重组补体因子B-小干扰RNA抑制大鼠脉络膜新生血管形成的作用及其机制

背景脉络膜新生血管（CNV）是眼内新生血管的重要表现形式。研究发现补体旁路途径的激活在激光诱导的CNV发展中起关键作用，旁路途径中的补体因子B（CFB）可以作为一个重要的靶点来阻断补体活化的旁路途径。目的探讨不同浓度重组CFB—siRNA（CFB—siRNA）抑制激光诱导大鼠CNV的效果及其作用机制。方法取棕色挪威（BN）大鼠60只120只眼，采用随机数字表法将其分为空白对照组、实验对照组和25、50、75μgCFB—siRNA组，每组12只鼠24只眼。实验对照组和CFB—siRNA组大鼠用激光光凝法建立CNV模型，不同剂量CFB—siRNA组于激光光凝后第1、3、5天分别经鼠尾静脉注射相应剂量的CFB—siRNA；实验对照组大鼠以同样方法注射生理盐水，空白对照组大鼠不给予任何干预措施。各组大鼠分别于光凝后第3、7、14、21、28天进行荧光素眼底血管造影（FFA），根据荧光素渗漏程度对各光凝斑评分并检测CNV的生长情况；采用免疫组织化学法检测各组大鼠脉络膜内血管内皮生长因子（VEGF）、Ⅷ因子的表达情况。分别于第7、14、21、28天用免疫组织化学法检测脉络膜中CFB、VEGF、转化生长因子β2（TGF—β2）蛋白的表达，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法观察CFB与VEGFmRNA、TGF-β2mRNA表达的关系。结果不同剂量CFB—siRNA组的CNV发生率明显低于实验对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；75p．gCFB—siRNA治疗组CNV发生率明显低于25μgCFB—siRNA组（P〈0．05）。免疫组织化学检测结果显示，不同剂量CFB—siRNA组VEGF、Ⅷ因子在大鼠脉络膜中的表达较2个对照组均减弱，且75μgCFB—siRNA组减弱程度高于25斗gCFB—siRNA组。光凝后14～21d，各剂量CFB-siRNA组VEGF蛋白、Ⅷ因子和TGF—B，在脉络膜中的表达均低于空白对照组，各组总体比较差异有统计学意义（P〈0．05）。光凝后7～21d，不同剂量CFB—siRNA组的CFB在脉络膜中的表达明显低于空白对照组，各组总体比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR检测结果显示，实验对照组CFB表达持续增加，VEGF、TGF—β2呈曲线变化，21d时为表达高峰；不同剂量CFB-siRNA组中CFB、VEGF、TGF—β2表达显著减少，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论尾静脉注射CFB—siRNA能够有效抑制激光诱导的大鼠CNV生成，其抑制效果随着注射剂量的增加而增强。补体激活旁路途径在CNV生成中扮演着重要角色，抑制CFB可减少CNV生成中VEGF和TGF—β2的表达。