海藻酸钠-壳聚糖固定化胃蛋白酶的研究

采用海藻酸钠-壳聚糖包埋交联法对胃蛋白酶进行固定化。以固定化酶的活力回收率为指标,探讨了固定化的条件及固定化胃蛋白酶与游离胃蛋白酶的酶学性质。结果表明:最优固定化条件为,海藻酸钠浓度为3.40%,壳聚糖浓度为3.39%,CaCl2浓度为3.64%,游离酶稀释倍数20倍,交联时间4h,固定化酶回收率74.87%±1.07%;固定化酶的最适温度47℃,最适pH3.5;得到的固定化酶的操作稳定性和热力学稳定性都较好,该固定化酶重复使用5次后,活力仍可以保持62%以上。

大孔树脂对酶解大豆肽脱盐效果影响及其最佳条件研究

本文旨在研究不同种类大孔树脂对酶解大豆肽吸附和解吸过程中脱盐效果的影响及其最佳条件。以酶解大豆肽为研究对象,首先以DA201-C、AB-8、D3520、D4006和NAX-Ⅱ5种不同的大孔吸附树脂进行酶解大豆肽的脱盐效果研究,得出DA201-C树脂对酶解液的脱盐效果最好;并对DA201-C树脂进行静态吸附解析工艺的优化并测定其动态吸附解吸实验,得出最佳条件为:pH4.5,酶解液浓度为60mg/mL,75%乙醇洗脱,脱盐率达到93.23%,肽回收率为88.5%。

不同生长阶段保加利亚乳杆菌关键蛋白酶基因表达变化规律

乳酸菌自身不能直接利用外源蛋白质,必须通过蛋白水解体系水解外源蛋白质,生成供菌体正常生长需要的短肽和游离氨基酸。该研究选择6株保加利亚乳杆菌(KLDS1.0207、1.0501、1.1007、1.9201、1.9203、1.0208)进行脱脂乳发酵,在mRNA转录水平上,应用实时荧光定量PCR技术,探讨保加利亚乳杆菌的蛋白水解体系中关键蛋白酶基因(prtB、oppD、pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)在菌体不同生长阶段表达的动态变化。结果表明,所有菌株生长曲线均呈S型。随着菌体在脱脂乳中的不断生长,蛋白水解活力极显著增强(P<0.01),7个目的基因相对表达量呈现总体上调。6株菌的prtB和oppD基因在对数期的相对表达量极显著高于对照组(4h)(P<0.01)。对数期的胞内肽酶基因(pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)的表达量与对照组(4 h)相比,呈极显著上调(P<0.01),但菌株KLDS 1.0207的pepQ基因在对数期下调,而稳定期上调。由此可见,蛋白水解活力较高的菌株,其生长和产酸特性也较高;发现在脱脂乳中培养保加利亚乳杆菌,其关键蛋白酶基因的表达量呈时间依赖性,且菌株间各蛋白酶基因表达量有较大差异。

大豆活性肽的安全性评价

旨在探讨风味蛋白酶酶解的大豆活性肽的急性毒性和遗传毒性。采用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、彗星试验、小鼠睾丸精母染色体畸变试验对大豆活性肽进行急性毒性分级和遗传毒性研究。试验结果表明,小鼠经口染毒最大耐受量(MTD)为20 g/kg,毒性分级为无毒;Ames试验鼠伤寒沙门菌突变型各菌株在加与不加S9的情况下,试验结果均呈阴性(P>0.05);小鼠骨髓细胞微核试验结果为阴性(P>0.05),各大豆活性肽剂量组动物未见细胞毒性作用;小鼠睾丸精母细胞畸形试验结果表明大豆肽剂量组与阴性对照组相比差异均不显著(P>0.05),且无量效关系。试验结果显示,大豆活性肽是一种安全无毒物质。