤细胞膜的渗透性来提高细胞通讯能力,观察对原代瘤细胞的抑制作用。方法 使用甘油增加细胞膜的渗透性,用MTT法测定不同浓度的甘油对32例原代肿瘤细胞的抑制作用。结果 MTT法显示2%甘油组肿瘤细胞抑制率为(40.19±30.63)%,1%甘油组的抑制率(30.23±27.58)%,两组间抑制率有显著性差异(P<0.01)。结论 化学法提高细胞间的通讯对原代瘤细胞有明显的抑制作用。

青岛地区498株结核分支杆菌耐药情况分析

①目的探讨青岛地区结核菌株耐药情况，为临床治疗提供参考依据。②方法采用ＢＡＣＴＥＣ－４６０ＴＢ法对结核分支杆菌进行分离培养与耐药测定。③结果痰结核分支杆菌阳性病人４９８例，其中初治耐药率３６．９％，其中４种药全耐药占３．９％，耐药顺位：异烟肼（Ｈ）、链霉素（Ｓ）、利福平（Ｒ）、乙胺丁醇（Ｅ），分别为３０．３％，１６．９％，１０．９％，７．４％；复治耐药率８４．６％，４药全部耐药者占１２．６％，耐药顺位为Ｈ（８１．８％），Ｓ（４８．６％），Ｒ（６４．０％），Ｅ（２６．６％）；耐ＨＲ，ＳＨＲ，ＨＲＥ初治者为９．９％，７．４％，４．２％，复治者为６１．７％，３９．７％，２１．０％．④结论我市结核病耐药情况严重，对结核病的临床治疗和管理应给予足够的重视。

胸液P-选择素检测对结核性与恶性胸腔积液鉴别意义的探讨

目的 检测结核性及恶性胸腔积液患者胸液P -选择素水平 ,探讨其对鉴别良恶性疾病的意义。方法 采用酶联免疫吸附法 (ELISA法 )检测 48例结核性胸液及 5 0例恶性胸液P -选择素水平。结果 恶性胸液P -选择素水平 (1 8.76± 8.45 μg/L)明显高于结核性胸液P -选择素 (7.43±5 .3 2 μg/L) (P <0 .0 1 )。结论 测定胸液P

白细胞介素1α测定对结核性、恶性胸腔积液的鉴别意义

目的 测定结核性及恶性胸腔积液患者胸液白细胞介素 1α水平 ,探讨其对鉴别良恶性疾病的意义。方法 采用酶联免疫吸附试验法 (ELISA法 )测定 14例结核性胸液患者及 30例恶性胸液患者胸液的白细胞介素 1α含量。结果 恶性胸液患者胸液白细胞介素 1α含量 (6 6 6± 18 4ng/L)明显高于结核性胸液患者胸液白细胞介素 1α(38 3±17 9)ng/L ,P <0 0 5。结论 测定胸液白细胞介素 1α水平对鉴别结核性、恶性胸液有较大的帮助。

粒-巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-2活化的脐血造血细胞抗肿瘤作用的研究

为探讨粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)联合白细胞介素 2 (IL 2 )活化的脐血造血细胞体外杀伤白血病细胞株HL 6 0细胞的作用 ,以及对脐血粒 -巨噬造血祖细胞 (CFU GM)生成活性的影响 ,采用MTT比色法测定经GM CSF和 (或 )IL 2激活的脐血造血细胞的抗肿瘤活性及半固体培养法检测活化脐血CFU GM生成活性。结果显示 ,IL 2或GM CSF +IL 2组均可活化脐血产生对体外培养的白血病细胞株HL 6 0细胞的杀伤作用 ,杀伤率分别为 ( 6 7 2± 1 5 1 % )和 ( 6 3 4± 2 3 9% ) ;GM CSF单独应用不能活化脐血产生对白血病细胞株HL 6 0细胞的杀伤作用 :GM CSF或GM CSF +IL 2均可扩增脐血CFU GM ,其产率分别为 ( 1 36 1± 4 2 9) / 1 0 5MNC和 ( 90 1±30 3) / 1 0 5MNC ;IL 2单独应用对CFU GM产率有减少的趋势。结果表明 ,IL 2或GM CSF +IL 2均能活化脐血产生明显的抗肿瘤活性 ;GM CSF或GM CSF +IL 2组使脐血CFU GM得到了明显的扩增 :脐血造血祖细胞治疗和免疫治疗相结合将是肿瘤高剂量化疗中一种有希望的治疗方法。

