填精益气中药对BMSCs成骨分化及甲基化转移酶METTL3的影响

目的 探究基于“精气互化”理论的填精益气中药对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)向成骨分化的影响以及其分化过程中对甲基化转移酶METTL3、WTAP、PPARγ影响的实验研究。方法 将BMSCs随机分为对照组、诱导组、填精组、益气组以及填精益气组。填精组药物为鹿茸提取液,益气组药物为黄芪甲苷,填精益气组药物为鹿茸提取液联合黄芪甲苷。使用ELISA法检测6、12、18 d各组细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)含量变化;qRT-PCR法检测各组细胞METTL3、WTAP、PPARγ的基因转录;Western blot法检测各组METTL3、WTAP、PPARγ的蛋白表达。结果 ALP实验结果显示,填精益气组ALP活性优于填精组和益气组,且在第12天填精益气组的ALP活性达到了最高值;QRT-PCR及Western blot的实验结果表明,与对照组相比,各用药组甲基化转移酶METTL3和WTAP mRNA及蛋白表达水平均显著上调(P<0.01),PPARγ mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。结论 填精法、益气法、填精益气法对BMSCs向成骨分化均具有促进作用,可能是通过提高甲基化转移酶METTL3和WTAP表达,降低PPARγ的表达,进而促进BMSCs向成骨分化增加,向成脂分化减少而实现的。三组中填精益气组明显优于单独用药组,说明填精益气组更有效提高BMSCs增殖向成骨分化,延缓成骨细胞凋亡进程,对绝经后骨质疏松症及其并发症的防治具有指导意义。

试论肾藏精主骨为先天之本与表观遗传学的关系

新近研究发现表观遗传调控与骨代谢疾病的发生发展具有密切联系,体现在表观遗传调控中DNA甲基化、非编码RNA以及组蛋白修饰对成骨细胞和破骨细胞的分化与增殖的调控,进而影响骨骼疾病的发生发展。基于“肾藏精主骨”理论,肾精对于骨的生长发育衰老起到决定性作用。中医对于骨代谢疾病多从肾论治,效果良好,且“肾为先天之本”,具有遗传性。此文试探讨表观遗传与肾主骨之间的联系,为临床防治骨代谢疾病骨质疏松症提供思路与方法。

基于肾-精-天癸理论探讨围绝经期综合征肾虚相关病因病机与治疗

围绝经期综合征是指女性在绝经前后卵巢功能减退而出现的一系列以植物神经系统功能紊乱为主,伴有神经心理症状的一组证候群。肾虚为此病的根本病因,补肾填精为治疗的根本大法。作者从中医学“肾-精-天癸”理论出发,围绕心肾不交、肝肾阴虚、脾肾阳虚3种证型对围绝经期综合征肾虚相关病因病机及治疗进行探讨,以期为临床治疗围绝经期综合征提供依据。

Hedgehog信号通路与“肾虚血瘀”骨代谢失常的实验研究

目的观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠的骨组织和肾组织中Hedgehog信号通路细胞表面受体Patched-1(PTCH1)和Gli3mRNA和蛋白含量变化及补肾填精、活血化瘀中药复方对其影响,探讨中药组方治疗绝经后骨质疏松症的可行性以及绝经后骨质疏松症的发病机制与Hedgehog信号通路的关系。方法采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症模型,分别给予补肾填精中药复方、活血化瘀中药复方、骨疏康对模型大鼠灌胃12周。然后将大鼠分为补肾填精组、活血化瘀组、阳性对照组、正常组和模型空白组,其中骨疏康作为阳性药物为阳性对照组。运用RT-PCR检测各组大鼠骨组织和肾组织PTCH1和Gli3mRNA相对表达量;通过ELISA法检测各组大鼠骨组织和肾组织PTCH1和Gli3蛋白含量。结果各组大鼠股骨和肾组织中PTCH1mRNA及蛋白表达方面:与正常组比较,模型组显著升高(P<0.01);与模型组比较,补肾填精组、活血化瘀组、阳性对照组显著降低(P<0.01);各个用药组间比较,补肾填精组下调优于活血化瘀组,具有显著性差异(P<0.01)。各组大鼠股骨和肾组织中Gli3mRNA及蛋白表达方面:与正常组比较,模型组显著升高(P<0.01);与模型组比较,补肾填精组、活血化瘀组、阳性对照组显著下降(P<0.01);各个用药组间比较,补肾填精组下调优于活血化瘀组,具有显著性差异(P<0.01)。结论PTCH1mRNA及蛋白含量和Gli3mRNA及蛋白含量在去卵巢骨质疏松症模型大鼠骨组织和肾组织中显著升高,提示PTCH1和Gli3可能参与绝经后骨质疏松症骨代谢失衡的发生和进展。补肾填精中药复方和活血化瘀中药复方可下调PTCH1和Gli3mRNA相对表达量及其蛋白含量,这可能是起到防治绝经后骨质疏松症的作用机制之一,并且补肾填精法优于活血化瘀法。

