白细胞介素-6对人冠脉平滑肌细胞表达MMP-3和PAPP-A基因的影响

目的:探讨炎症因子白细胞介素-6(IL-6)对人冠脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)基因的影响。方法:(1)应用相同浓度的IL-6(10ng/ml)刺激人冠脉平滑肌细胞,分别在共同培养0h,2h,4h,8h,24h,36h后收集细胞,观察细胞因子的时间效应;(2)应用不同浓度的IL-6(0ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,50ng/ml)刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养6h后收集细胞,观察细胞因子的剂量效应;(3)应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测细胞内MMP-3、PAPP-A基因的表达量。结果:相同浓度IL-6刺激时,人冠脉平滑肌细胞MMP-3和PAPP-A基因的表达量在2h时开始发生上调,8h左右达高峰,而后开始下降;随着IL-6剂量加大,MMP-3、PAPP-A基因表达量呈上升趋势(MMP-3:r=0.919,P=0.000;PAPP-A:r=0.941,P=0.000)。结论:炎症因子IL-6能促进冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物MMP-3和PAPP-A表达,可能是炎症在急性冠脉综合征发生发展中起重要作用机制之一。

血清高密度脂蛋白胆固醇直接测定方法研究

流行病学研究和大量临床资料表明,血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的水平与冠心病呈负相关,据美国Framingham 心脏研究,HDL-C每降低1mg/dl(0.03mmol/L),冠心病危险增加2%～3%.因此开展HDL-C实验方法学的研究以保证测定结果的可靠性是当前迫切需要解决的问题.从国内情况看,HDL-C的检测一直沿用化学沉淀法.此方法操作复杂,所需时间长,血清用量多,易于产生误差,对于特殊标本(高血脂等)存在沉淀不完全的现象.最大缺点是标本需预处理,不能进行自动化分析,尤其不适应大规模流行病学调查或临床大批量标本多项目同时检测.

对国产高密度脂蛋白胆固醇直接法测定试剂的评价

评价国产慈城生化试剂厂生产的HDL C直接测定法试剂在临床应用的可行性。将慈城直接测定法试剂与葡聚糖 (DS5 0 ) 氯化镁沉淀法和磷钨酸 (PTA) 氯化镁沉淀法进行比较 ,并分析其特异性、线性范围、准确度和干扰因素。慈城试剂与DS 5 0沉淀法相关良好 ,r=0 971 7、Y=1 0 5 9X- 0 0 5 7,与PTA法比较 ,r=0 985 1、Y=1 0 88X- 0 0 9。在HDL C浓度为3 34mmol/L范围内线性良好 ,r=0 9992。HDL C低、中、高值血清标本的批内和批间CV值分别为 2 1 1 %、 1 1 9%、 1 1 0 %和 2 2 1 %、 2 1 5 %、 2 0 3%。TG浓度 <8mmol/L、LDL C <7 0 2mmol/L不干扰HDL C测定 ,血红蛋白、胆红素干扰不明显。慈城HDL C直接法试剂与DS Mg和PTA Mg法相关良好 ,其性能指标符合临床使用要求。

冠状动脉粥样硬化斑块稳定性与超敏C反应蛋白和妊娠相关血浆蛋白A及基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达的关系

目的:探讨冠心病患者血清非特异性炎性因子高敏C-反应蛋白、动脉粥样硬化稳定斑块中的妊娠相关血浆蛋白A及参与斑块破裂活动的基质金属蛋白酶3与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法:选择2003-10/2004-03在解放军总医院住院治疗的70例冠心病患者为冠心病组,其中稳定心绞痛12例,不稳定心绞痛20例,发病6h内急性心肌梗死38例。对照组20人为健康体检者。均清晨空腹采肘静脉血5mL,离心分离血清后分为2份置-80℃,检测冠心病组和对照组的外周血血清高敏C反应蛋白、妊娠相关血浆蛋白A、基质金属蛋白酶3水平并进行相关性分析。结果:冠心病组70例及对照组20名均进入结果分析。①妊娠相关血浆蛋白A浓度比较:对照组低于稳定心绞痛组犤(0.7,1.1)mIU/L,(P<0.05)犦。②血清高敏C反应蛋白浓度比较:对照组明显低于不稳定心绞痛组犤(2.0,6.0)mg/L,(P<0.01)犦。③基质金属蛋白酶-3浓度比较:对照组明显低于急性心肌梗死组犤(48.5,63.6)ng/L,(P<0.01)犦。④冠心病患者3种不同类型的3项指标相关分析显示:血清高敏C反应蛋白水平与基质金属蛋白酶-3水平无相关性(r=0.099,P=0.539),与妊娠相关血浆蛋白A水平无相关性(r=0.017,P=0.210),血清基质金属蛋白酶3水平与妊娠相关血浆蛋白A水平有显著相关性(r=0.250,P=0.046)。结论:冠心病的发生与血清高敏C反应蛋白、妊娠相关血浆蛋白A、基质金属蛋白酶-3水平的变化相关联,而动脉粥样硬化斑块的不稳定只与妊娠相关血浆蛋白A及基质金属蛋白酶-3相关。