膀胱癌化学药物敏感性试验

目的:筛选膀胱癌化学治疗敏感性药物。方法:通过30例膀胱癌细胞原代培养,观察常用化学治疗药物的抑制率。结果:膀胱癌细胞对不同化学药物的敏感性不同(F=3.4251,P<0.01),敏感性由高至低依次为:卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌、表阿霉素、5-氟尿嘧啶、吡柔比星、喜树碱、阿霉素、氨甲蝶呤、长春新碱;不同个体的癌细胞对同一药物的敏感性存在明显差异。结论:膀胱癌化学治疗首选卡铂、顺铂、环磷酰胺、丝裂霉素、噻替哌,建议以药物敏感性试验选药,实现治疗个体化方案。

胃癌患者DC-CIK治疗前后外周血Treg细胞及相关细胞因子的变化

目的:观察胃癌术后患者DC联合细胞因子活化的杀伤细胞(cytokin-induced killer,CIK)治疗前后外周血中Treg细胞及相关细胞因子水平变化。方法:选择2009年4月至2013年12月在本院生物治疗中心治疗的胃癌术后患者158例,采用流式细胞术检测患者DC-CIK治疗前和治疗1~4个疗程后的胃癌术后患者外周血Treg(CD4+CD25+Fox P3+)细胞频率,ELISA检测血清Treg相关因子IL-10、TGF-β1水平。结果:接受3个疗程以上治疗(简称≥3疗程组)的75例患者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1水平较治疗前均明显下降(均P<0.05),接受2个疗程以下治疗(简称≤2疗程组)的83例患者的Treg细胞频率、IL-10和TGF-β1水平较治疗前无明显变化。同一治疗组复发者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1水平在复发时与未复发者比较无显著差异,但3个疗程以上治疗组的复发率明显低于2个疗程组(P<0.05)。结论:接受3个疗程以上DC-CIK治疗的胃癌患者其Treg频数、相应的细胞因子水平和复发率均明显下降,但同一治疗组复发与未复发者的Treg频数及细胞因子却无显著差异。

多西环素对树突状细胞功能的影响

目的探讨多西环素对树突状细胞的免疫表型和功能的影响。方法采集健康人的外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用rh IL-4和rh GM-CSF诱导分化为树突状细胞,通过LPS诱导树突状细胞成熟。树突状细胞诱导成熟过程中向培养基中分别加入0μg/m L、100μg/m L和300μg/m L的多西环素,通过流式细胞术检测树突状细胞表面HLA-DR、CD83和CD80的表达,用ELISA检测树突状细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-12和IL-10,与T细胞共培养检测刺激同种异型T细胞的增值能力。结果与对照组相比,100 ng/m L和300 ng/m L多西环素处理组诱导树突状细胞表达HLA-DR表达下调。多西环素可下调树突状细胞分泌IL-1β、IL-12、TNF-α和IL-6,也可抑制树突状细胞刺激同种异型T细胞增殖,并呈剂量依赖性。结论多西环素作用于树突状细胞成熟过程,导致树突状细胞下调HLA-DR的表达,抑制树突状细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α,下调其刺激同种异型T细胞的增值能力。

自体造血干细胞移植后DC-CIK细胞预防急性白血病复发的效果探讨

目的探讨白血病自体造血干细胞移植后应用树突状细胞—细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK细胞)预防急性白血病复发的临床疗效。方法4例白血病自体造血干细胞移植后静注及腹股沟注射DC-CIK细胞3次,观察疾病的复发情况以及DC-CIK细胞输注后的不良反应。结果3例治疗后持续完全缓解(CR),CR期分别为32、36、45个月;1例急性非淋巴细胞白血病(M4)复发后进行异基因半相合造血干细胞移植,无病生存24个月。结论DC-CIK细胞治疗可能协助清除微小残留病、预防复发,可作为白血病自体造血干细胞移植后预防复发的有效方法。