淫羊藿苷与雌激素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的观察淫羊藿苷(icariin,ICA)与雌激素(estrogen,E2)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨分化及对内环境雌激素水平的影响。方法取3、4代BMSCs细胞,分为正常组、E2组、ICA组和E2+ICA组,在37℃CO2培养箱内诱导18 d;运用MTT法检测培养24、48、72 h后各组细胞增殖;通过ELISA检测法检测E2及6、12、18 d时的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;运用茜素红染色法观察各组成骨分化情况;运用免疫荧光法观察雌激素受体α(estrogen receptor-α,ERα)的表达与分布。结果根据MMT结果,正常组、E2组、ICA组和E2+ICA组均可促进BMSCs增殖(P<0.01);与正常组相比,各给药组ALP活性升高(P<0.01)。相同时间点各给药组ALP活性从小到大依次为ICA组<E2组<E2+ICA组,12 d时各组浓度达到峰值;同期观测12 d时茜素红染色及免疫荧光染色结果(P<0.05),与ALP结果趋势一致;各给药组E2活性明显升高(P<0.01),从小到大依次为ICA组<E2+ICA组<E2组,与ALP结果趋势不一致。结论①E2+ICA组明显优于单独给药组。与E2相比ICA反应更快、毒性更小;②ICA可双向调节内环境雌激素的含量,使其趋于稳态,以规避雌激素替代疗法(estrogen replacement therapy,ERT)副作用;③ICA能够通过调节雌激素水平,提高ERα核内表达,增加ALP含量,可用于治疗以雌激素缺乏为主的绝经后骨质疏松症,亦可为绝经后雌激素分泌异常导致的其他慢性病提供新思路。

“肾-骨-髓-脑”相关性及临床意义

骨、髓、脑,是中医与肾中精气相关的西医不同系统的组织。现代研究提示,采用中医“补肾填精”法可以分别治疗骨的疾病、髓的疾病、脑的疾病,肾-骨-髓-脑相关性及临床意义是指导临床治疗的关键理论基础。中医肾系统,是以五脏之一肾为核心的系统,包括中医的肾功能和解剖学的肾位置。“精气学说”是中医研究生命本源的重要的组成部分,精气作为自然科学的开端和本源,具有生衰、转化、变换的自然属性。《黄帝内经》最早提出“肾藏精,为封藏之本,主骨、生髓、通脑”。从经络、奇恒之腑、五体等中医特有角度着手,对肾精充骨、肾精填髓、肾精养脑相关性进行古代与现代理论分析,证明肾是凭借其藏精的特殊能力,能生,能化的自然属性,才可能将骨、髓、脑等西医不同系统联系起来。从中医肾系统的概念出发,从中医学精气理论,尤其是肾精理论出发,揭示西医不同系统的疾病,如骨的疾病、髓的疾病、脑的疾病,异病同治的理论依据及临床意义。

基于Hippo信号通路探讨鹿茸提取液对BMSCs成骨分化的影响

目的观察鹿茸提取液对SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨分化及Hippo信号通路的影响。方法将3、4代BMSCs随机分为正常组、诱导组以及鹿茸组。酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法分别检测6、12 d以及18 d碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性及水平;茜素红染色法检测3组BMSCs钙结节生长增殖情况;qRT-PCR法和蛋白质印迹法(Western blot)检测RUNX2及Hippo信号通路MST1和YAP的转录表达与蛋白表达水平。结果ELISA实验结果表明,鹿茸提取液可以提高ALP的活性,12 d鹿茸组ALP的活性达到最高,18 d鹿茸组ALP的活性显著上调(P<0.01);茜素红实验结果显示,鹿茸组观察到大量且密集的钙结节形成,提示鹿茸提取液可有效促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化;qRT-PCR的实验结果表明,与正常组相比,鹿茸组YAP和RUNX2 mRNA显著上调(P<0.01);Western blot法检测结果显示,鹿茸提取液可显著上调YAP蛋白表达水平(P<0.01),并且明显上调RUNX2蛋白表达水平(P<0.05)。结论鹿茸提取液能够影响RUNX2以及Hippo信号通路中MST1和YAP相关蛋白进而推进骨髓间充质干细胞向成骨细胞的转化。