白细胞介素-1β和白细胞介素-6对妊娠相关血浆蛋白-A表达的影响

目的探讨炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对人冠状动脉平滑肌细胞(human coronary artery smooth muscle cell,HCASMC)表达妊娠相关血浆蛋白-A(pregnancy-associated plasma pro-tein-A,PAPP-A)的影响。方法应用20μg/L的IL-1β、10μg/L的IL-6各自刺激HCASMC,共同培养0、2、4、8、243、6 h后收集细胞。应用不同浓度的IL-1β(0、5、20、40μg/L)I、L-6(0、5、10、50μg/L)刺激HCASMC,共同培养6 h后收集细胞。应用实时定量聚合酶链反应的方法检测细胞内PAPP-A基因的表达量。结果在同剂量IL-1βI、L-6刺激下,PAPP-A的表达量在2 h时就开始发生上调,8 h达高峰,而后开始下降;在不同剂量IL-1βI、L-6刺激下,PAPP-A的表达量在实验剂量范围内随着剂量的加大呈上升趋势(IL-1β:r=0.972,P=0.000;IL-6:r=0.941,P=0.000)。结论炎性因子IL-1βI、L-6能促进HCASMC中斑块稳定相关标记物PAPP-A的表达,可能是炎症在急性冠状动脉综合征发生发展中的重要作用机制之一。

动脉粥样硬化发生过程中C反应蛋白对内皮细胞功能的影响:量效与时效趋势

目的:探讨C反应蛋白对内皮细胞株304细胞释放前列环素、纤溶酶原激活物抑制剂1的影响。方法:实验于2005-01/2005-04在解放军第305医院老年病中心实验室完成。将内皮细胞株304细胞(第131代)以3×104细胞悬液接种到96孔板中,细胞融合生长后换用含0mg/L(对照组),25和50及100mg/L的C反应蛋白Dulbecco改良的Eagle培养基,作用24h,观察C反应蛋白的量效。加入50mg/LC反应蛋白,作用3,6,12,24h,观察C反应蛋白时间效应。用酶联免疫吸附法检测培养液上清液中前列环素的稳定代谢产物6-酮-前列环素F1α、纤溶酶原激活物抑制剂1的水平。结果:①量效关系:C反应蛋白各质量浓度组纤溶酶原激活物抑制剂1水平明显高于对照组(P<0.01),并随C反应蛋白质量浓度增加而增加,尤以100mg/L浓度较25mg/L时增加明显(P<0.05);C反应蛋白各质量浓度组6-酮-前列腺素F1α水平明显低于对照组(P<0.01),并随C反应蛋白质量浓度增加而下降(P<0.01)。②时效关系:C反应蛋白(50mg/L)作用内皮细胞后,随时间延长纤溶酶原激活物抑制剂1水平呈递增趋势(P<0.05～0.01)。作用12h内6-酮-前列腺素F1α水平随时间延长而呈递增趋势(P<0.01),24h明显小于12h(P<0.05);3h时大于对照组(P<0.05),12和24h时明显少于对照组(P<0.01)。结论:C反应蛋白可能通过抑制前列腺环素生成,促进纤溶酶原激活物抑制剂1释放参与急性冠脉综合征的病理生理过程。损伤刺激内皮细胞早期能增加前列腺环素的释放,以提高对损伤的防御,随着时间的延长,防御机制逐渐耗竭,内皮细胞合成前列腺环素被抑制,释放前列腺环素减少。