Bell氏麻痹患者外周血T淋巴细胞亚群的初步研究

应用免疫荧光法对 30例急性期 Bell氏麻痹患者外周血 T淋巴细胞亚群进行测定 ,并以 30例健康人作为正常对照组。结果发现 Bell氏麻痹者外周血 T3、T4 明显下降 ,与正常对照组比较有非常显著差别 ( P<0 .0 1) ,而 T8及 T4 / T8比值较之正常对照组无显著变化。提示 Bell氏麻痹患者存在细胞免疫功能的异常。

HER2阳性乳腺癌细胞株上清液对树突状细胞表型及功能的影响

目的探讨人HER2阳性乳腺癌细胞对树突状细胞表型及功能的影响。方法分离培养外周血单个核细胞来源的树突状细胞。培养的第5天,实验组HER2+MCF-7细胞的培养上清液孵育24小时,以不加上清液的树突状细胞作为对照组,流式细胞术检测树突状细胞表面标志CD80、CD86、CD40、CD83和HLA-DR的表达水平,ELISA法检测树突状细胞细胞因子IL-12、TNF-α、IL-6和IL-10的分泌水平。用改良的MTT比色法检测上清液处理的树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力和ELISA法检测树突状细胞刺激T细胞分泌细胞因子的能力。结果树突状细胞与HER2+MCF-7细胞的上清液共培养后,树突状细胞表面分子CD80、CD83、CD86及CD40均表达升高,同时伴随着IL-12、TNF-α、IL-6的分泌增加。与对照组相比较,上清液处理的树突状细胞对激活同种异体T细胞增殖和分泌细胞因子的能力明显增强(P<0.01)。结论 HER2+MCF-7细胞能改善树突状细胞的抗原递呈功能和刺激T细胞活化增殖的能力,提示HER2+MCF-7细胞对树突状细胞是免疫刺激作用,对于HER2+的乳腺癌可采用基于树突状细胞疫苗的免疫治疗。

-80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究

目的:探求一种操作简便实用、造血干细胞回收率和存活率高、成本低的外周血造血干细胞的冻存方法。方法:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存,并检测冻存前后外周血干细胞的活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34+细胞的回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34+细胞的回收率无明显差异(P>0.05),输注后造血均重建。结论:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法,具有广泛的临床推广价值。

髓芯减压并自体干细胞移植治疗早期股骨头坏死14例报告

目的分析髓芯减压并自体骨髓间充质干细胞移植治疗早期股骨头缺血性坏死的疗效。方法根据ARCO分期,随机选取单侧股骨头坏死早期病例14例,其中Ⅰ期7例,Ⅱ期4例,Ⅲ期3例,实施髓芯减压并自体骨髓间充质干细胞移植的治疗办法。结果经随访,患髋Har-ris评分术后1年(平均79.56)较术前(平均56.23)增加显著。结论对早期股骨头坏死的患者,髓芯减压并自体骨髓间充质干细胞移植是一种有效的手术治疗方法。

