GPC3抗原表位肽致敏树突状细胞对T淋巴细胞活化的影响

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)抗原表位肽致敏的树突状细胞(DC)对T淋巴细胞活化的影响。方法选用基因型人类白细胞抗原A2阳性的剖宫产妇的胎盘端脐带血50 m L,分离培养DC及T细胞,用人工合成的GPC3抗原表位肽(GPC3_(144-152)、GPC3_(298-306))、冻融Hep G2细胞抗原致敏DC (DC-GPC3_(144-152)组、DCGPC3_(298-306)组、DC-HepG2组、DC组),经致敏DC处理的T细胞随机分为DC-GPC3_(144-152)-T组、DC-GPC3_(298-306)-T组、DC-HepG2-T组、DC-T组,以未经活化的T细胞作对照(T细胞组)。用流式细胞术检测DC表型、T细胞分类及表面趋化因子的表达。结果 GPC3_(144-152)、GPC3_(298-306)抗原表位肽和冻融Hep G2细胞抗原三种致敏方式均能诱导DC呈典型成熟DC的形态,表面均高表达CD83、CD80和CD86抗原,且不同致敏方式之间CD8^+T、CD4^+T淋巴细胞比例差异无统计学意义(P均> 0. 05);与T细胞组比较,GPC3_(144-152)-T组和DC-GPC3_(298-306)-T组CD4+T细胞中Th1细胞比例高(P均<0. 05);与DC-T组比较,DC-GPC3_(144-152)-T组、DC-GPC3_(298-306)-T组、DC-HepG2-T组CCR6表达高(P均<0. 05)。结论 GPC3_(144-152)和GPC3_(298-306)表位抗原肽均能够有效致敏DC,并促进与DC共培养的T淋巴细胞活化。

实时动态活细胞成像系统在单克隆筛选和克隆形成能力检测中的应用

目的利用IncuCyte ZOOM系统筛选肿瘤细胞单克隆和克隆形成能力检测.方法采用差速消化与差速贴壁分离培养原代肿瘤细胞;在有限稀释法基础上,采用IncuCyte ZOOM系统的实时动态追踪和全孔成像技术对肿瘤细胞进行单克隆筛选及克隆形成能力分析.结果从30例肿瘤组织中培养6株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-02至07),进一步从5株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-03至07)中成功筛选出89个持续增殖的单克隆,其中67个克隆扩增培养并冻存;并且通过时序图准确有效地排除了18个不能持续增殖的单克隆和28个由2个及以上细胞组成的多克隆.2例单克隆株(TJ3ZX-06-B11,TJ3ZX-07-H11)克隆形成能力分析表明,14 d时平皿方法的克隆形成率(35.17%,13.17%)高于IncuCyte ZOOM 96孔全孔成像(23.13%,5.51%),且差异有统计学意义(P<0.05);延长至21 d时全孔成像的克隆形成率为(35.63%,13.22%),与平皿方法比较无统计学差异.结论 IncuCyte ZOOM系统能够简便、准确、省时省力地实现单克隆细胞筛选和克隆形成率检测.