北京市职业人群血脂现状及其变动趋势

目的 分析2001～2002年北京人群的血脂现状及血脂异常流行率，与1984～1986年类似的研究资料作对比。方法 以31068例政府机关、科教卫生人员为观察对象，男女比6：4。对受检者作问卷调查、体检及查血。血脂指标包括总胆固醇(TC)、低密度与高密度脂蛋白胆固醇(LDL—C与HDL—C)及甘油三酯(TG)。结果 与80年代资料相比，TC、LDL—C与TG水平有明显上升，但血脂的性别差异与随龄变化规律不变、详细统计了血脂异常的年龄标化及不同性别与年龄组的流行率。与美国90年代的资料相比，TC低0．41(男)及0．47(女)mmol／L(男16、女18mg／d1)，LDL—C低0．52(男)及0．39(女)mmol／L(男20、女15mg／d1)，HDL—C显著高于美国人。结论 北京人群血脂TC(LDL—C)上升主要在80年代后期，90年代稳定而略有下降。TG升高幅度较大，目前冠心病血脂危险水平仍明显低于美国人。

超敏C-反应蛋白、MMP-3与TIMP-1在急性冠脉综合征的表达

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)质金属蛋白酶3、基(MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法对58例ACS患者,12例稳定型心绞痛患者及15例正常体检者外周血血清hs-CRP、MMP-3、TIMP-1水平进行检测并进行相关性分析。结果ACS组血清hs-CRP、MMP-3水平与正常对照组的差异具有显著性(P<0.05,P<0.01),急性心肌梗死组患者TIMP-1水平与稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、正常对照组的比较有非常显著性差异(P<0.01)。ACS组间指标相关分析显示,血清hs-CRP水平与MMP-3水平无相关性(r=0.099,P=0.539),与TIMP-1水平有显著相关性(r=0.415,P=0.007),血清MMP-3水平与TIMP-1水平有显著相关性(r=0.333,P=0.033)。结论ACS患者血清hs-CRP、MMP-3、TIMP-1水平升高与ACS的发生关联,提示与动脉粥样硬化(AS)斑块不稳定有关。

白细胞计数质控液的制备及应用

白细胞计数是临床检验中工作量大,影响计数因素较多的项目。为了有效地控制白细胞计数质量,我们参考文献,用健康人红细胞经醛化处理制备成白细胞计数质控液,经半年的实际应用,结果满意,现报告如下:材料与方法一、实验试剂 1.

睾酮对TNF-α作用于内皮细胞表达HO-1的影响

目的观察不同浓度睾酮对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells)ECV-304表达血红素加氧酶-1(HO-1)的影响,初步探讨其作用机制。方法用ELISA法观察不同浓度睾酮及雄激素受体拮抗剂Flutimide、雌激素受体拮抗剂ICI182,780对ECV-304表达HO-1干预作用。结果睾酮在3×10-6,3×10-7,3×10-8,3×10-9mol/L几种浓度下均具有促进TNF-α诱导的ECV-304细胞表达HO-1的量。与3.0×10-8mol/L睾酮干预组相比,予1.0×10-6mol/LICI182,780预处理,ECV-304细胞释放的HO-1的量明显减少,并诱导HO-1的表达呈时间(当t=24h达到最理想的分泌量)、浓度依赖关系。结论睾酮对TNF-α诱导的ECV-304细胞表达HO-1的影响与其浓度有关,生理浓度睾酮对其具有一定的促进作用,而且这种生物学效应是部分通过转化为雌激素后,作用于雌激素受体实现。

Ox-LDL对PLGF作用内皮细胞释放炎症因子的影响

目的探讨ox-LDL对胎盘生长因子-1作用人脐静脉内皮细胞ECV-304释放炎症因子IL-6、MMP-2表达的影响。方法在ox-LDL(25μg/mL)条件下,应用不同浓度的胎盘生长因子-1(20、40、80ng/mL)孵育ECV-304。对照组为单用ox-LDL孵育ECV-304。3h、6h、12h、24h后收集细胞上清液,ELISA法检测内皮细胞相关炎症因子IL-6、MMP-2的表达。结果在氧化损伤条件下,胎盘生长因子-1诱导炎症因子的表达呈时间、浓度依赖关系。结论氧化损伤是动脉粥样硬化的独立危险因素,而PLGF可上调炎症因子的表达,进一步促使疾病的恶化。

