流行性乙型脑炎高免阳性血清的制备与应用

为满足乙型脑炎活疫苗的鉴别检验及外源病毒检验需求,以乙型脑炎活疫苗和灭活疫苗为免疫原,通过对SPF鸡进行反复免疫制备乙型脑炎特异性血清。当血清效价满足要求时,以心脏采血法采集血清,经分装、冻干后,开展纯净性检验、噬斑减少中和效价测定、特异性检验、剩余水分测定和均匀性检验,并对乙型脑炎活疫苗进行鉴别检验和外源病毒检验。结果显示:制备的乙型脑炎阳性血清无菌、支原体及外源病毒检验结果均为阴性,与口蹄疫病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和牛病毒性腹泻病毒等均无交叉反应,噬斑减少中和效价大于1:1 000,剩余水分<3%,且10个样品的效价测定结果组内、组间均无明显差异(P<0.05)。结果表明,制备的乙型脑炎阳性血清效价高,剩余水分少,纯净性、特异性、均匀性均良好,可满足乙型脑炎活疫苗的检验需求。

脾虚大鼠胰岛胰多肽免疫阳性物质分布变化

脾虚证的临床表现以消化系统功能障碍为主,其中胰腺外分泌功能减退明显,且伴有食欲与体质量的显著下降。胰多肽(PP)是胰岛周边F细胞分泌的主要胃肠激素,对胰腺外分泌功能与食欲的调节有抑制作用,可导致氧化代谢增强,引起体质量下降。本试验旨在揭示大鼠胰岛胰多肽分泌变化与脾虚证发病之间的关系。笔者以利血平脾虚大鼠模型为研究对象,采用SP染色进行免疫组织化学研究,观察大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质的分布情况。脾虚组与对照组的大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质面积与胰岛面积百分比相比,胰头部分未见明显差异(P>0.05);但脾虚组胰中、胰尾的PP免疫阳性物质所占面积极显著大于对照组(P<0.01)。结果表明,脾虚证大鼠胰岛中胰多肽总分泌量极显著增加。因此,胰多肽的分泌增加是导致脾虚证动物出现胰腺外分泌功能低下、食欲减退以及体质量下降的主要因素。

我国猪用病毒类生物制品质量情况分析及建议

对我国猪用病毒类生物制品基本现状及2008-2017年猪用病毒类生物制品质量情况进行总结,分析了猪用病毒类生物制品质量存在的问题,提出加强动物源性原辅材料质量控制、完善兽用生物制品标准物质、开展外源病毒检验和支原体检验等关键参数检验新方法研究以及制定全行业通用的标准操作程序等提升猪用病毒类生物制品质量的建议。

猪轮状病毒阳性血清(G5型)制备及初步鉴定

采用常见猪病毒抗体阴性仔猪制备了猪轮状病毒G5型阳性血清,经冻干鉴定,其性状、无菌检验、特异性检验、剩余水分测定、真空度测定结果均符合要求,效价高达1∶11482,为我国猪轮状病毒活疫苗或其联苗成分的外源病毒检验、鉴别检验提供阳性血清,以满足疫苗检验需求。

我国宠物用病毒类生物制品质量情况分析与建议

对2008-2020年我国宠物用病毒类生物制品质量情况进行总结,分析了宠物用病毒类生物制品质量检验中发现的问题,提出了完善兽用狂犬病灭活疫苗效力检验方法、加强纯净性检验方法研究、建立以单抗为基础的宠物用标准物质库、加快宠物用制品重点品种研制等提升宠物用病毒类制品质量和研究的建议。

牛病毒性腹泻病毒检测方法研究进展

牛病毒性腹泻(BVD)是一种由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的接触性传染病,可感染不同年龄阶段的牛,其中幼龄牛易感性最高,常导致患病动物出现呼吸系统、消化系统和生殖系统临床症状,并可引起免疫系统抑制。该病在世界范围内流行,是危害全球养牛业的主要疫病之一,我国也不例外。因此,建立快速、准确的检测方法对该病的防控尤为重要。论文从病原学诊断、血清学方法和分子生物学方法对国内外BVDV检测方法进行综述,并对各种方法的优缺点及适用性进行总结归纳,以期为BVD的防控和净化提供参考。

2株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定

牛病毒性腹泻是目前危害我国养牛业发展的重要传染病之一,在我国多个省、自治区、直辖市均有流行。对2头疑似感染牛病毒性腹泻病毒的牛血清样本进行检测、分离病原,并根据E2基因序列确定分离株的基因亚型。将2份血清样本经RT-PCR检测为阳性后,接种MDBK细胞,通过连续传代培养并进行间接免疫荧光测定,成功分离到2株非致细胞病变型(NCP)BVDV分离毒株,分别命名为HN和XJ-2。对2个毒株的E2基因进行克隆及序列测定,并与NCBI上登录的BVDV参考毒株E2基因序列进行同源性比较和遗传进化分析。结果表明,XJ-2株、HN株与BVDV1b亚型JL^(-1)株处于同一分支,核苷酸同源性分别为99.4%和99.3%,均属于BVDV1b亚型。对新疆、河南两地XJ-2和HN株的分离鉴定,可为我国BVDV的分子流行病学研究和防控提供数据参考。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法,利用大肠杆菌表达系统成功表达E2蛋白并纯化,利用纯化后的蛋白作为包被抗原,用方阵法对影响ELISA试验的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。确定E2抗原最佳包被浓度为1μg/mL,最佳血清稀释度为1∶40,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min;最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450nm≥0.255。与血清中和试验和商品化试剂盒进行比较,总符合率分别为98%和96%,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与其它常见牛病毒阳性血清均无交叉反应。本研究成功建立了间接ELISA方法,为进一步用于大批量牛血清样本的抗体检测和流行病学研究奠定了基础。

鼠源细胞TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为对鼠源细胞进行鉴别检测,以鼠线粒体16S rRNA基因序列为靶位点设计特异性引物及探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并评价该方法的特异性及敏感性。结果显示,所建立的检测方法特异性好,针对鼠源细胞基因组荧光定量PCR扩增曲线良好,其他物种来源细胞基因组及生物制品原辅材料未出现特异性扩增曲线;敏感性高,基因拷贝数检出限度为45.3拷贝。本试验建立的荧光定量PCR检测方法能够有效地对鼠源细胞进行快速检测,为细胞质量控制提供了有效方法。

小反刍兽疫病毒感染性cDNA克隆的构建与病毒拯救

小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)是影响全球畜牧业的一种重要病原。本研究旨在建立稳定可靠的PPRV反向遗传操作平台,为解析PPRV致病机理、免疫逃逸机制、病毒复制机制等基础理论研究提供有效的技术平台,同时为开发更加安全、有效的新型疫苗奠定必要的前期基础。通过提取PPRV Clone9株的RNA,采用RT-PCR分6段扩增出PPRV反基因组cDNA,通过酶切、连接出PPRV Clone9株全长反基因组,获得pB-PPRV,同时构建表达PPRV核蛋白(nucleoprotein,N)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和大蛋白(large protein,L)的3个辅助质粒。将pB-PPRV与辅助质粒通过脂质体转染BHK-T7细胞。转染3 d后,冻融3次,感染Vero细胞。传至第二代可观察到明显的细胞病变(CPE)。经间接免疫荧光、Western blot、RT-PCR和序列测定鉴定结果表明,拯救出具有感染性的病毒。拯救病毒(rPPRV-Clone9)在Vero细胞上可稳定传代,增殖动态与亲本病毒相似。本研究成功建立了PPRV Clone9株的反向遗传系统。