肝素诱导的树突状细胞上调Toll羊受体3促进慢性乙型肝炎患者外周血Th0向Th1分化

目的 探讨肝素体外诱导的树突状细胞（DC）促进慢性乙型肝炎（CHB）患者CD4＋T细胞亚群由Th0向Th1分化的机制. 方法 分离CHB患者外周血单个核细胞,以重组人白细胞介素（rhIL）-4、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和肝素诱导培养DC.流式细胞仪和定量PCR检测肝素处理及未处理的DC中Toll样受体（TLRs）分子表达水平.对高表达的TLRs,用TLRs-siRNA干扰处理后检测DC的功能变化.免疫磁珠分离外周血CD4＋T细胞亚群.酶联免疫吸附（ELISA）法检测Poly（I∶C）和R848刺激后DC上清液中IL-12及DC和CD4＋T细胞混合培养上清液中干扰素（IFN）v和IL-4的含量.均数的比较采用配对t检验.结果 肝素处理的DC （heparin-DC）其TLR3表达水平明显高于未处理的DC （t=2.849,P＜0.05;t=3.027,P＜ 0.05）;而两组间TLR7和TLR8的表达水平差异无统计学意义;Heparin-DC在Poly（I∶C）刺激下分泌IL-12水平明显高于未处理的DC（t=8.68,P＜0.01）,同时高于R848刺激的heparin-DC（t=19.01,P＜0.01）;经TLR3-siRNA干扰后,heparin-DC分泌的IL-12水平明显降低（t=31.49,P＜0.01）.TLR3-siRNA干扰后的heparin-DC与同种异体的CD4＋T细胞共培养,其CD4＋IFN Y ＋T细胞比例与未干扰组相比明显降低（1.64％±0.57％对比6.31％±0.88％,P＜0.01）,同时其上清液中Thl型细胞因子IFNY的水平也显著降低（t=20.83,P＜0.01）,而IL-4分泌水平变化无统计学意义.结论 肝素在体外可能通过上调CHB患者树突状细胞TLR3的表达水平而促进外周血Th0向Th1细胞的分化.

EGFR信号通路在SiO_2诱导肺上皮细胞间质转化中的作用机制(英文)

目的:在二氧化硅(SiO2)刺激下可引起肺部一系列的炎症反应及其伴随相关的成纤维细胞增殖,然而EGFR信号通路可维持细胞增殖、分化和凋亡的平衡,因此,我们可以设想EGFR信号通路是否在肺纤维化的发生发展中起到重要的作用。本实验探讨SiO2是否能诱导人肺上皮细胞(A549)发生上皮间质转化,并且研究EGFR信号通路在矽肺纤维化中的作用机制。方法:以A549为研究对象,用0(对照组)、50、100、200μg/ml SiO2孵育A549,作用48h后于倒置显微镜观察细胞形态学改变,并收集不同时段细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化,细胞免疫荧光方法检测E-cadherin、α-SMA及信号转导蛋白EGFR表达的变化。结果:倒置显微镜观察A549经SiO2处理后细胞形态由鹅卵石状转变为纺锤型或梭型,形态似成纤维细胞,随着SiO2浓度的升高,E-cad mRNA和蛋白表达逐渐下调,在200μg/ml组表达最低,α-SMA mRNA和蛋白表达逐渐上调,200μg/ml组α-SMA表达最高;EGFR蛋白表达上调;50、100、200μg/ml与对照组的差异具有统计学学意义(P<0.05)。结论:SiO2可诱导肺上皮细胞向间质细胞转化,其机制可能与EGFR信号通路有关。关键词:表皮生长因子受体;矽尘;A549细胞;

恶性肿瘤术后DC联合CIK治疗的临床观察

目的:研究树突状细胞(DC)和细胞因子活化的杀伤细胞(CIK)联合治疗对各种恶性肿瘤术后预防复发和进一步治疗的临床疗效及不良反应,阐明细胞免疫治疗作为肿瘤术后化疗的替代方案的可行性。方法:15例恶性肿瘤术后患者中,13例经CT检查无肿瘤复发,1例肝脏肿瘤转移,1例肝脏有囊肿。患者采用IL-210×105U/d静脉滴入5d。96h后采集患者外周血6～8L,(3～6)×109核细胞。细胞贴壁分离,在含有DC、IL-4、GM-CSF和相应肺癌抗原的无血清培养液培养8d,经静脉注入(32±15.3)×107DC细胞。未贴壁的悬浮细胞加入含有细胞因子培养液培养,诱导生成CIK细胞,皮下注射,1次/周,共注射3次〔(87±35.6)×108CIK细胞〕。周期结束后1个月复查,每隔3个月复查1次。结果:经DC+CIK治疗后,15例中有14例无肿瘤复发或病情加重,其中1例出现肿瘤原位复发并病情加重,但15例患者均存活。临床症状显示,13例患者自感临床症状有明显改善。不良反应观察显示,13例出现1～2次发热,体温37.5～40.2℃。结论:DC+CIK治疗有预防肿瘤复发的疗效,且效率高、不良反应小,是一种有效的肿瘤术后预防性治疗方案。