硫酸葡聚糖500-镁法测定血清高密度脂蛋白胆固醇

目的为了探讨使用分子量50万的硫酸葡聚糖(DS)-镁代替5万 DS 作为沉淀剂,检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。方法对实验条件进行了研究,选择了只沉淀载脂蛋白 B(apoB)而不沉淀载脂蛋白 A_1(apoA_1)的最适沉淀剂浓度。血清与沉淀剂的体积之比为1:1,促进低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)的沉淀,避免高血脂症患者血清在离心后上清液的混浊。结果该方法结果与 Warnick 等推荐方法及常用磷钨酸-镁法结果完全一致。用美国疾病中心(CDC)的HDL-C 定值血清做了比较,所有结果符合 CDC 的标准。结论用 DS500代替 DS50沉淀 LDL 和VLDL 是完全可行的。

高密度脂蛋白胆固醇直接测定法与硫酸葡聚糖50-镁法比较

目的评价高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）直接测定法在临床应用的可行性。方法将直接测定法与硫酸葡聚糖（ＤＳ５０）－氯化镁沉淀法进行比较，并分析其线性范围、准确度和干扰因素。结果直接法与ＤＳ５０沉淀法相关良好，Ｙ＝０．９２７Ｘ＋０．２１４，ｒ＝０．９６４，ＨＤＬ－Ｃ浓度为２．４５ｍｍｏｌ／Ｌ范围内线性良好，ｒ＝０．９９９，ＨＤＬ－Ｃ浓度两组低、中、高值血清标本（０．８４、１．３１、２．３１；０．９２、１．４２、２．５３ｍｍｏｌ／Ｌ）的批内和批间ＣＶ值分别为２．３８％、１．１５％、２．４７％和３．４８％、０．９９％、２．０６％。浓度为１０．５８ｍｍｏｌ／Ｌ甘油三酯并不影响ＨＤＬ－Ｃ直接测定法。结论ＨＤＬ－Ｃ直接测定法简易快速，结果准确，适于自动化分析。

血清高密度脂蛋白胆固醇均相法测定试剂的研制

目的研制高密度脂蛋白胆固醇均相法测定的试剂。方法利用多聚体和聚阴离子在表面活性剂的作用下对脂蛋白进行选择性遮蔽，仅使高密度脂蛋白中的胆固醇参与胆固醇反应。结果研制的试剂（Ｙ）与推荐方法ＤＳ５０Ｍｇ（Ｘ１）和ＰＴＡＭｇ沉淀法（Ｘ２）相关良好，分别为Ｙ＝１．０４０Ｘ１－０．０６３，ｒ＝０．９８８３；Ｙ＝０．９４４Ｘ２＋０．０７３，ｒ＝０．９６５７。在ＨＤＬＣ浓度为２．８４ｍｍｏｌ／Ｌ以下线性良好，ｒ＝０．９９８２，ＨＤＬＣ低、中、高值血清标本的批内和批间（ＣＶ）值分别为２．０７％、１．８１％、０．８０％和２．７７％、１．９７％、１．７３％，特异性好，平均回收率为９８％，胆红素、血红蛋白等干扰不明显。结论ＨＤＬＣ均相法测定结果的准确性与精密度符合临床要求。

白介素-6对人冠脉平滑肌细胞表达妊娠相关血浆蛋白-A的影响

目的探讨炎症因子白介素石（IL-6）对人冠脉平滑肌细胞表达妊娠相关血浆蛋白A的影响。方法实验于2005年5月至2006年8月在解放军305医院老年病中心实验室完成。人冠脉平滑肌细胞37℃、5％CO2条件下常规培养。实验用5～7代的细胞，按2.5×10^5／mL密度接种于25cm。的培养瓶中，24h后换液，生长接近80％融合时进行如下处理：（1）应用质量浓度为10ng·mL^-1的IL-6刺激人冠脉平滑肌细胞，分别在共同培养0，2，4，8，24，36h后收集细胞。（2）应用不同质量浓度的IL-6（0，5，10，50ng·mL^-1）刺激人冠脉平滑肌细胞，共同培养6h后收集细胞。应用实时荧光定量聚合酶链反应的方法检测细胞内妊娠相关血浆蛋白A基因的表达量。应用SPSS10．0软件进行统计学描述与分析，所得数据用x±s表示，多组间比较用onewayANOVA检验，两两比较应用SNK法检验，并进行pearson相关分析，P〈0．05为差异有显著性意义。结果同剂量白介素-6刺激下，妊娠相关血浆蛋白A的表达量在2h时就开始发生上调，8h达高峰，而后开始下降；在不同剂量白介素-6刺激下，妊娠相关血浆蛋白A的表达量在实验剂量范围内随着白介素-6的剂量加大呈上升趋势。除5ng·mL^-1和10ng·mL^-1组之间差异无显著性意义（P=0.065），其余组问差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论炎症因子白介素-6能促进冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标志物妊娠相关血浆蛋白A的表达，可能是炎症在急性冠脉综合征的发生发展中起重要作用的机制之一。

北京市职业人群血糖水平及高血糖检出率的变化

目的 调查人群空腹血糖水平、血糖随增龄的上升幅度及高血糖检出率。方法 研究对象为北京市政府机关和科教卫生单位工作人员 (包括离退休者 ) ,共计 2 936 5例。资料来源包括问卷调查、全面体检及血液生化检查 ,血糖检查一律用血清 (葡萄糖氧化酶法 )。结果 研究对象以5岁分组。 2 5岁以上各组空腹血糖随年龄逐步上升 ,直至男性 6 5岁组 ( 4 5 3升至 5 5 2mmol/L)或女性70岁组 ( 4 5 5升至 5 4 8mmol/L)。高龄老人 (≥ 80岁 )仍保持较高水平 (男≥ 5 4 6、女≥ 5 2 7mmol/L)。2 0～ 74岁间血糖随年龄上升幅度约为每 10年 0 19～ 0 2 2mmol/L。 5 0岁以下各年龄组的血糖数据近似正态分布 ,2 0至 39岁组血糖的第 5至 95百分位水平为 3 8～ 5 8mmol/L。但 5 0岁以上各组呈明显正偏态 ,主要因为 5 0岁以上组高血糖者较多。本次体检空腹高血糖 (≥ 7 0mmol/L)的检出率也随年龄上升 ,2 0至 39岁组 <1% ,但≥ 6 0岁男性可达 9 7%～ 10 6 % ,女性较低为 6 4 %～ 7 3%。年龄标化的高血糖检出率为 3 4 2 % (男 )和 2 18% (女 )。结论 空腹血糖和高血糖检出率随年龄逐步上升。空腹血糖平均水平男 5 10mmol/L、女 4 97mmol/L。高血糖 (≥ 7 0mmol/L)的年龄标化检出率男女合计为 2 9%。

不同年代北京部分职业人群血脂的增龄变化

目的 了解北京人群的血脂现状及血脂异常流行率。 方法 以 310 6 8例政府机关、科教卫生人员为观察对象 ,男女比 6 :4。对受检者作问卷调查、体检及血液化验。血脂指标包括总胆固醇 (TC)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)及甘油三酯 (TG) ,统计血脂的性别差异与增龄变化 ,血脂异常的年龄标化及不同性别与年龄组的流行率。 结果 与 80年代资料相比 ,TC、LDL C与TG水平有明显上升。与美国 90年代的资料相比 ,TC低 0 4 1(男 )mmol/L及0 4 7(女 )mmol/L ,LDL C低 0 5 2 (男 )mmol/L及 0 39(女 )mmol/L ,HDL C显著高于美国人。 结论 与 80年代相比血脂的性别差异与增龄变化规律不变。北京部分人群血脂LDL C上升主要在 80年代后期 ,90年代稳定而略有下降。TG升高幅度较大 。

血清低密度脂蛋白胆固醇匀相测定法试剂的研制

目的 研制低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)直接法测定的试剂。方法 低密度脂蛋白(LDL)与聚阴离子和表面活性剂Ⅰ形成稳定复合物 ,而非LDL则在缺乏偶联剂条件下被胆固醇酶试剂消除 ,在表面活性剂Ⅱ和色原作用下 ,LDL释放胆固醇并显色。结果 本室研制的试剂 (Y)与聚乙烯硫酸盐 (PVS)沉淀法 (X1)、Friedewald公式计算 (X2 )和日本第一化学试剂 (X3)相关良好 ,分别为Y =1.0 848X1- 0 .2 398;Y =1.0 0 42X2 - 0 .0 4778;Y =1.0 5 98X3- 0 .10 6 7,在LDL C浓度为 2 9.0 6mmol/L以下线性良好 ,r =0 .9998,LDL C低、中、高值血清标本的批内和批间变异系数 (CV)分别为 1.49%、0 .6 8%、0 .40 %和 2 .2 1%、1.41%、0 .81% ,平均回收率为 97% ,胆红素、血红蛋白等干扰不明显。结论自制LDL C直接测定法试剂测定结果的准确度和精密度均符合临床要求。